1、 紫外可見分光光紫外可見分光光度計(jì)度計(jì)主要內(nèi)容主要內(nèi)容1 儀器構(gòu)成及原理儀器構(gòu)成及原理2 分光光度計(jì)的使用分光光度計(jì)的使用波長掃描波長掃描定量測定定量測定3 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)一一 儀器原理儀器原理 紫外可見吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在能級間的躍遷。利用一定頻率的紫外-可見光照射被分析的物質(zhì)，引起分子中價(jià)電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質(zhì)的特征。 物質(zhì)對光的選擇性吸收溶液對光的作用物質(zhì)對光的選擇性吸收溶液對光的作用 溶液對光的作用示意圖bcIITA0lglgabclglg0ITAII0 入射光輻射強(qiáng)度入射光輻射強(qiáng)度I 透射光輻射強(qiáng)度透射光輻射強(qiáng)度T 透射比透射比a吸光系數(shù)吸

2、光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯光吸收遵循朗伯-比爾定律：比爾定律： 溶液對光吸收示意圖 溶液對光吸收過程溶液對光吸收過程偏離朗伯比爾定律的原因偏離朗伯比爾定律的原因-化學(xué)因素化學(xué)因素 v朗伯朗伯-比爾定律的假設(shè)條件一：比爾定律的假設(shè)條件一： 入射光為單色光。v朗伯朗伯-比爾定律的假設(shè)條件之二比爾定律的假設(shè)條件之二： 吸收粒子是獨(dú)立的，彼此之間無相互作用。比爾定律適用于稀溶液。v吸光組分的化學(xué)變化：吸光組分的化學(xué)變化： 吸光組分的締合、離解，互變異構(gòu)，絡(luò)合物的逐級形成，以及與溶劑的相互作用等，都將導(dǎo)致偏離比耳定律。組成：光源光源、單色器單色器，狹縫、，狹縫、樣品池樣品池、檢測器、檢

3、測器1光源：能提供連續(xù)的輻射；光強(qiáng)度足夠大；在整個(gè)光譜區(qū)內(nèi)光譜強(qiáng)度不隨波長有明顯變化；光譜范圍寬；使用壽命長，價(jià)格低。 鎢燈可見光區(qū) 3202500nm 氫燈或氘燈紫外光區(qū) 195375nm 組 成2單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器是分光光度計(jì)的心臟部分，它的作用是把來自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長。它的主要組成部件和作用是： 入射狹縫限制雜散光進(jìn)入。 色散元件即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。 準(zhǔn)直鏡把來自入射狹縫的光束轉(zhuǎn)化為平等光，并把來自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫上。 出射狹縫只讓特定波長的光射出單色器。 3. 吸

4、收池吸收池 玻璃由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)；石英適用于紫外和可見光區(qū)4檢測器：將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置檢測器：將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置v光電管v光電倍增管v二極管陣列檢測器5記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)開始方法設(shè)定樣品名輸入將空白樣品分別放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦剡M(jìn)行用戶基線校正將樣品放入樣品池開始測量開始測量打印數(shù)據(jù)二 波長掃描啟動啟動UV Solution軟件軟件1.打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊Windows開始菜單中的Hitachi Applications選項(xiàng)中的UV Solutions 2.0 選項(xiàng)。或者直接在桌面上雙擊UV Solution圖標(biāo)。2

5、運(yùn)行UV Solution軟件。軟件將自動配置計(jì)算機(jī)的串行口（RS 232 Port）見圖儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：vROM檢測vRAM檢測v波長步進(jìn)電機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)檢測v氘燈點(diǎn)亮檢測v鎢燈點(diǎn)亮檢測v儀器波長校正3 儀器主機(jī)開始初始化。見圖4儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。測量參數(shù)設(shè)置1 在Edit菜單中選擇Method選項(xiàng)，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。 General:總體設(shè)置頁面總體設(shè)置頁面vMeasurement測量: Wavelength scan 波長掃描 Time scan時(shí)間掃描 Photometry 定波長測量vOperator操作者: 輸入

