1、山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心醫(yī)療器械細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無菌醫(yī)療器械細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)無菌醫(yī)療器械細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)王昕王昕2017.10山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心熱原及內(nèi)毒素?zé)嵩皟?nèi)毒素定義來源熱原任何可以引起發(fā)熱的物質(zhì)。熱原任何可以引起發(fā)熱的物質(zhì)。熱原可分為兩類：微生物熱原（如，可分為兩類：微生物熱原（如，細(xì)菌、真菌、病毒）和非微生物細(xì)菌、真菌、病毒）和非微生物熱原（如，藥物、器械材料、類熱原（如，藥物、器械材料、類固醇、血漿制品等）固醇、血漿制品等）已發(fā)現(xiàn)的熱原大多數(shù)為革蘭氏陰已發(fā)現(xiàn)的熱原大多數(shù)為革蘭氏陰性細(xì)菌的內(nèi)毒素。雖然革蘭氏陽(yáng)性

2、細(xì)菌的內(nèi)毒素。雖然革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌、真菌和病毒可能致熱原，性細(xì)菌、真菌和病毒可能致熱原，但它們的致熱機(jī)理不同（系統(tǒng)作但它們的致熱機(jī)理不同（系統(tǒng)作用）并且作用程度低于革蘭氏陰用）并且作用程度低于革蘭氏陰性細(xì)菌。本課件只包括革蘭氏陰性細(xì)菌。本課件只包括革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)。不適用于細(xì)性細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)。不適用于細(xì)菌內(nèi)毒素以外熱原的評(píng)價(jià)。菌內(nèi)毒素以外熱原的評(píng)價(jià)。內(nèi)毒素革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞外壁的高分革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞外壁的高分子量脂多糖（子量脂多糖（LPS）成分，如感）成分，如感染人體血液或組織，內(nèi)毒素可導(dǎo)染人體血液或組織，內(nèi)毒素可導(dǎo)致發(fā)熱、腦膜炎和血壓迅速降低致發(fā)熱、腦膜炎和血壓迅速降低等。等。當(dāng)革蘭

3、氏陰性細(xì)菌分解或裂解時(shí)，當(dāng)革蘭氏陰性細(xì)菌分解或裂解時(shí)，主要由蛋白、磷脂和脂多糖組成主要由蛋白、磷脂和脂多糖組成的細(xì)菌外壁成份不斷釋放入環(huán)境的細(xì)菌外壁成份不斷釋放入環(huán)境中。內(nèi)毒素污染難以預(yù)防，因?yàn)橹小?nèi)毒素污染難以預(yù)防，因?yàn)槠鋸V泛存在于自然界中、性質(zhì)穩(wěn)其廣泛存在于自然界中、性質(zhì)穩(wěn)定并且體積較小可通過常規(guī)的除定并且體積較小可通過常規(guī)的除菌濾膜。菌濾膜。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)v本法系利用鱟試劑（本法系利用鱟試劑（LALLAL）來檢測(cè)或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素）來檢測(cè)或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素, ,以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒

4、以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法素的限量是否符合規(guī)定的一種方法. .細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品自大腸埃希菌提取精制而成.用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價(jià)用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)

5、準(zhǔn)品自大腸埃希菌提取精制而成.用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品自大腸埃希菌提取精制而成.用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品自大腸埃希菌提取精制而成.用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝

6、膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品自大腸埃希菌提取精制而成.用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品自大腸埃希菌提取精制而成.用于標(biāo)定復(fù)核仲裁鱟試劑靈敏度,標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià). 干擾試驗(yàn)及檢查法中編號(hào)B和C溶液的制備,凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn),光度測(cè)定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn).山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心內(nèi)毒素單位end

7、otoxin unit（EU）v內(nèi)毒素活性測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)單位，最初建立的活性相內(nèi)毒素活性測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)單位，最初建立的活性相當(dāng)于當(dāng)于0.2ng的美國(guó)參照內(nèi)毒素，批號(hào)的美國(guó)參照內(nèi)毒素，批號(hào)EC-2（美（美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)參照材料）。國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)參照材料）。v 注：注：FDA參照內(nèi)毒素參照內(nèi)毒素EC-6、美國(guó)藥典批、美國(guó)藥典批G和世界衛(wèi)生組織的國(guó)際基準(zhǔn)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品和世界衛(wèi)生組織的國(guó)際基準(zhǔn)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品(IS)都都是從同一內(nèi)毒素批中分出來的，使是從同一內(nèi)毒素批中分出來的，使EU和和IU相等相等（Poole et al., 1997）。）。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水及

