1、實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解免疫電泳的原理和用途。 掌握免疫電泳的操作過(guò)程和方法。 掌握免疫電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析方法，并對(duì)粗提的蛋白進(jìn)行檢測(cè)。 免疫電泳為區(qū)帶電泳與雙向免疫擴(kuò)散的結(jié)合。先利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不同電荷和分子量的蛋白抗原在瓊脂內(nèi)分離，然后在與電泳方向平行的方向上開(kāi)槽，加入抗血清。37下使兩者擴(kuò)散，各區(qū)帶蛋白在相應(yīng)的位置與抗體反應(yīng)形成弧形沉淀線(xiàn)。免疫電泳原理圖解見(jiàn)圖。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理免疫電泳原理圖解實(shí)驗(yàn)材料：牛血清粗提蛋白瓊脂糖巴比妥緩沖液PH8.6，離子強(qiáng)度0.05）兔抗牛血清（1配制配制1.2的瓊脂，加熱使之融化。的瓊脂，加熱使之融化。 （巴比

2、妥緩沖液配制）（巴比妥緩沖液配制）（2吸取吸取34 mL瓊脂溶液，均勻涂布到載玻片上，注意瓊脂溶液，均勻涂布到載玻片上，注意要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并立要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并立即于中間橫放一根毛細(xì)管，待凝，制成即于中間橫放一根毛細(xì)管，待凝，制成2mm的瓊脂板。的瓊脂板。（3取打孔器在圖示的位置打孔圖），此二孔位置要對(duì)稱(chēng)。取打孔器在圖示的位置打孔圖），此二孔位置要對(duì)稱(chēng)。于酒精燈上小心烘烤，使瓊脂與玻璃板貼緊。于酒精燈上小心烘烤，使瓊脂與玻璃板貼緊。操作步驟操作步驟2mm2mm圖2 膠板打孔及挖槽示意圖（4用微量加樣器加入用微量加樣器加入1020

3、uL的粗提蛋白的粗提蛋白和牛血清和牛血清 ，不要溢出可加入指示劑），不要溢出可加入指示劑） 。（5把載玻片放到電泳槽中，倒入巴比妥緩沖液，把載玻片放到電泳槽中，倒入巴比妥緩沖液，瓊脂板兩端用濾紙與緩沖液搭橋，接通電源，電壓瓊脂板兩端用濾紙與緩沖液搭橋，接通電源，電壓10-12v/cm電泳電泳1-2h。（6樣品中有藍(lán)色染料，當(dāng)藍(lán)色接近另一端時(shí)，終樣品中有藍(lán)色染料，當(dāng)藍(lán)色接近另一端時(shí)，終止電泳，小心取出載玻片。止電泳，小心取出載玻片。（7用刀片在膠體的中央，劃兩道平行線(xiàn)。刀刻要用刀片在膠體的中央，劃兩道平行線(xiàn)。刀刻要深及底部，兩道平行線(xiàn)間隔不可大于深及底部，兩道平行線(xiàn)間隔不可大于3 mm。用大。用大頭針挑去瓊脂。頭針挑去瓊脂。（8加入人全血清，放入濕盒中，加入人全血清，放入濕盒中，37 下擴(kuò)散下擴(kuò)散24h。本卷須知本卷須知（1澆載玻片時(shí)，玻片應(yīng)保持水平，瓊脂 面要盡量鋪平。（2加樣應(yīng)一次加滿(mǎn)，并防止樣品溢出孔 外。（3電泳過(guò)程中注意防止發(fā)熱，以免影響 電泳結(jié)果。（4電泳時(shí)要使濾紙與凝膠密切接觸， 不可有縫隙。思考題思考題（1畫(huà)出沉淀線(xiàn)的形態(tài)、數(shù)量和位置，并予以簡(jiǎn)要說(shuō)明。（2與相關(guān)的免疫學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行比較，探討免疫電泳的主要優(yōu)點(diǎn)。 PH8.6巴比妥緩沖液配制：巴比妥緩沖液配制： 巴比妥酸巴比妥酸 0.92g -100