1、2022-4-223. 3. 流動相選擇流動相選擇 在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要根據(jù)。 采用正相液-液分配分別時：首先選擇中等極性溶劑，假設(shè)組分的保管時間太短，降低溶劑極性，反之添加。 也可在低極性溶劑中，逐漸添加其中的極性溶劑，使保管時間縮短。 常用溶劑的極性順序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己烷煤油(最小)2022-4-224. 4. 選擇流動相時應(yīng)留意的幾個問題選擇流動相時應(yīng)留意的幾個問題1盡量運用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測

2、器噪聲添加。2防止流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。3試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中堆積。4流動一樣時還應(yīng)滿足檢測器的要求。當(dāng)運用紫外檢測器時，流動相不應(yīng)有紫外吸收。*二、分別類型選擇二、分別類型選擇 choice of separation types2022-4-22 氣相色譜過程：待測物樣品被蒸發(fā)為氣體并氣相色譜過程：待測物樣品被蒸發(fā)為氣體并注入到色譜分別柱柱頂，以惰性氣體指不與待測注入到色譜分別柱柱頂，以惰性氣體指不與待測物反響的氣體，只起運載蒸汽樣品的作用，也稱載物反響的氣體，只起運載蒸汽樣品的作用，也

3、稱載氣將待測物樣品蒸汽帶入柱內(nèi)分別。氣將待測物樣品蒸汽帶入柱內(nèi)分別。 其分別原理是基于待測物在氣相和固定相之間的吸附-脫附氣固色譜和分配氣液色譜來實現(xiàn)的。因此可將氣相色譜分為氣固色譜和氣液色譜。 氣固色譜：利用不同物質(zhì)在固體吸附劑上的物理吸附-解吸才干不同實現(xiàn)物質(zhì)的分別。五、檢測器五、檢測器 氣相色譜檢測器種類繁多，本節(jié)將引見最為常用氣相色譜檢測器種類繁多，本節(jié)將引見最為常用的幾種檢測器：的幾種檢測器： 1. 熱導(dǎo)檢測器(TCD); 2. 氫火焰離子化檢測器(FID); 3. 電子捕獲檢測器(ECD); 4. 火焰光度檢測器(FPD); 5. 氮磷檢測器NPD也稱熱離子檢測器(TID); 6.

4、 原子發(fā)射檢測器(AED) 7. 硫熒光檢測器SCD 相對極性P：規(guī)定非極性固定液角鯊?fù)榈臉O性為0，強極性固定液,-氧二丙腈的極性為100，其他物質(zhì)的P 在0100 之間，每20 單位為一級，即將極性分為5 級：0, +1(非極性)；+1, +2(弱極性)；+3(中等極性；+4, +5(強極性)固定液類型固定液類型 極性極性 例子例子 分離對象分離對象 烴類烴類 非極性非極性 角鯊?fù)?、石蠟烷角鯊?fù)?、石蠟?非極性物質(zhì)分離非極性物質(zhì)分離 弱極性弱極性 甲基硅氧烷、苯基硅甲基硅氧烷、苯基硅 中極性中極性 氧烷、氟基硅氧烷氧烷、氟基硅氧烷 硅氧烷類硅氧烷類 強極性強極性 氰基硅氧烷氰基硅氧烷 不同極

5、性物質(zhì)分離不同極性物質(zhì)分離 醇和醚類醇和醚類 強極性強極性 聚乙二醇聚乙二醇 強極性物質(zhì)強極性物質(zhì) 酯和聚脂類酯和聚脂類 中強極性中強極性 苯甲酸二壬酯苯甲酸二壬酯 各類物質(zhì)各類物質(zhì) 腈和腈醚類腈和腈醚類 強極性強極性 氧二丙腈氧二丙腈 極性物質(zhì)極性物質(zhì) 有機皂土有機皂土 弱極性弱極性 芳香異構(gòu)體芳香異構(gòu)體 固定液分類及選擇：固定液分類及選擇：固定液選擇：按固定液選擇：按“類似相溶原理選擇固定液。類似相溶原理選擇固定液。 非極性組分非極性組分非極性固定液非極性固定液沸點低的沸點低的物質(zhì)先流出；物質(zhì)先流出； 極性物質(zhì)極性物質(zhì)極性固定液極性固定液極性小的物質(zhì)極性小的物質(zhì)先流出；先流出； 各類極性混

6、合物極性固定液極性小的物質(zhì)先流出； 氫鍵型物質(zhì)氫鍵型固定液不易構(gòu)成氫鍵的物質(zhì)先流出； 復(fù)雜混合物兩種或以上混合固定液柱溫柱溫降低降低升高升高傳質(zhì)快、傳質(zhì)快、柱效高柱效高縱向分散強、縱向分散強、峰拖尾過峰拖尾過高呵斥固定高呵斥固定液流失液流失分析時分析時間長間長恒溫恒溫程序升程序升溫溫(寬沸寬沸程混合程混合物物)實驗實驗確定確定2022-4-22二、高效液相色譜法的特點二、高效液相色譜法的特點 feature of HPLC feature of HPLC 特點：高壓、高效、高速 高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效分別分析方法。2022-4-22(5) 液相色譜檢測器液相色譜檢測器 a. 紫外

7、檢測器紫外檢測器 運用最廣，對大部分有機化合物有呼應(yīng)。運用最廣，對大部分有機化合物有呼應(yīng)。 特點：特點： 靈敏度高；靈敏度高； 線形范圍高；線形范圍高； 流通池可做的很小流通池可做的很小1mm 10mm ，容積，容積 8L； 對流動相的流速和溫度變化不敏感；對流動相的流速和溫度變化不敏感； 波長可選，易于操作；波長可選，易于操作； 可用于梯度洗脫。可用于梯度洗脫。 2022-4-22一、一、 液液- -固吸附色譜固吸附色譜liquid-solid adsorption liquid-solid adsorption chromatographychromatography 固定相：固體吸附劑為

8、，如硅膠、氧化鋁等，較常運用的是510m的硅膠吸附劑； 流動相：各種不同極性的一元或多元溶劑。 根本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸； 適用于分別相對分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對具有官能團的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性； 缺陷：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；2022-4-22二、二、 液液- -液分配色譜液分配色譜liquid- liquid partition liquid- liquid partition chromatographychromatography 固定相與流動相均為液體互不相溶； 根本原理：組分在固定相和流動相上的分配； 流動相：對于親水性固定液，采用疏水性流動相，即

9、流動相的極性小于固定液的極性正相 normal phase，反之，流動相的極性大于固定液的極性反相 reverse phase。正相與反相的出峰順序相反； 固定相：早期涂漬固定液，固定液流失，較少采用； 化學(xué)鍵合固定相：將各種不同基團經(jīng)過化學(xué)反響鍵合到硅膠擔(dān)體外表的游離羥基上。C-18柱反相柱。2022-4-22三、三、 離子交換色譜離子交換色譜ion-exchange chromatographyion-exchange chromatography 固定相：陰離子離子交換樹脂或陽離子離子交換樹脂； 流動相：陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶

10、液； 根本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反響；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在方式等有關(guān)。親和力大，保管時間長； 陽離子交換：RSO3H +M+ = RSO3 M + H + 陰離子交換：RNR4OH +X- = RNR4 X + OH- 運用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。2022-4-22五、五、 離子對色譜離子對色譜ion pair chromatographyion pair chromatography 原理：將一種或多種與溶質(zhì)離子電荷相反的離子對離子或反離子加到流動相中使其與溶質(zhì)離子結(jié)合構(gòu)成疏水性離子對化合物，使其可以在兩相之間進(jìn)展分配； 陰離子分別：常采用烷基銨類，如氫氧化四丁基銨或氫氧化十六烷基三甲銨作為對離子； 陽離子分別：常采用烷基磺酸類，如己烷磺酸鈉作為對離子； 反相離子對色譜：非極性的疏水固定相(C-18柱)，含有對離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動相，試樣離子X-進(jìn)入流動相后，生成疏水性離子對Y+ X -后；在兩相間分配。2022-4-22六、六、 排阻色譜色譜排阻色譜色譜size- exclusion chromatographysize-