8、器皿要求細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水及器皿要求v 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝膠法)或小于0.005EU/ml(用于光度測(cè)定法)且對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)無干擾作用的滅菌注射用水.v 試驗(yàn)所用器皿需經(jīng)處理,以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素.耐熱器皿常用干熱滅菌法(250,30分鐘以上)去除,也可采用其它確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法.若使用塑料器械,如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等,應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素且對(duì)試驗(yàn)無干擾的器械.山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心定義和術(shù)語(yǔ)定義和術(shù)語(yǔ)非致熱性的非致熱性的non-pyrogenic 描述醫(yī)療產(chǎn)品不產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)描

9、述醫(yī)療產(chǎn)品不產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)的術(shù)語(yǔ)。的術(shù)語(yǔ)。注：也可用于描述和醫(yī)療產(chǎn)品注：也可用于描述和醫(yī)療產(chǎn)品的內(nèi)毒素水平低于規(guī)定的限值。的內(nèi)毒素水平低于規(guī)定的限值。非致熱性的非致熱性的non-pyrogenic 描述醫(yī)療產(chǎn)品不產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)描述醫(yī)療產(chǎn)品不產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)的術(shù)語(yǔ)。的術(shù)語(yǔ)。注：也可用于描述和醫(yī)療產(chǎn)品注：也可用于描述和醫(yī)療產(chǎn)品的內(nèi)毒素水平低于規(guī)定的限值。的內(nèi)毒素水平低于規(guī)定的限值。非致熱性的非致熱性的non-pyrogenic 描述醫(yī)療產(chǎn)品不產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)描述醫(yī)療產(chǎn)品不產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)的術(shù)語(yǔ)。的術(shù)語(yǔ)。注：也可用于描述醫(yī)療產(chǎn)品的注：也可用于描述醫(yī)療產(chǎn)品的內(nèi)毒素水平低于規(guī)定的限值。內(nèi)毒素水平低于規(guī)定的限值。產(chǎn)品內(nèi)毒

10、素限值產(chǎn)品內(nèi)毒素限值product product endotoxin limitendotoxin limit規(guī)定的某一產(chǎn)品內(nèi)毒素規(guī)定的某一產(chǎn)品內(nèi)毒素的最大可接受水平。的最大可接受水平。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心定義和術(shù)語(yǔ)定義和術(shù)語(yǔ)增強(qiáng) enhancement 非內(nèi)毒素相關(guān)因素（通常由試驗(yàn)樣品的非內(nèi)毒素相關(guān)因素（通常由試驗(yàn)樣品的特性所致）導(dǎo)致的細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)異常特性所致）導(dǎo)致的細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)異?，F(xiàn)象，使試驗(yàn)反應(yīng)高于實(shí)際存在的內(nèi)毒現(xiàn)象，使試驗(yàn)反應(yīng)高于實(shí)際存在的內(nèi)毒素總量。素總量。 非內(nèi)毒素相關(guān)因素（通常由試驗(yàn)樣品的非內(nèi)毒素相關(guān)因素（通常由試驗(yàn)樣品的特性所致）導(dǎo)

11、致的細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)異常特性所致）導(dǎo)致的細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)異?，F(xiàn)象，使試驗(yàn)反應(yīng)低于實(shí)際存在的內(nèi)毒現(xiàn)象，使試驗(yàn)反應(yīng)低于實(shí)際存在的內(nèi)毒素總量。素總量。抑制抑制 inhibition抑制抑制/ /增強(qiáng)試驗(yàn)增強(qiáng)試驗(yàn)inhibition/enhancement testinhibition/enhancement test用于確定某一特定細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)樣品用于確定某一特定細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)樣品是否含有減小試驗(yàn)準(zhǔn)確性的因素是否含有減小試驗(yàn)準(zhǔn)確性的因素, ,即是否即是否對(duì)試驗(yàn)系統(tǒng)產(chǎn)生抑制或增強(qiáng)作用的試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)系統(tǒng)產(chǎn)生抑制或增強(qiáng)作用的試驗(yàn)山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心定義和術(shù)語(yǔ)定義和術(shù)語(yǔ)最

