1、分分子子生生物物學學2010實實驗驗分子生物學實驗室常用分子生物學實驗室常用儀器設備簡介及操作儀器設備簡介及操作實驗一實驗一 分分子子生生物物學學2010實實驗驗實驗室主要儀器，設備的簡介及使用方法實驗室主要儀器，設備的簡介及使用方法分分子子生生物物學學2010實實驗驗微量移液器微量移液器分分子子生生物物學學2010實實驗驗 微量移液器是連續(xù)可調的、計量和轉移液體的專用儀微量移液器是連續(xù)可調的、計量和轉移液體的專用儀器，其裝有直接讀數容量計。器，其裝有直接讀數容量計。 微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內能連續(xù)微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內能連續(xù)調節(jié)讀數。調節(jié)讀數。 0.5 0.

2、510l 10l 10 10100l100l 20 20200l 200l 100 1001000l1000l常見規(guī)格常見規(guī)格分分子子生生物物學學2010實實驗驗量液的操作步驟：量液的操作步驟：第一停點第二停點A A 保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點；保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點；B B 微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C C 保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢 慢壓下按鈕至第一停點；慢壓下按鈕至第一停點；D D 壓至第二停點把溶液完全釋放出；壓至第二停點把溶液完全

3、釋放出；E E 釋放按鈕回原狀。釋放按鈕回原狀。 分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗臺式高速離心機臺式高速離心機離心機的分類離心機的分類 低速低速：每分鐘幾千轉：每分鐘幾千轉 高速高速：每分鐘：每分鐘1 3萬轉萬轉 超速超速：每分鐘：每分鐘3萬轉以上萬轉以上 分分子子生生物物學學2010實實驗驗低速：細胞等大分子低速：細胞等大分子 高速：高速：DNADNA，蛋白等，蛋白等 超速超速: : 病毒，蛋白，細胞器等病毒，蛋白，細胞器等基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離

4、心技術的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術 本實驗室所用離心機本實驗室所用離心機: :臺式高速離心機（臺式高速離心機（ ThermoThermo ），配有），配有角式轉頭：角式轉頭：24241.5ml1.5ml；極限轉速；極限轉速13000rpm ;13000rpm ;臺式低溫高速離臺式低溫高速離心機（心機（sigma),sigma),極限轉速極限轉速20000rpm20000rpm。離心機的功能：離心機的功能：分離，純化分離，純化分分子子生生物物學學2010實實驗驗臺式高速離心機使用步驟臺式高速離心機使用步驟分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗PCR儀儀分

5、分子子生生物物學學2010實實驗驗 PCR儀主要應用于基礎研究和應用研究等許多領域，儀主要應用于基礎研究和應用研究等許多領域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等。學等。 PCR儀，也稱儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，能使熱循環(huán)儀、基因擴增儀，能使一對寡核苷酸引物結合到正負一對寡核苷酸引物結合到正負DNA鏈上的靶序列兩鏈上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數為百萬倍的靶序列側，從而酶促合成拷貝數為百萬倍的靶序列DNA片片段，它的每一循環(huán)包括段，它的每一循環(huán)包括DNA變性、復性、延伸變性、復性、延伸三個三個反應。反應。分分子子生生物物學

6、學2010實實驗驗操作程序操作程序: :1 1）開機：打開電源，顯示主界面；）開機：打開電源，顯示主界面；2 2）創(chuàng)建程序：使用）創(chuàng)建程序：使用”createcreate”輸入新程序（包括輸入新程序（包括PCRPCR循循 環(huán)數，預變性、變性、復性、延伸的時間和溫環(huán)數，預變性、變性、復性、延伸的時間和溫 度），保存程序（包括用戶名和方法名）度），保存程序（包括用戶名和方法名）; ;3 3）放入樣品，蓋上蓋子）放入樣品，蓋上蓋子; ;4 4）在所建用戶名下按）在所建用戶名下按“run”run”鍵，找到設定的程序，鍵，找到設定的程序， 按按“startstart”鍵鍵啟動程序啟動程序; ;5 5）運

7、行結束后按）運行結束后按“stopstop”鍵停止運行，取出樣品，關鍵停止運行，取出樣品，關閉電源。閉電源。分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗FR-980生物電泳圖像分析系統(tǒng)生物電泳圖像分析系統(tǒng)分分子子生生物物學學2010實實驗驗系統(tǒng)簡介：系統(tǒng)簡介： 系統(tǒng)可以通過紫外系統(tǒng)可以通過紫外/ /可見光分析裝置及透光掃描儀直可見光分析裝置及透光掃描儀直接獲得核酸、蛋白質凝膠電泳圖像。系統(tǒng)配置有接獲得核酸、蛋白質凝膠電泳圖像。系統(tǒng)配置有SmartViewSmartView生物電泳圖像分析軟件，可以進行密度掃描、生物電泳圖像分析軟件，可以進行密度掃描、密度定量、分子量

