1、消毒劑消毒效果的驗證組長：*組員：*編號：201412151135版次：2014年第1版目錄1 .概述31.1 消毒劑31.2 消毒劑使用說明32 .驗證目的33 .驗證內(nèi)容44 .驗證組織44.1 驗證小組44.2 驗證委員會45 .驗證實施步驟55.1 驗證前準(zhǔn)備55.2 驗證所需文件資料55.3 懸液法定量殺滅試驗65.4 對裸手消毒效果試驗75.5 消毒劑對佩戴手套后的消毒效果驗證95.6 消毒劑對物體表面消毒效果驗證115.7 消毒劑消毒效果驗證結(jié)論156 .驗證主要依據(jù)157 .驗證合格標(biāo)準(zhǔn)157.1 判斷標(biāo)準(zhǔn)157.2 現(xiàn)場考察試驗合格標(biāo)準(zhǔn)158 .再驗證周期15附錄16附錄一驗

2、證方案會審記錄16附錄二驗證方案修改申請及批準(zhǔn)書17附錄三漏項和偏差處理t己錄18附錄四懸液法定量殺滅試驗記錄19附錄五消毒劑對佩戴手套后人員手現(xiàn)場試驗記錄221.概述1.1 消毒劑消毒劑的作用原理：破壞細(xì)胞膜類，阻斷細(xì)胞食物攝取和廢物排泄，鈍化關(guān)鍵酶。以下是幾種常用的消毒劑：(1)新潔爾滅(苯扎澳俊)：是一種常用的季錢鹽類消毒劑，在濃度較低時即可有抑菌的作用；當(dāng)濃度較高時，可以殺滅多種細(xì)菌繁殖體和部分的病毒，但是不能殺滅細(xì)菌芽抱，屬于低效消毒劑。(2) 75%乙醇：適用于一般物體表面消毒以及手和皮膚的消毒，它無法殺滅細(xì)菌芽抱和病毒。(3)優(yōu)潔：屬于長效、強(qiáng)效、廣譜殺菌劑，是一種新型消毒劑，其

3、有效成分為復(fù)合季俊鹽和六亞甲基四胺，可有效快速地殺滅細(xì)菌繁殖體、芽抱、真菌和部分病毒等，各種微生物對其均無抗藥性，抑菌時間較長，可用于一般物體表面消毒，穩(wěn)定性好，無腐蝕性，無毒無害，并且由于殺菌時不受蛋白質(zhì)及有機(jī)物的干擾，故使用衰減周期長，可循環(huán)使用，相對使用成本低。本次驗證以優(yōu)潔消毒劑的殺滅效果為主，同時也可根據(jù)此驗證方案對75%乙醇、新潔爾滅等消毒劑的殺滅效果進(jìn)行評價。1.2消毒劑使用說明對于不同的消毒對象，應(yīng)使用不同的消毒劑，并制訂消毒程序，消毒程序中應(yīng)明確規(guī)定：(1)消毒劑的濃度及配制方法；(2)消毒劑使用的條件；(3)消毒使用的設(shè)備、設(shè)施；(4)消毒操作的詳細(xì)步驟；(5)消毒周期；(

4、5)消毒效果的監(jiān)測方法。制訂的消毒程序的消毒效果應(yīng)經(jīng)過驗證后，才能批準(zhǔn)使用。本驗證具體規(guī)定了評價消毒劑消毒效力的生物學(xué)檢測方法及其效果評價方法。2 .驗證目的藥品在生產(chǎn)過程中會遭到來自微生物的污染，因此必須要采取一定措施使微生物污染處于受控狀態(tài)或者完全被消除，這就需要對消毒劑消毒效果進(jìn)行驗證以確定相應(yīng)的方案來處理這些問題。在對消毒劑進(jìn)行消毒效果驗證的過程中，主要是要用特定的微生物與消毒劑在規(guī)定的使用濃度下接觸規(guī)定的時間后，對微生物進(jìn)行培養(yǎng)計數(shù)，考察該消毒劑的消毒效果，確定消毒劑消毒后的最長有效時間，并對消毒劑對微生物的殺滅效果進(jìn)行評價。確認(rèn)潔凈區(qū)按照規(guī)定的清潔、消毒程序進(jìn)行清潔消毒后，能夠達(dá)到

5、防止交叉污染的目的，并在消毒有效期內(nèi)能確保達(dá)到生產(chǎn)工藝所需要的效果。本次驗證以優(yōu)潔消毒劑的殺滅效果為主，同時也可根據(jù)此驗證方案對75%乙醇、新潔爾滅等消毒劑的殺滅效果進(jìn)行評價。3 .驗證內(nèi)容消毒劑消毒效果驗證包括兩項考察：實驗室考察和現(xiàn)場考察。實驗室考察通常以懸液定量法為主，且試驗須重復(fù)3次，而現(xiàn)場考察可用來評估消毒劑對相應(yīng)設(shè)施的實際消毒效果。在消毒劑消毒效果試驗中，消毒方法和消毒對象有很多。常用的方法有：噴灑法，浸泡法，擦拭法等。常見的對象有：皮膚，潔凈區(qū)的地面、墻面，設(shè)備表面等。此次試驗我們采用的消毒方法為噴灑法，消毒對象為人員裸手皮膚、人員佩戴無菌手套后的手套表面和物體表面。根據(jù)消毒對象

6、所制定相應(yīng)的試驗方案有：懸液法定量殺滅試驗、消毒劑對裸手消毒現(xiàn)場試驗、載體噴霧定量殺菌試驗、消毒劑對佩戴手套后的手消毒現(xiàn)場試驗以及消毒劑對物體表面現(xiàn)場鑒定試驗。通過以上幾種試驗來對消毒劑消毒的效果進(jìn)行驗證。4 .驗證組織4.1 驗證小組表4-1驗證小組及職責(zé)人員部門職務(wù)職責(zé)組長質(zhì)保部部門負(fù)責(zé)人(1)負(fù)責(zé)成立驗證小組，明確各驗證成員職責(zé)(2)負(fù)責(zé)組織起草驗證方案、驗證記錄和驗證報告(3)負(fù)責(zé)驗證方案、驗證記錄和驗證報告的審核工作組員質(zhì)保部驗證管理員(1)負(fù)責(zé)起草驗證方案(2)負(fù)責(zé)對試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析(3)負(fù)責(zé)起草驗證報告質(zhì)保員(1)負(fù)責(zé)現(xiàn)場取樣(2)負(fù)責(zé)驗證過程在線監(jiān)督質(zhì)檢部部門經(jīng)理(1)負(fù)責(zé)

7、組織對樣品的檢驗(2)負(fù)責(zé)驗證所需試劑、試液等的準(zhǔn)備。質(zhì)檢部質(zhì)檢員(1)負(fù)責(zé)樣品的檢驗(2)負(fù)責(zé)檢驗數(shù)據(jù)的收集、整理。生產(chǎn)部部門經(jīng)理負(fù)責(zé)組織現(xiàn)場操作，確保驗證按進(jìn)度進(jìn)行。衛(wèi)生員負(fù)責(zé)消毒液的配制和發(fā)放。各工序操作人員(1)負(fù)責(zé)潔凈廠房的清潔(2)負(fù)責(zé)按消毒程序進(jìn)行消毒。設(shè)備部部門經(jīng)理(1)負(fù)責(zé)儀器、儀表、量具的校正(2)負(fù)責(zé)驗證所用儀器、設(shè)備的安裝、調(diào)試，并做好相應(yīng)的記錄(3)負(fù)責(zé)純化水的供給。4.2 驗證委員會4.2.1 人員組成：由企業(yè)質(zhì)量副總、生產(chǎn)副總及生產(chǎn)部、質(zhì)量保證部、質(zhì)量檢驗部、設(shè)備動力部經(jīng)理或主管組成。4.2.2職責(zé)：負(fù)責(zé)驗證方案的審批；負(fù)責(zé)驗證的協(xié)調(diào)工作，以保證驗證方案的順利實施

8、;負(fù)責(zé)驗證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核；負(fù)責(zé)驗證報告的審核；負(fù)責(zé)確定該項驗證的再驗證周期；負(fù)責(zé)驗證證書的發(fā)放。5 .驗證實施步驟5.1 驗證前準(zhǔn)備在進(jìn)行消毒劑消毒效果驗證前，潔凈廠房空氣凈化系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)驗證合格并正常運行，設(shè)備動力部應(yīng)提供潔凈廠房空氣凈化系統(tǒng)的驗證報告、空氣凈化系統(tǒng)操作程序；與驗證相關(guān)的各種設(shè)備、儀器均需通過相應(yīng)驗證，所需儀表、計量器具均需校驗合格并具備校驗證書。5.2 驗證所需文件資料表5-1驗證所需的文件資料及存放處資料名稱編號存放處活菌數(shù)檢測操作規(guī)程ZL-03-066GMP菌落計數(shù)操作規(guī)程ZL-03-070GMP辦公室培養(yǎng)基配制操作規(guī)程ZL-03-073GMP辦公室培養(yǎng)基配制、使用管理規(guī)

9、程ZL-03-110GMP辦公室消毒劑配制操作規(guī)程WS-04-029GMP辦公室消毒劑的使用操作規(guī)程WS-04-030GMP辦公室致病菌陽性菌株傳代操作規(guī)程ZL-03-075GMP辦公室實驗器具清洗操作規(guī)程ZL-03-087GMP辦公室實驗器具滅菌、消毒及使用操作規(guī)程ZL-03-088GMP辦公室進(jìn)出微生物限度實驗室操作規(guī)程ZL-03-259GMP辦公室CHK型顯微鏡操作規(guī)程SB-03-153GMP辦公室厭氧罐操作規(guī)程SB-03-156GMP辦公室MS1型振蕩器操作規(guī)程SB-03-381GMP辦公室BL610型電子天平操作規(guī)程SB-03-324GMP辦公室SKP-02B型電熱恒溫箱操作規(guī)程SB

10、-03-375GMP辦公室SKP-02B型電熱恒溫箱清潔規(guī)程SB-03-376GMP辦公室微生物實驗室清場操作規(guī)程ZL-03-064GMP辦公室破傷風(fēng)桿菌檢測操作規(guī)程ZL-03-220GMP辦公室DELTA-320PH計操作規(guī)程SB-03-234GMP辦公室致病菌陽性菌管理規(guī)程ZL-03-112GMP辦公室微波爐的操作規(guī)程SB-03-177GMP辦公室潔凈區(qū)情場操作規(guī)程ZL-03-112GMP辦公室設(shè)備清潔操作規(guī)程SB-03-187GMP辦公室5.3 懸液法定量殺滅試驗5.3.1 試驗所需要用的試劑中和劑：0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液(0.9%N.S)活菌計數(shù)用培養(yǎng)基：TSA培養(yǎng)基稀釋液：

11、磷酸鹽緩沖液(PBS0.03mol/L消毒劑配制用水：純化水有機(jī)干擾物質(zhì)5.3.2 試驗所需要用的儀器移液器、電動混勻器、計時器、生化培養(yǎng)箱5.3.3 試驗所需要用的菌種可根據(jù)消毒技術(shù)規(guī)范2008年版4“細(xì)菌定量殺滅試驗”中指導(dǎo)，本次試驗選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉。再增加車間常見的菌：洋蔥伯克霍爾德菌。5.3.4 試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間根據(jù)優(yōu)潔消毒液說明書建議濃度為1%-3%,作用時間為1-2min,但根據(jù)廠家驗證報告0.1%及0.2%的濃度作用5min和15min也能符合規(guī)定，因此本次試驗濃度選擇0.2%,作用時間選才12.5min、5mi

12、n以及7.5min的條件進(jìn)行確認(rèn)，又因車間裸手消毒作用時間可能只有30s,故本次試驗同時對0.2%消毒劑作用15s、30s以及45s的條件進(jìn)行確認(rèn)。5.3.5 試驗所需要用到的場所微生物實驗室陽性間5.3.6 懸液定量殺菌試驗操作程序(1)菌懸液：濃度為1X108cfu/ml-5X108cfu/ml(2)消毒液的配制：用純化水按體積比配制濃度為0.2%的消毒液500ml(3)磷酸鹽緩沖液的配制：磷酸鹽緩沖液(PBS0.03mol/L)稱取無水磷酸氫二鈉2.83g、磷酸二氫鉀1.36g加入到1000ml蒸儲水中，待完全溶解后，調(diào)PH至7.2-7.4,滅菌后使用。(4)有機(jī)干擾物質(zhì)的配制：按30g

13、牛血清白蛋白中加入1000ml蒸儲水的比例配制約100ml,溶解后用0.45um的無菌濾膜進(jìn)行過濾除菌后使用，未用完的可于2-8C冰箱中保存。(5)試驗過程(以濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑對金黃色葡萄球菌作用2.5min為例)試驗組：取無菌大試管加入0.5ml金黃色葡萄球菌菌懸液，再加入0.5ml的有機(jī)干擾物質(zhì)，分別用無菌吸管吸取0.2%的優(yōu)潔消毒液4.0ml,加入試管中，迅速混勻并立即計時。待金黃色葡萄球菌與0.2%的優(yōu)潔消毒液相互作用2.5min時，吸取0.5ml試驗菌與消毒劑的混合液，加于4.5ml經(jīng)滅菌的0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中，混勻。金黃色葡萄球菌與消毒劑混合液經(jīng)硫代硫酸鈉-生

14、理鹽水溶液作用10min后，吸取1.0ml樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)測定方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿即可。如果菌液濃度較高時，可進(jìn)行10倍系列稀釋后，在進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù)，作為13t驗組，其計數(shù)結(jié)果為Cx。陽性對照組：用4.0ml磷酸鹽緩沖液代替4.0ml0.2%的優(yōu)潔消毒液與0.5ml金黃色葡萄球菌菌懸液、0.5ml有機(jī)干擾物質(zhì)混合2.5min后，取0.5ml混合液與4.5ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液反應(yīng)，作用10min后。計數(shù)方法同試驗組，計數(shù)結(jié)果為00陰性對照組：吸取此次試驗用的純化水0.5ml、0.5ml有機(jī)干擾物質(zhì)、4.0ml磷酸鹽緩沖液混勻，混勻后取0.5ml混合液與4.

15、5ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液作用10min后，吸取1.0ml混合液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)測定方法測定存活菌數(shù)，作為陰性對照。培養(yǎng)：所有用細(xì)菌試驗的樣品均放入30-35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)48小時觀察結(jié)果；用真菌試驗的樣品放入23-28C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)72小時觀察結(jié)果。5.3.7 試驗要求作用于不同試驗菌不同作用時間后的消毒效果試驗均須進(jìn)行3次，每次進(jìn)行時應(yīng)注意所用的試劑等物品均應(yīng)重新配制，防止系統(tǒng)誤差的發(fā)生。5.3.8 活菌計數(shù)結(jié)果應(yīng)換算為對數(shù)值（N）按計算公式殺滅對數(shù)值KL=陽性對照組平均濃度對數(shù)值（N。）-試驗組活菌濃度對數(shù)值（Nx）。計算殺滅對數(shù)值的時候，取小數(shù)點后兩位值，可以進(jìn)

16、行數(shù)字修約。如果消毒試驗組消毒處理后平均生產(chǎn)菌落數(shù)小于等于1時，其殺滅對數(shù)值，即大于等于試驗前對照組平均活菌濃度的對數(shù)值。5.3.9 判斷標(biāo)準(zhǔn)陰性對照應(yīng)無菌生長；細(xì)菌各次試驗的殺滅對數(shù)值均應(yīng)>5.00可判斷為對細(xì)菌消毒合格；真菌各次試驗的殺滅對數(shù)值為N.00,可判定該產(chǎn)品對真菌污染物消毒合格。5.3.10 試驗記錄附件四懸液法定量殺滅試驗記錄第一次表5-2第二次表5-3第三次表5-45.3.11 試驗結(jié)作用于不同試驗菌不同作用時間后的消毒效果試驗進(jìn)行了3次，且每次試驗結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)，所以判定0.2%優(yōu)潔消毒劑通過懸液定量殺滅試驗，對細(xì)菌、真菌消毒合格。5.4 對裸手消毒效果試驗5.4.1

17、 試驗所需要用的試劑Rodac碟培養(yǎng)基平板5.4.2 試驗所需要用的儀器計時器、生化培養(yǎng)箱5.4.3 試驗所需要用的消毒液濃度為0.2%的優(yōu)潔消毒劑作用0.5min5.4.4 試驗所需要用到的場所抗腫瘤粉針車間5.4.5 試驗的操作程序從車間抽取6名生產(chǎn)人員，均按照標(biāo)準(zhǔn)洗手操作規(guī)程進(jìn)行洗手，將手烘干，用0.2%的優(yōu)潔消毒劑對雙手進(jìn)行噴灑消毒，自然晾干，于消毒后的0.5min將一手五指尖在Rodac平板上按壓取樣，于30-35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天，觀察最終結(jié)果。5.4.6 試驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)在消毒劑作用0.5min后6份樣品的菌落數(shù)均須w5cfu/皿，可判為合格，本次試驗應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次，用來判斷該方法

18、是否穩(wěn)定。5.4.7 試驗記錄表5-5對裸手消毒效果試驗第一次試驗記錄試驗人員，培養(yǎng)時間（cfu/皿）可接受標(biāo)準(zhǔn)（cfu/皿）結(jié)果判斷第二天第三天弟人8001029<5不合格800203939<5不合格8003013<5合格800404040<5不合格800501614<5不合格8006024<5合格QA左手0000合格QA右手0000合格表5-6對裸手消毒效果試驗第二次試驗記錄試驗人員培養(yǎng)時間（cfu/皿）可接受標(biāo)準(zhǔn)（cfu/皿）結(jié)果判斷第二天第三天弟人800103331<5不合格8002086<5不合格80030100105<5不合格8

19、00405551<5不合格800503336<5不合格8006043<5合格QA左手0000合格QA右手0000合格表5-7對裸手消毒效果試驗第三次試驗記錄許M白人吊cfu/結(jié)果判斷第二天第三天（cfu/皿）80010107105<5不合格800206060<5不合格8003045<5合格800406361<5不合格800503636<5不合格800602832<5不合格QA左手0000合格QA右手0000合格5.4.8 試驗結(jié)論對車間人員進(jìn)行了三次（每次6名）裸手消毒試驗，試驗結(jié)果顯示基本不符合標(biāo)準(zhǔn)，因此判定0.2%濃度優(yōu)潔消毒劑對人員裸

20、手消毒0.5min試驗不合格。5.5 消毒劑對佩戴手套后的消毒效果驗證5.5.1 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗(1)試驗所需要用的試劑中和劑：0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液(0.9%N.S);活菌計數(shù)用培養(yǎng)基：TSA培養(yǎng)基；稀釋液：磷酸鹽緩沖液(PBS0.03mol/L);消毒劑配制用水：純化水(2)試驗所需要用的儀器刻度吸管、數(shù)字可調(diào)移液器、電動混勻器、計時器、培養(yǎng)箱、無菌手套及無菌剪刀(3)試驗所需要用的菌種本次試驗主要是驗證該消毒劑對手部微生物的消毒效果，故選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌作為試驗菌。(4)試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑作用0.5

21、min(5)試驗所需要用到的場所微生物實驗室陽性間(6)試驗的操作步驟菌懸液：濃度為1X108cfu/ml-5x108cfu/ml消毒液：用純化水按體積比配制濃度為0.2%的消毒液500ml稀釋液：磷酸鹽緩沖液(PBS0.03mol/L)試驗組：取無菌剪刀從無菌手套上剪取三個手指樣品，大小為10mmx10mm以三角形陣列，均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內(nèi)，逐片滴加10d的金黃色葡萄球菌，必要時用無菌接種環(huán)涂布均勻。使制備后樣品上的菌片濃度在5X105cfu/片-5x106cfu/片，用0.2%的優(yōu)潔消毒劑對制備好含有金黃色葡萄球菌的樣本進(jìn)行均勻噴霧，噴霧的距離約為10cm,以盡量使噴

22、到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致。噴霧量以不使樣本濕透、流液為度，計時。待金黃色葡萄球菌與消毒劑相互作用至0.5min,取出樣本1片，放入一含有5.0ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液的無菌試管中。將試管用電動混勻器混合20s,使菌片上的細(xì)菌被洗脫進(jìn)入0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿。陽性對照組：取無菌剪刀從無菌手套上剪取3個大小為10mmx10mm的手指樣品，均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內(nèi)，用制備好的符合菌液濃度的金黃色葡萄球菌滴加進(jìn)去，必要時用涂布棒涂布均勻。用磷酸鹽緩沖液代替0.2%的優(yōu)潔消毒劑對制備好的

23、金黃色葡萄球菌的樣本進(jìn)行均勻噴霧，噴霧的距離約為10cm,以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致。噴霧量以不使樣本濕透、流液為度，計時。待金黃色葡萄球菌與磷酸鹽緩沖液相互作用至0.5min,取出樣本1片，放入一含有5.0ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液的無菌試管中。將試管用電動混勻器混合20s,使菌片上細(xì)菌被洗脫進(jìn)入0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿。陰性對照組：取無菌剪刀從同批無菌手套上剪取三個手指樣品，大小為10mmx10mm均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內(nèi)用。用純化水代替0.2%的優(yōu)潔消毒劑對手套樣本進(jìn)

24、行均勻噴霧，噴霧的距離約為10cm,以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致。噴霧量以不使樣本濕透、流液為度，計時。0.5min后取出樣本一片，放入一含5.0ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液的無菌試管中。將試管用電動混勻器混合20s。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為陰性對照。培養(yǎng)：所有細(xì)菌試驗用樣本均在30-35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)至48h,觀察最終結(jié)果；真菌試驗用樣本在23-28C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)至72h,觀察最終結(jié)果。(7)試驗要求及計算試驗重復(fù)3次，計算各組的活菌數(shù)(cfu/片)，并換算為對數(shù)值(N),然后按計算公式殺滅對數(shù)值KL=陽性對

25、照組平均濃度的對數(shù)值(N0)-試驗組活菌濃度的對數(shù)值(NX)(8)試驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)陰性對照組應(yīng)無菌生長，消毒劑作用于各菌的不同作用時間的殺滅對數(shù)值3.00,即判定結(jié)果合格。(9)試驗的記錄表5-8無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第一次試驗記錄驗證菌種Co(cfu/)NoCx(cfu/)NxKL(N0-Nx)接受標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果判斷5.8X1055.76005.76>3.00大腸埃希菌1.1X1066.04221.344.70>3.00合格白色念珠菌5.4X1044.73004.73>3.00合格表5-9無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第二次試驗記錄Co(cfu/片)NoCx(cfu/片)NxK

26、L(No-Nx)接受標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌5.8X1055.76005.76>3.00合格大腸埃希菌1.1X1066.04111.045.00>3.00合格白色念珠菌5.4X1044.73004.73>3.00合格表5-10無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第三次試驗記錄驗證菌種Co(cfu/片)NoCx(cfu/片)NxKL(No-Nx)接受標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果判斷6.2X1044.79004.79>3.00大腸埃希菌2.0X1055.30121.084.22>3.00合格白色念珠菌2.7X1044.43004.43>3.00合格(10)試驗的結(jié)論濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑，三次

27、對無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗均符合標(biāo)準(zhǔn)，判定手套載體噴霧定量殺菌試驗合格。5.5.2 消毒劑對佩戴手套后人員手現(xiàn)場消毒試驗(1)試驗所需要用的試劑Rodac碟培養(yǎng)基平板(2)試驗所需要用的儀器計時器、生化培養(yǎng)箱(3)試驗所需要用的消毒液的濃度及取樣時間取5.5.1中符合規(guī)定的消毒劑濃度對人員手套消毒后0.5min、15min、35min分別取樣(4)試驗所需要用到的場所抗腫瘤分針車間或普通分針車間(5)試驗的操作步驟從車間抽取12名生產(chǎn)人員，分別在A級區(qū)安排6名，B級區(qū)安排6名。各自按照標(biāo)準(zhǔn)洗手操作規(guī)程進(jìn)行洗手，將手烘干。用試驗濃度的優(yōu)潔消毒劑對雙手進(jìn)行噴灑消毒，自然晾干，分別于消毒后0.5

28、min、15min、35min將五指手指尖在Rodac平板上按壓取樣，取樣后于30-35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天，觀察最終結(jié)果(0.5min取樣后生產(chǎn)人員對雙手重新進(jìn)行消毒，之后應(yīng)盡量模擬生產(chǎn)時的動作進(jìn)行手部活動。15min取樣后無需重新消毒)(6)試驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)在消毒劑作用不同時間后的菌落數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)見下表5-11,每個時間段的6份樣品必須全部符合標(biāo)準(zhǔn)，才可判斷合格，本次試驗應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次，用來判斷該方法是否穩(wěn)定。表5-11菌落數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別5A<1cfu/皿B&5cfu/皿(7)試驗的記錄附件五消毒劑對佩戴手套后人員手現(xiàn)場消毒試驗記錄A區(qū)第一次表5-12B區(qū)第一次表5-13

29、(8)試驗結(jié)論0.2%優(yōu)潔消毒劑于三次每個時間段的6份樣品全部符合標(biāo)準(zhǔn)，可判斷合格。5.6 消毒劑對物體表面消毒效果驗證5.6.1 消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗車間用于該消毒劑消毒的物體表面主要有不銹鋼設(shè)備表面、地面、墻面以及呼吸袋，經(jīng)過小試，將高濃度菌液(>104cfu/ml)涂抹于不銹鋼設(shè)備表面、地面、墻面及呼吸袋，選擇回收率較高的載體作為物體表面消毒效果試驗室部分的試驗載體。判斷標(biāo)準(zhǔn)：回收菌液濃度：>103cfu/ml。(1)試驗所需要用的試劑中和劑：0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液(0.9%N.S)活菌計數(shù)用培養(yǎng)基：TSA培養(yǎng)基消毒劑配制用水：純化水(2)試驗所需要用的

30、儀器刻度吸管、移液器、電動混勻器、計時器、培養(yǎng)箱、規(guī)格板(用不銹鋼材料制備，中央留一5.0cmx5.0cm的空格作為采樣部位）、無菌棉簽、無菌接種環(huán)（3）試驗所需要用的菌種本次試驗主要是驗證該消毒劑對物體表面微生物的消毒效果，故選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌作為試驗菌（4）試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間0.2%的優(yōu)潔消毒液作用30s（5）試驗所需要用到的場所微生物實驗室陽性間（6）試驗的操作步驟（以濃度為0.2%的消毒劑對金黃色葡萄球菌作用30s為例）菌懸液：濃度為5X105cfu/ml-5x106cfu/ml試驗組：取大小合適的無菌呼吸袋作為試驗樣本，將無菌規(guī)格板按壓在樣本上，用無菌棉

31、簽沾以菌懸液均勻涂抹被試驗表面的6區(qū)塊（各區(qū)塊25cm2）。用0.2%的消毒劑對三個區(qū)塊表面進(jìn)行噴霧消毒，噴霧的距離約為10cm,以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致，消毒后，將無菌棉簽在5ml的中和劑試管中沾濕，分別對3個消毒區(qū)塊進(jìn)行涂抹采樣，每區(qū)塊橫豎往返各8次。采樣后以無菌操作方式將棉簽剪入原中和劑試管中，電動混勻器上混勻20s,吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為試驗組，必要時進(jìn)行稀釋。陽性對照組：從6個區(qū)塊中選取其他3個區(qū)塊，用磷酸鹽緩沖液代替消毒劑對三個區(qū)塊表面同法操作，之后將無菌棉簽在5ml的中和劑試管中沾濕，分別對3個區(qū)塊進(jìn)行涂抹采樣

32、，每區(qū)塊橫豎往返各8次。采樣后以無菌操作方式將棉簽剪入原中和劑中，電動混勻器上混勻20s,吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為陽性對照組，必要時進(jìn)行稀釋。陰性對照組：用一只棉簽，分別蘸取同批純化水，以無菌方式將棉簽采樣端剪入0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中，在混勻器上震蕩20s,做適當(dāng)稀釋后，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為陰性對照。培養(yǎng)：所有試驗樣本均在30-35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果。（7）試驗要求及計算試驗須重復(fù)三次，計算各組的活菌數(shù)（cfu/片），并換算為對數(shù)值（N）,然后按計算公式殺滅對數(shù)值KL=對照組平