12、大有效稀釋倍數(shù)(MVD) 是指在試驗(yàn)中供試品溶液被允許達(dá)到稀釋的最大倍是指在試驗(yàn)中供試品溶液被允許達(dá)到稀釋的最大倍數(shù)數(shù), ,在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值的在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值的檢測(cè)檢測(cè). .鱟試劑鱟試劑LAL 反應(yīng)材料反應(yīng)材料（LAL reactive material (LAL-RM)任何激活鱟試劑任何激活鱟試劑LAL并引起增強(qiáng)的非內(nèi)毒素成分并引起增強(qiáng)的非內(nèi)毒素成分靈敏度靈敏度lambda ()鱟試劑鱟試劑LAL凝膠試劑的標(biāo)稱靈敏度，以凝膠試劑的標(biāo)稱靈敏度，以EU/mL表表示。或，對(duì)于顯色法和濁度法，為參照標(biāo)準(zhǔn)曲線示?；颍瑢?duì)于顯色法和濁度法，為參照標(biāo)準(zhǔn)曲線的最

13、低點(diǎn)（內(nèi)毒素濃度）。的最低點(diǎn)（內(nèi)毒素濃度）。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心定義和術(shù)語(yǔ)定義和術(shù)語(yǔ)鱟氏劑鱟氏劑 （LAL） 從鱟（從鱟（horseshoe crab）美國(guó)鱟（美國(guó)鱟（Limulus polyphemus）或中國(guó)鱟（或中國(guó)鱟（Tachypleus tridentatus）的循環(huán)血變形細(xì)的循環(huán)血變形細(xì)胞中提取的試劑，與內(nèi)毒素相互反應(yīng)產(chǎn)生凝膠，用于胞中提取的試劑，與內(nèi)毒素相互反應(yīng)產(chǎn)生凝膠，用于細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素水平。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素水平。試驗(yàn)內(nèi)毒素限值試驗(yàn)內(nèi)毒素限值test endotoxin limit浸提液中所允許的最大內(nèi)毒素濃度，

14、該確定的限值用于浸提液中所允許的最大內(nèi)毒素濃度，該確定的限值用于計(jì)算樣品浸提（多個(gè)單位和一個(gè)單元）的最大有效稀釋倍計(jì)算樣品浸提（多個(gè)單位和一個(gè)單元）的最大有效稀釋倍數(shù)數(shù) 鱟氏劑鱟氏劑 （LAL） 從鱟（從鱟（horseshoe crab）美國(guó)鱟（美國(guó)鱟（Limulus polyphemus）或中國(guó)鱟（或中國(guó)鱟（Tachypleus tridentatus）的循環(huán)血變形細(xì)的循環(huán)血變形細(xì)胞中提取的試劑，與內(nèi)毒素相互反應(yīng)產(chǎn)生凝膠，用于胞中提取的試劑，與內(nèi)毒素相互反應(yīng)產(chǎn)生凝膠，用于細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素水平。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素水平。試驗(yàn)內(nèi)毒素限值試驗(yàn)內(nèi)毒素限值test endotoxi

15、n limit浸提液中所允許的最大內(nèi)毒素濃度，該確定的限值用于浸提液中所允許的最大內(nèi)毒素濃度，該確定的限值用于計(jì)算樣品浸提（多個(gè)單位和一個(gè)單元）的最大有效稀釋倍計(jì)算樣品浸提（多個(gè)單位和一個(gè)單元）的最大有效稀釋倍數(shù)數(shù) 山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心需控制內(nèi)毒素的醫(yī)療器械需控制內(nèi)毒素的醫(yī)療器械 直接或間接與血管內(nèi)、淋巴內(nèi)或鞘內(nèi)接觸的產(chǎn)品，或是可能與類似系統(tǒng)接觸的產(chǎn)品（如輸液器、輸移器、導(dǎo)管、植入物和輸液組件）、或是眼內(nèi)使用的眼科產(chǎn)品（如硅油、黏彈性產(chǎn)品、眼內(nèi)透鏡）應(yīng)評(píng)價(jià)內(nèi)毒素。 滿足內(nèi)毒素要求的產(chǎn)品可給出聲稱非致熱性的標(biāo)簽。 注： 國(guó)外產(chǎn)品通常不標(biāo)示無熱原，因?yàn)闊o熱原

16、意味著絕對(duì)不含細(xì)菌內(nèi)毒 素。而所有BET方法的固有檢出限都無法使試驗(yàn)證實(shí)絕對(duì)不含有 細(xì)菌內(nèi)毒素。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前有三種細(xì)菌內(nèi)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前有三種細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)技術(shù)可供選擇。每一毒素檢驗(yàn)技術(shù)可供選擇。每一技術(shù)的選擇宜建立在實(shí)驗(yàn)室技技術(shù)的選擇宜建立在實(shí)驗(yàn)室技能、經(jīng)驗(yàn)、樣品量要求、數(shù)據(jù)能、經(jīng)驗(yàn)、樣品量要求、數(shù)據(jù)處置要求和試驗(yàn)樣品性質(zhì)之上處置要求和試驗(yàn)樣品性質(zhì)之上的充分評(píng)定。當(dāng)前技術(shù)和方法的充分評(píng)定。當(dāng)前技術(shù)和方法包括包括當(dāng)前技術(shù)和方法當(dāng)前技術(shù)和方法凝膠技術(shù)：限值試驗(yàn)和測(cè)定方法；凝膠技術(shù)：限值試驗(yàn)和測(cè)定方法；顯色技術(shù)：動(dòng)力學(xué)和終點(diǎn)方法；顯色技術(shù)

17、：動(dòng)力學(xué)和終點(diǎn)方法； 濁度技術(shù)：動(dòng)力學(xué)和終點(diǎn)方法濁度技術(shù)：動(dòng)力學(xué)和終點(diǎn)方法山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心將試驗(yàn)樣品稀釋至將試驗(yàn)樣品稀釋至確認(rèn)過的濃度確認(rèn)過的濃度在在10mm75mm玻璃試管內(nèi)與鱟玻璃試管內(nèi)與鱟試劑等體積混合試劑等體積混合不能保持完整不能保持完整者為陰性試驗(yàn)者為陰性試驗(yàn)?zāi)z堅(jiān)實(shí)并保持凝膠堅(jiān)實(shí)并保持完整者為陽(yáng)性試驗(yàn)完整者為陽(yáng)性試驗(yàn)當(dāng)前技術(shù)和方法當(dāng)前技術(shù)和方法 凝膠技術(shù)凝膠技術(shù)限值試驗(yàn)和分析方法限值試驗(yàn)和分析方法孵育后將各孵育后將各試管從孵育試管從孵育器中小心地器中小心地取出，緩慢取出，緩慢倒轉(zhuǎn)倒轉(zhuǎn)180凝膠法無論是在所需進(jìn)行確認(rèn)分析的技術(shù)技能方面，還是

18、在數(shù)據(jù)解釋/分析方面，都是最簡(jiǎn)便的BET技術(shù)。設(shè)備投資很小，僅需一臺(tái)適宜的鑒定的維護(hù)的和性能合格的水浴箱或加熱器（heating block）及輔件。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心當(dāng)前技術(shù)和方法當(dāng)前技術(shù)和方法 顯色和濁度技術(shù)顯色和濁度技術(shù)終點(diǎn)方法終點(diǎn)方法原理基于內(nèi)毒素濃度和產(chǎn)色（顯色）或濁度之間的線性關(guān)系，顯色或濁度是通過給定波長(zhǎng)（在相對(duì)小的標(biāo)準(zhǔn)系列稀釋液范圍內(nèi)被評(píng)價(jià)）下測(cè)量光密度來測(cè)量。通過測(cè)定用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（用于光度測(cè)定法）制備的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)系列稀釋液的光密度，繪制出內(nèi)毒素濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。進(jìn)行線性回歸分析，形成的“最適宜”的標(biāo)準(zhǔn)曲線覆蓋約1個(gè)log內(nèi)毒素范圍