8、計算等電泳分析。此外，該系統(tǒng)含有密度定量、分子量計算等電泳分析。此外，該系統(tǒng)含有多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰的圖像。的圖像。分分子子生生物物學學2010實實驗驗操作步驟：操作步驟：1）將電泳樣品放入分析裝置中將電泳樣品放入分析裝置中2）打開電腦，運行打開電腦，運行Smart View 軟件，單擊軟件，單擊“Import”鍵進入鍵進入 圖像獲取項目欄，圖像獲取項目欄，選擇選擇“獲取視頻圖像獲取視頻圖像”鍵，進鍵，進行圖像采集行圖像采集3）選選 擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調節(jié)好圖像大擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調節(jié)好

9、圖像大 小、亮度及焦距小、亮度及焦距4）單擊單擊“采集圖像采集圖像”鍵，根據圖像質量選擇好優(yōu)化攝影時間鍵，根據圖像質量選擇好優(yōu)化攝影時間 （一般情況下在（一般情況下在12秒左右秒左右），即開始采集。，即開始采集。1 1、圖像采集、圖像采集分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗2、圖像保存、圖像保存 單擊單擊“System 鍵鍵”選擇選擇“另保存圖像為另保存圖像為”鍵，出現一個鍵，出現一個“圖像文圖像文件登記件登記”窗口，窗口，輸入標題，實驗人，實驗日期，實驗摘要等輸入標題，實驗人，實驗日期，實驗摘要等信息，信息，按按“保存保存”鍵完成圖像文件登記鍵完成圖像文件

10、登記，同時出現，同時出現“另保存圖另保存圖像為像為”窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。 3、關閉操作系統(tǒng)、關閉操作系統(tǒng)（1）關閉紫外）關閉紫外/可見光?？梢姽?。（2）退出軟件界面。）退出軟件界面。（3）關閉紫外與可見分析裝置的電源。）關閉紫外與可見分析裝置的電源。分分子子生生物物學學2010實實驗驗注意事項：注意事項：1、 不要戴不要戴“臟臟”手套觸摸電腦鼠標、鍵盤及其它位置；手套觸摸電腦鼠標、鍵盤及其它位置； 2、 不要戴不要戴“臟臟”手套觸摸倉門和燈箱電源開關；手套觸摸倉門和燈箱電源開關； 3、 不要戴不要戴“臟臟”手套觸摸外接電源開關；手套觸摸外接電源開

11、關； 4、在圖像獲取過程中，若通過軟件打開紫外在圖像獲取過程中，若通過軟件打開紫外/可見光，則可見光，則 必須再通過軟件關閉，若通過紫外與可見分析裝置上必須再通過軟件關閉，若通過紫外與可見分析裝置上 打開紫外打開紫外/可見光，則從分析裝置上關閉，嚴禁互用，可見光，則從分析裝置上關閉，嚴禁互用， 導致紫外燈長亮。導致紫外燈長亮。分分子子生生物物學學2010實實驗驗電泳儀電泳儀DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）分分子子生生物物學學2010實實驗驗操作程序：操作程序：1）電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端連接（極）電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流

12、輸出端連接（極 性不要接反）；性不要接反）；2）打開電源，設置參數（選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電）打開電源，設置參數（選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電 流范圍）；流范圍）；3）按）按“啟動啟動”啟動程序（輸出為高電壓，注意安全）；啟動程序（輸出為高電壓，注意安全）；4）電泳結束，按）電泳結束，按“停止停止”鍵終止程序。鍵終止程序。分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗使用及性能使用及性能：搖床（振蕩器）廣泛用于對搖床（振蕩器）廣泛用于對溫度和振蕩頻率有較高要求溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學反應以及酶和組織生物化學反應以及酶

13、和組織研究等。實驗室常用的液體研究等。實驗室常用的液體搖勻，微生物、細菌和細胞搖勻，微生物、細菌和細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)。恒溫氣浴搖床恒溫氣浴搖床SHK-99-SHK-99-型臺式空氣恒溫搖床型臺式空氣恒溫搖床分分子子生生物物學學2010實實驗驗操作程序：操作程序：分分子子生生物物學學2010實實驗驗超凈工作臺超凈工作臺使用及性能：使用及性能：超凈工作臺為分子生物超凈工作臺為分子生物學無菌操作提供可能，學無菌操作提供可能，分為垂直送風和水平送分為垂直送風和水平送風兩種。風兩種。分分子子生生物物學學2010實實驗驗 超凈臺由三相電機作鼓風動力，空氣通過由超凈臺由三相電機作鼓風動力，空氣通過由特制的微孔泡

