1、生物選修3 核心知識必背、基因工程的工具是：限制酶、DNA連接酶、運載體，工具酶是：限制酶、DNA連接酶、運載體有質(zhì)粒、動植物病毒、入噬菌體的衍生物。最常用的是質(zhì)粒。、基因工程的步驟是：目的基因的獲取、基因表達載體的構(gòu)建（核心步驟）、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。、獲取目的基因的方法：從生物體內(nèi)直接提取，人工合成，從基因文庫中提取、PCR中文名稱是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。利用的原理是DNA雙鏈復(fù)制原理。利用的酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。、基因表達載體最基本的四個結(jié)構(gòu)是目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細(xì)胞

2、篩選出來。、將目的基因?qū)胫参镉棉r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法；動物細(xì)胞用顯微注射法、微生物細(xì)胞用感受態(tài)細(xì)胞法、檢測目的基因是否插入染色體DNA用DNA分子雜交技術(shù)、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA用分子雜交技術(shù)、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原-抗體雜交法、除了分子檢測外，有時還需要時行個體性狀的檢測鑒定，例如抗蟲接種實驗、目的基因的受體細(xì)胞通常用微生物的原因是，繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少等。、蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工程，操作對象是基因、植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果是：獲得雜種植株。、制備原生質(zhì)體的方法是用到纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁、植物體細(xì)胞雜交的原理是細(xì)胞膜的流動

3、性和植物細(xì)胞的全能性。、植物體細(xì)胞雜交育種的優(yōu)點是克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙、促進原生質(zhì)體融合的方法，物理法：離心、振動、電激?；瘜W(xué)法：用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑。、融合完成的標(biāo)志是新細(xì)胞壁的形成、大量生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)物（紫草素、人參皂苷、紫杉醇）培養(yǎng)到愈傷組織，人工種子培養(yǎng)到胚狀體或者是幼芽階段。、用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理（消化）動物組織成為單細(xì)胞。動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件無菌無毒的環(huán)境 營養(yǎng) 溫度和PH 氣體環(huán)境、動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中需加入血清、血漿等天然成分。、動物細(xì)胞培養(yǎng)中的CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH。、核移植的受體細(xì)胞為減數(shù)第二次分裂中期的次級卵母細(xì)胞， 、動物細(xì)胞融合最主要的用途是

4、生產(chǎn)單克隆抗體、動物細(xì)胞融合中促進融合可以用物理法（離心、振動、電激）和化學(xué)法（聚乙二醇），特有的是還可以用滅活的病毒。、單克隆抗體制備流程中，兩次篩選的方法和目的分別是：第一次篩選是用選擇性培養(yǎng)基篩選，目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次篩選是用專一抗體檢測（抗原抗體雜交法），目的是篩選出能夠產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞。、雜交瘤細(xì)胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體、單克隆抗體最主要的優(yōu)點是：特異性強、靈明度高，并可大量制備精子的變形：細(xì)胞核變成精子頭的主要部分；高爾基體發(fā)育成頭部的頂體；中心體演變成精子的尾；線粒體集中在尾的基部形成線粒體鞘；細(xì)胞內(nèi)的其他物質(zhì)濃縮為球狀，叫做原生質(zhì)滴，

5、最后脫落。精子和卵子在發(fā)生上的重要區(qū)別：卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲備，是在出生前完成的。過程：（1）受精前的準(zhǔn)備階段1：精子獲能：場所:雌性動物的生殖道（子宮和輸卵管）（2）受精前的準(zhǔn)備階段2：卵子的準(zhǔn)備：發(fā)育到減數(shù)第二次分裂中期（3）受精階段：a.精子穿越放射冠：頂體反應(yīng)（頂體酶）b.精子穿越透明帶：透明帶反應(yīng)（阻止多精入卵的第一道屏障）c.進入卵黃膜：卵黃膜封閉作用（阻止多精入卵的第二道屏障）d. 雌、雄原核形成（雄原核的體積略大于雌原核）e. 雌雄原核融合 受精的標(biāo)志：在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個極體時 二、哺乳動物胚胎發(fā)育過程動物胚胎發(fā)育的基本過程：受精卵卵裂期桑椹胚囊胚原腸胚卵裂期：進行有絲分裂，細(xì)胞數(shù)量增加，胚胎總體積不增加，每個細(xì)胞體積減小，有機物總量減少。桑椹胚：每一個細(xì)胞都具有全能性囊胚：細(xì)胞開始分化的時期，分化出滋養(yǎng)層、內(nèi)細(xì)胞團原腸胚：繼續(xù)分化3、 胚胎移植技術(shù)生理學(xué)基礎(chǔ)：供體和受體具有相同的生理環(huán)境早期胚胎處于游離狀態(tài)，為胚胎的收集提供了可能受體對移入子宮的胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥供體胚胎與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系，且移入受體的胚胎的遺傳物質(zhì)不會改變注：沖卵指從子宮中沖出早期胚胎超數(shù)排卵、同期發(fā)情常用激素：促性腺