33、均濃度的對數(shù)值（N。）-試驗組活菌濃度對數(shù)值（Nx）（8）試驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)陰性對照組應(yīng)無菌生長，陽性對照組菌數(shù)符合要求，所有樣本的殺滅對數(shù)值均3.00,即判定結(jié)果合格。（9）試驗的記錄表5-14消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第一次試驗記錄驗證菌種C（）（cfu/片）N0Cx(cfu/片)NxKL(N0-Nx)可接受標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌8.1X1055.91121.084.83>3.00合格大腸埃希菌8.4X1055.92005.92>3.00合格表5-15消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第二次試驗記錄驗證菌種C（）（cfu/片）NoCx(cfu/片)NxKL(No-Nx)可接受標(biāo)準(zhǔn)金

34、黃色葡萄球菌8.2X1055.91105.91>3.00合格大腸埃希菌7.9X1055.88451.654.23>3.00合格表5-16消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第三次試驗記錄驗證菌種C0（cfu/片）NoCx(cfu/片)NxKL(No-Nx)可接受標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌3.2X1055.51005.51>3.00合格大腸埃希菌4.8X1055.68331.524.16>3.00合格（10）試驗結(jié)論濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑三次物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗（作用0.5min）均符合標(biāo)準(zhǔn)，故判定合格。5.6.2 消毒劑對物體表面消毒現(xiàn)場鑒定試驗（1）試驗所需要用的試劑Rod

35、ac碟培養(yǎng)基平板、無菌生理鹽水、TSA培養(yǎng)基、純化水（2）試驗所需要用的儀器計時器、培養(yǎng)箱；（3）試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間0.2%的優(yōu)潔消毒劑作用0.5min（4）試驗所需要用到的場所抗腫瘤粉針車間（5）試驗操作的步驟（以彩鋼板為例）選擇抗腫瘤粉針車間的潔凈區(qū)表面的彩鋼板，選擇不易清潔的部位，取一塊潔凈區(qū)醫(yī)用無菌抹布，用試驗濃度的消毒劑，對其表面進(jìn)行噴灑消毒（按車間消毒規(guī)程進(jìn)行）。消毒后，使用Rodac碟進(jìn)行取樣（對于消毒后的不同時間的采樣，應(yīng)于首次采樣的部位比較接近）培養(yǎng)：所有試驗樣本均在30-35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)三天觀察最終結(jié)果。（6）試驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)不同級別區(qū)域內(nèi)的不同消毒

36、對象，每次采樣三個點，本次試驗重復(fù)進(jìn)行3次，結(jié)果與下表進(jìn)行對比，見表5-11。表5-17菌落數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)潔凈級別表面菌落數(shù)（非地面）表面菌落數(shù)（地面）設(shè)備表卸標(biāo)準(zhǔn)A級<3cfu/皿&5cfu/皿&1cfu/皿B級&5cfu/皿&5cfu/皿&5cfu/皿C級<25cfu/皿&25cfu/皿<25cfu/皿D級<50cfu/皿&50cfu/皿<50cfu/皿（7）試驗結(jié)果的記錄表5-18消毒劑對表面消毒現(xiàn)場鑒定試驗第一次試驗記錄采樣區(qū)域及象培養(yǎng)時間結(jié)果判斷取樣點第一天第二天第三天-判斷標(biāo)準(zhǔn)1000合格(A)級面

37、取樣點2000<3合格取樣點3000合格取樣點1002合格(A)級地面取樣點2001<5合格取樣點3000合格取樣點1000合格(A)級設(shè)備取樣點2000<1合格取樣點3000合格取樣點1000合格(B)級墻面取樣點2000<5合格取樣點3000合格取樣點1002合格(B)級地面取樣點2001<5合格取樣點3001合格取樣點1000合格(B)級設(shè)備取樣點2010<5合格取樣點3000合格取樣點1101合格(C)級墻面取樣點2110<25合格3011合格取樣點1101合格(C)級地面取樣點201414<25合格取樣點301414合格取樣點1100合

38、格(C)級設(shè)備取樣點2110<25合格取樣點3023合格取樣點1333合格(D)級墻面取樣點2010<50合格3000合格取樣點1000合格(D)級地面取樣點2010<50合格取樣點3000合格取樣點1000合格(D)級清洗取樣點2100<50合格3000合格由于第二次、第三次試驗結(jié)果相同，均合格，故此處略去表格。(8)試驗的結(jié)論濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑對物體表面消毒(作用0.5min)現(xiàn)場鑒定試驗共進(jìn)行三次，結(jié)果均符合規(guī)定。5.7 消毒劑消毒效果驗證結(jié)論經(jīng)過本次確認(rèn)，濃度為0.2%濃度優(yōu)潔消毒劑可用于車間無菌手套表面和物體表面消毒（作用0.5min）,0.2%優(yōu)潔消毒