14、沫塑料片層疊合組成的特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清超級濾清器器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣高效的特殊空氣”，能夠，能夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，同時也不防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，同時也不會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，可以保持工作人員就在這樣的無菌條件下操作，可以保持無菌材料在轉移接種過程中不受污染。無菌材料在轉移接種過程中不受污染。 分分子子生生物物學學2010實實驗驗臺面清

15、潔消毒臺面清潔消毒進行無菌操作進行無菌操作清理工作臺面清理工作臺面紫外消毒紫外消毒3030分鐘分鐘關閉紫外燈、電源關閉紫外燈、電源操作程序：操作程序：1 1）工作臺面上，不要存）工作臺面上，不要存 放不必要的物品，以放不必要的物品，以 保持工作區(qū)內的潔凈保持工作區(qū)內的潔凈 氣流不受干擾。氣流不受干擾。操作時一定注意關掉操作時一定注意關掉 紫外，防止對實驗人紫外，防止對實驗人 員造成傷害員造成傷害注意事項：注意事項：分分子子生生物物學學2010實實驗驗滅菌鍋滅菌鍋使用及性能：使用及性能： 細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關實驗所用細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關實驗所用的試劑、器皿及實驗用具，應嚴格滅菌；

16、的試劑、器皿及實驗用具，應嚴格滅菌； 對于經過導入對于經過導入DNADNA重組分子的菌株，操作后重組分子的菌株，操作后必須進行嚴格的高壓消毒滅活處理必須進行嚴格的高壓消毒滅活處理 。分分子子生生物物學學2010實實驗驗1 1）開蓋：轉動手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒）開蓋：轉動手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上；至板上；2 2）通電：打開控制面板上電源開關，若水位低則紅燈亮；）通電：打開控制面板上電源開關，若水位低則紅燈亮； 3 3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過200mm200mm100mm100mm100mm100mm為宜，

17、各包裝之間留有間隙，利于蒸為宜，各包裝之間留有間隙，利于蒸汽穿透，提高滅菌效果；汽穿透，提高滅菌效果； 3 3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內，旋轉手輪，壓緊鍋蓋；）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內，旋轉手輪，壓緊鍋蓋；4 4）滅菌：）滅菌：121121， 20min20min；如為液體，液體必須裝在可耐；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，不宜超過高溫的玻璃器皿中，不宜超過2/32/3；5 5）滅菌結束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。）滅菌結束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。操作程序：操作程序：分分子子生生物物學學2010實實驗驗1 1）如是手動的滅菌鍋，滅菌過程中，應注意排）如是手動

18、的滅菌鍋，滅菌過程中，應注意排 凈鍋內冷空氣，否則會影響滅菌效果。凈鍋內冷空氣，否則會影響滅菌效果。2 2）滅菌結束后，要等溫度降為）滅菌結束后，要等溫度降為“0 0”，才可打開滅，才可打開滅 菌鍋鍋蓋；菌鍋鍋蓋；3 3）高壓蒸汽滅菌時，須保持高溫高壓，因此必）高壓蒸汽滅菌時，須保持高溫高壓，因此必 須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則易發(fā)生意外須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則易發(fā)生意外 事故。事故。 注意事項：注意事項：分分子子生生物物學學2010實實驗驗 瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測實驗二 分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗一一. . 實驗目的實驗目的 掌握瓊脂

19、糖凝膠電泳的原理掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理; ; 學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。分分子子生生物物學學2010實實驗驗二二. 實驗原理實驗原理 瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。瓊脂糖的濃度。 DNA分子在堿性環(huán)境中帶分子在堿性環(huán)境中帶負電荷負電荷，在外加電場作，在外加電場作用下向用下向正極泳動正極泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有有電荷效應電荷效應與與分子篩效應分子篩效應。DNA分子量及構型不同，分子量及構型不同，其泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電其泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應。，主要是利用分子篩效應。分分子子生生物物學學2010實實驗驗分分子子生生物物學學2010實實驗驗附 注：1影響影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素：在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素： 1) DNA分子大小分子大小 2) 瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的DNA Agarose： 0.5%：1-30 kb； 0.7%： 0.8-12 kb； 1.2%: