1、實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八 細(xì)菌鑒定中常用的生化實(shí)驗(yàn)細(xì)菌鑒定中常用的生化實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、淀粉實(shí)驗(yàn)、吲哚實(shí)驗(yàn)、M.R.及V.P的原理及方法。l掌握以上實(shí)驗(yàn)的用途。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理l淀粉實(shí)驗(yàn)l糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)l 發(fā)酵后產(chǎn)生的有機(jī)酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 溴甲酚紫變色范圍pH5.26.8, pH6.8紫色 l 發(fā)酵后產(chǎn)生的氣體： 甲烷、氫、二氧化碳等杜氏小管內(nèi)有氣泡，產(chǎn)氣漂浮糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)景象二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理lM.R.及V.P實(shí)驗(yàn)l 甲基紅實(shí)驗(yàn)是用來檢測由葡萄糖產(chǎn)生的有機(jī)酸，如甲酸、乙酸、l乳酸等。當(dāng)細(xì)菌代謝糖產(chǎn)生酸時(shí)，培育基就會(huì)變酸，使參與培育基l的甲基紅指示劑由橘黃色變?yōu)榧t

2、色。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理lM.R.及V.P實(shí)驗(yàn)l VP實(shí)驗(yàn)是用來測定某些細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的才干，如丙酮酸。丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理l吲哚實(shí)驗(yàn)l 吲哚實(shí)驗(yàn)是用來檢測吲哚的產(chǎn)生。有些細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，構(gòu)成紅色的玫瑰吲哚。三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材l培育基l1、淀粉培育基 :500ml分裝于四個(gè)三角瓶，包扎，121126滅菌30minl蛋白胨 10g 可溶性淀粉 2gl氯

3、化鈉 5g 瓊脂 1520gl牛肉膏 5g 水 1000ml lpH 7.2l2、糖發(fā)酵培育基：300ml分裝于28只試管，包扎，112115滅菌30minl蛋白胨 10g 氯化鈉 5g l葡萄糖 10g 水 1000mll pH 7.4 溴甲酚紫溶液1.6%水溶液1ml l3、M.R.及V.P實(shí)驗(yàn):600ml分裝于56只試管，包扎，112115滅菌30minl蛋白胨 5g K2HPO4 5g l葡萄糖 5g 水 1000ml lpH 7.27.4l4、吲哚培育基:300ml分裝于28只試管，包扎，121126滅菌30minl蛋白胨 10g 氯化鈉 5g l水 1000ml pH 7.6三、實(shí)

4、驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材l菌種l1、大腸桿菌l2、枯草芽孢桿菌l3、未知菌l其他l1、試管6組 28個(gè)/組每個(gè)試管帶一個(gè)德漢氏小管l2、平皿2組 16個(gè)/組l3、三角瓶2組 8個(gè)/組四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟一預(yù)備實(shí)驗(yàn)器材，配制培育基一預(yù)備實(shí)驗(yàn)器材，配制培育基試驗(yàn)名稱被接菌種1被接菌種2被接菌種3對照（管數(shù)）1.淀粉水解實(shí)驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種2.糖發(fā)酵大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種3.MR試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種4.VP試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種5.吲哚試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌葡萄球菌1支/每組不接種三結(jié)果察看三結(jié)果察看l葡萄糖/乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，H2S產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)直接察看。lVP實(shí)驗(yàn)：去塞，加40KOH 15滴，振蕩，再加等量奈酚，振蕩，37振蕩培育30min，察看。lMR實(shí)驗(yàn)：加甲基紅試劑23滴，察看。l吲哚實(shí)驗(yàn)：加1ml乙醚作用是萃取出吲哚。振蕩，靜止片刻使分層，沿管壁漸漸參與吲哚試劑10滴，察看。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析試驗(yàn)名稱1.淀粉水解實(shí)驗(yàn)2.糖發(fā)酵3.MR試驗(yàn)4.VP試驗(yàn)5.吲哚試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌金黃色葡萄球菌對照六、思索題六、思索題1、糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)中，所安裝的杜