6、操作者的姓名vInstrument儀器:儀器型號由軟件自動從儀器主機(jī)獲得。v Use Sample Table使用樣品表:選擇是否使用樣品表。vComments備注:填寫一些備注信息。vLoad按鈕:用于裝載原來保存的方法文件。vSave按鈕:保存當(dāng)前的設(shè)置參數(shù)。vSave As按鈕:將當(dāng)前設(shè)置參數(shù)另存為一個(gè)方法文件。Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面儀器參數(shù)設(shè)置頁面vData mode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2vLight一般選擇“Auto”Monitor顯示頁面顯示頁面Processing數(shù)據(jù)處理頁面數(shù)據(jù)處理頁面 Report報(bào)

7、告結(jié)果頁面報(bào)告結(jié)果頁面 樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入基線校正基線校正v用戶基線校正方法：可將scan speed 設(shè)小一些；進(jìn)行樣品掃描時(shí)，可設(shè)大一些。 將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕 v系統(tǒng)基線校正方法。 使用空氣作為參比和樣品。按按鈕 出對話框見圖，選擇System后按OK按鈕，進(jìn)行系統(tǒng)基線校正。測量測量有兩種方法可以開始測量：v使用菜單方式 選擇Spectrophotometer菜單下Start選項(xiàng)開始測量v使用按鈕方式 ：按按鈕 開始測量v如果要終止掃描按按鈕 。二光度掃描二光度掃描開始方法設(shè)定樣品名輸入將空白樣品分別放入?yún)⒈瘸?/p>

8、和樣品池將樣品放入樣品池開始測量開始測量打印數(shù)據(jù)進(jìn)行用戶基線校正測量參數(shù)設(shè)置測量參數(shù)設(shè)置 在Edit菜單中選擇Method選項(xiàng)。出現(xiàn)下列設(shè)置窗口. 具體操作程序Method:1.general:Measurement測量方式選擇Photometry（光度計(jì)測量） 2.Quantitation定量參數(shù)設(shè)置頁面： 在measure中選擇波長wavelength，在Calibration中選擇“1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校準(zhǔn)。在concertration中鍵入標(biāo)準(zhǔn)濃度單位。3. Instrument4 standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置 鍵入標(biāo)系的

9、樣品濃度及名稱5 吸光度自動校零吸光度自動校零 在開始測試前，需要進(jìn)行吸光度校零。在樣品室參比和樣品光路中分別放入空白樣品。按按鈕 進(jìn)行吸光度校零。 6 在wavelength中設(shè)定掃描的最大吸收波長， 7 放入標(biāo)樣，選中第一個(gè)標(biāo)樣，點(diǎn)measure依次測定完成 后自動給出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 8 選擇SAMPLE進(jìn)行樣品測定，全部測定完后點(diǎn)擊END，此 時(shí)自動生成一個(gè)文件，打開此文件，另存為所需的文件名。 9 關(guān)機(jī)時(shí)，先退出UVsolution，再關(guān)電腦，最后關(guān)光度計(jì)上的power。三三 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1. 開機(jī)預(yù)熱開機(jī)預(yù)熱15分鐘左右。分鐘左右。2. 測定時(shí)應(yīng)注意：測定時(shí)應(yīng)注意：v參照池和吸收池應(yīng)

10、是一對經(jīng)校正好的匹配的吸收池，材料和規(guī)格一致。v使用前后應(yīng)將洗手池洗凈，測量時(shí)不能用手接觸窗口。v已匹配好的比色皿不能用爐子和火焰干燥，不能加熱，以免引起光程長度上的改變。3. 測量條件的選擇：測量條件的選擇：v選擇適宜波長的入射光:由于有色物質(zhì)對光有選擇性吸收,為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度,必須選擇溶液最大吸收波長的入射光。v控制吸光度A的準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.20.7讀數(shù)范圍內(nèi)時(shí),測量的準(zhǔn)確度較高. v選擇參比溶液：參比溶液是用來調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應(yīng)采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液。4. 用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。 5. 正確登記，將儀器及實(shí)驗(yàn)臺擦干凈。正確登記，將儀器及實(shí)驗(yàn)臺擦干凈。測測 試試 題題1.分光光度計(jì)由哪幾部分組成？設(shè)計(jì)其光路圖。分光光度計(jì)由哪幾部分組成？設(shè)計(jì)其光路圖。2.紫外可見分光光度計(jì)對光源的要求是什么？紫外可見分光光度計(jì)對光源的要求是什么？ 一般一般采用哪幾種光源，各光源的波長范圍是什么？采用哪幾種光源，各光源的波長范圍是什么？3.比色皿一般