1、 CT LogX0與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，通過已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)未知樣品Ct值，就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出未知樣品初始模板量。 該方法的前提條件是目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率相同且都為1，在試驗(yàn)開始前必須分別對目的基因和內(nèi)參基因作標(biāo)準(zhǔn)曲線，看兩者擴(kuò)增效率的差別，假如兩者擴(kuò)增效率之間的差異小于0.1，就可以用該方法分析。而且在接下來的實(shí)驗(yàn)中，無需再做標(biāo)準(zhǔn)品。 該方法要求嚴(yán)格的重復(fù)，因?yàn)镃T值的差異只要有很小的變化，測得的結(jié)果就會有很大的差別。 該方法特別適合于樣品量不大，但是檢測的基因種類很多的情況。 探針中GC含量的差異對定量PCR反應(yīng)效率的影響1 ATGAACTACG TT

2、GGACAGTT AGCAGGGCAA GTGTTTGTAA CTGTGAAGGA GCTCTATAAG61 GGACTAAACC CAGCCACGCT GTCGGGATGT ATCGATATAA TTGTTGTACG TCAGCCAGAT121 GGGAATCTTC AGTGTTCTCC ATTCCATGTA CGCTTTGGGA AAATGGGAGT TCTGCGTTCC181 AGGGAGAAAG TGGTTGACAT AGAAATTAAT GGAGAGGCTG TAGATTTGCA CATGAAGCTA241 GGAGACAATG GAGAAGCCTT TTTCGTCCAG GAGAT

3、GGATA ACAATCAGGA GGTAATTCCT301 TATCATCTGT CTACGTCCCC CATCCTGTCT GAGGGAACTG CGTTAATGGA AGCTCAGCTG361 AAGAGAAACT CAATTGACAG GATAAGAAAC CTGGACAGCA GTGTATCTTC ACAAGTACCA421 CCCCAAGCTC ATGGATCCCA GCCTGGTACT GAAACATCTC CAGCCTGTAG CTCTGTGAAA481 AAGAGGAGGA AAAAGAGGAG GAAGTCTACC CACAAAATAG ACAGCTTAAA AAGAGAA

4、GAC541 ATTGGAGATA CATCAGAAGA TGAAGACATG TTTCCTATAG AGATTAGCTC AGAGGAAGAA601 AAGGAACAAT TGGACAATTC AAGGATTCTT GTTCCAGATG TGTTTGTTGA TGAAGTATCT661 GATATAAAGG CTCCTGCTGT TTCTGCTTAT TCTCAGTCTT CATCTTACCC TCGTTCGGAT721 GGAGAATGGT CACCCATTCA AAGTAAGCCC ATAGATTACA CAGGGCAATC CTCTCTTCTC定量PCR反應(yīng)體系普通PCR結(jié)果電泳圖添加熒光基團(tuán)后PCR結(jié)果電泳圖優(yōu)化后的Taqman探針體系實(shí)驗(yàn)結(jié)果，定量PCR實(shí)驗(yàn)方案定量PCR實(shí)驗(yàn)方案熒光染料法Taqman探針法雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量PCR實(shí)驗(yàn)方案同一cDNA樣品的三個(gè)重復(fù)通過定量PCR檢測，測得該陰性樣品中含有227個(gè)初始模板。假如這個(gè)污染屬于是頑固的未知污染，可以用正常樣品測得的初始模板量減