39、劑作用0.5min不可用作人員裸手消毒。6 .驗證主要依據(jù)6.1 藥品生產(chǎn)驗證指南（2003年版）6.2 消毒技術(shù)規(guī)范（2008年版）6.3 中國藥典（2010年版）7 .驗證合格標(biāo)準(zhǔn)7.1 判斷標(biāo)準(zhǔn)在試驗結(jié)束后，通過判定標(biāo)準(zhǔn)來確定是否合格，判定標(biāo)準(zhǔn)是：在懸液定量殺滅試驗中，細(xì)菌各次試驗的殺滅對數(shù)值均應(yīng)>5.0酎，可判定細(xì)菌消毒合格；真菌各次試驗的殺滅對數(shù)值均應(yīng)乂.00,可判定真菌污染物消毒合格；在載體定量殺滅試驗中，各次試驗的殺滅對數(shù)值均>3.00可判定消毒合格。7.2 現(xiàn)場考察試驗合格標(biāo)準(zhǔn)表7-1菌落數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)潔凈級別表面菌落數(shù)（非地面）表面菌落數(shù)（地面）A級v3cfu/皿&

40、amp;5cfu/皿&1cfu/皿B級&5cfu/皿<5cfu/皿&5cfu/皿C級&25cfu/皿&25cfu/皿&25cfu/皿族&50cfu/皿&50cfu/皿&50cfu/皿8 .再驗證周期8.1 當(dāng)消毒劑的使用濃度和清潔消毒程序發(fā)生變更時應(yīng)進(jìn)行再驗證。8.2 當(dāng)環(huán)境中出現(xiàn)新類型的微生物時，應(yīng)以該微生物為挑戰(zhàn)菌進(jìn)行再驗證。8.3 當(dāng)有新的消毒劑被使用時應(yīng)進(jìn)行驗證。附錄附錄一驗證方案會審記錄會審日期：年月日驗證方案名稱驗證方案編號姓名部門職務(wù)會審意見修改內(nèi)容質(zhì)量副總同意口不同意口生產(chǎn)副總同意口不同意口質(zhì)保部部門

41、負(fù)責(zé)人同意口不同意口質(zhì)保部質(zhì)保員同意口不同意口質(zhì)檢部部門主管同意口不同意口生產(chǎn)一部部門經(jīng)理同意口不同意口設(shè)備部部門經(jīng)理同意口不同意口附錄二驗證方案修改申請及批準(zhǔn)書驗證方案名稱驗證方案編號修改內(nèi)容修改原因及依據(jù)修改后方案起草人部門經(jīng)理年月日驗證委員會審批驗證委員會：年月日附錄三漏項和偏差處理記錄驗證方案名稱驗證方案編號漏項和偏差內(nèi)容漏項和偏差原因漏項和偏差修改后內(nèi)容驗證委員會審批附錄四懸液法定量殺滅試驗記錄表5-2懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄驗證菌種作用時間(cfu/ml)N0Cx(cfu/ml)NxKL(N0-Nx)接受標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)15s006.43合格30s006.43合格金黃色葡萄球菌

42、45s2.7X1066.43006.43>5.00合格2.5min006.43合格5min006.43合格7.5min006.43合格15s006.6730s006.67合格大腸45s006.67合格埃希菌4.7X1066.67>5.002.5min006.67合格5min006.67合格7.5min006.67合格15s106.4930s301.485.01合格銅綠假單胞菌45s3.1X1066.4920.306.19>5.00合格2.5min006.49合格5min006.49合格7.5min006.49合格15s006.57合格30s006.57合格洋蔥伯克45s006

43、.57合格霍爾德菌2.5min3.7X1066.57006.57>5.00合格5min006.57合格7.5min006.57合格15s005.4530s005.45合格白色45s2.8X1055.45005.45M00合格念珠國2.5min005.45合格5min005.45合格7.5min005.45合格15s004.34合格30s20.304.04合格黑曲霉45s2.2X1044.34004.34M00合格2.5min004.34合格5min004.34合格7.5min004.34合格00合格表5-3懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄驗證菌種作用時間Co(cfu/ml)NoCx(cf

44、u/ml)NxKL(No-Nx)接受標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)15s006.36合格30s006.36合格金黃色葡萄球菌45s2.3X1066.36006.36>5.00合格2.5min006.36合格5min006.36合格7.5min006.36合格15s006.75合格30s006.75合格大腸埃希菌45s5.6X1066.75006.75>5.00合格2.5min006.75合格5min006.75合格7.5min006.75合格15s006.72合格30s006.72合格銅綠假單胞菌45s5.2X1066.72006.72>5.00合格2.5min006.72合格5min006.

45、72合格7.5min006.72合格15s006.15合格30s006.15合格洋蔥伯克霍爾德菌45s1.4X1066.15006.15>5.00合格2.5min006.15合格5min006.15合格7.5min006.15合格15s005.32合格30s005.32合格白色45s2.1X1055.32005.32N.00合格念珠菌2.5min005.32合格5min005.32合格7.5min005.32合格15s004.34合格30s20.304.04合格黑曲霉45s2.2X1044.34004.34N.00合格2.5min004.34合格5min004.34合格7.5min004.34合格00表5-4懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄驗證菌種作用時間Co(cfu/ml)No