19、，一般為1.0 EU/mL0.1 EU/mL或0.1 EU/mL0.01 EU/mL。相關(guān)系數(shù)是所觀察的各點(diǎn)相對(duì)離開回歸線的統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)量，線性被定義為相關(guān)系數(shù)的絕對(duì)值0.980。通過測(cè)定樣品的光密度并插入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出未知的內(nèi)毒素水平。終點(diǎn)法一般使用酶標(biāo)板，還需要一臺(tái)加熱器和一臺(tái)經(jīng)鑒定的酶標(biāo)儀，酶標(biāo)儀配有建立標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包（線性回歸分析）。顯色和濁度方法與凝膠試驗(yàn)相比要更多地依賴于良好的分析技術(shù)，在分析和解釋數(shù)據(jù)時(shí)要應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心當(dāng)前技術(shù)和方法當(dāng)前技術(shù)和方法 顯色和濁度技術(shù)顯色和濁度技術(shù)動(dòng)力學(xué)方法動(dòng)力學(xué)方法原理測(cè)定

20、系列標(biāo)準(zhǔn)稀釋液到達(dá)預(yù)先確定的光密度程度（動(dòng)力學(xué)濁度）或顯色程度（動(dòng)力學(xué)顯色）所耗用的時(shí)間量，有時(shí)稱為啟動(dòng)OD（onset OD）或反應(yīng)OD(reaction OD)。通過繪制啟動(dòng)或反應(yīng)時(shí)間（即每一標(biāo)準(zhǔn)或樣品達(dá)到啟動(dòng)OD的所耗用的時(shí)間）的log值與內(nèi)毒素濃度的log值有函數(shù)關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。該數(shù)據(jù)經(jīng)log/log處理的建立了一條線性標(biāo)準(zhǔn)曲線。為動(dòng)力學(xué)分析所建的曲線范圍可高達(dá)4個(gè)log，而終點(diǎn)分析的所建曲線范圍只有1個(gè)log，除非使用其他經(jīng)批準(zhǔn)回歸分析方法（目前FDA受權(quán)的都是基于一家生產(chǎn)商的試劑），用橫跨各觀察點(diǎn)的線性回歸分析來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，動(dòng)力學(xué)方法最小線性要求為相關(guān)系數(shù) 0.980。與終點(diǎn)

21、方法一樣，可將樣品的onset時(shí)間的對(duì)數(shù)值插入從標(biāo)準(zhǔn)曲線被計(jì)算出未知的細(xì)菌內(nèi)毒素含量。動(dòng)力學(xué)方法可使用酶標(biāo)板、玻璃管或其他確認(rèn)過的技術(shù)。這些方法都需經(jīng)確認(rèn)的讀取結(jié)果的設(shè)備并配備建立標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包（回歸分析）。在這些方法專用電子表格或數(shù)據(jù)基礎(chǔ)軟件包的使用，可極大地便利數(shù)據(jù)的即時(shí)分析和走勢(shì)分析。與終點(diǎn)方法一樣，證實(shí)一個(gè)好的、恒定的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)主要取決于分析人員，在分析和解釋數(shù)據(jù)時(shí)還要用到基礎(chǔ)統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心資料介紹資料介紹-確定產(chǎn)品內(nèi)毒素限值確定產(chǎn)品內(nèi)毒素限值USP34中規(guī)定的醫(yī)療器械的內(nèi)毒素限值對(duì)于醫(yī)療器械而言，每件器

22、械內(nèi)毒素限值不超過20.0 USP EU。然而，與腦脊液接觸器械的內(nèi)毒素限值為每件器械不超過2.15 USP EU。FDA指南（1987）中規(guī)定的醫(yī)療器械的內(nèi)毒素限值器械內(nèi)毒素限值為0.5 EU/mL，與腦脊液接觸器械的內(nèi)毒素限值為0.06 EU/mL。內(nèi)毒素限值內(nèi)毒素限值這些限值是建立在每件器械這些限值是建立在每件器械40mL40mL沖洗液的基礎(chǔ)之上。對(duì)于與病人接觸沖洗液的基礎(chǔ)之上。對(duì)于與病人接觸表面積特別小或大型器械，可使用一個(gè)調(diào)節(jié)因子來選擇沖洗或浸提體表面積特別小或大型器械，可使用一個(gè)調(diào)節(jié)因子來選擇沖洗或浸提體積。內(nèi)毒素限值可相應(yīng)調(diào)整。積。內(nèi)毒素限值可相應(yīng)調(diào)整。注意：注意：山東省醫(yī)療器械

23、產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心資料介紹資料介紹-確定產(chǎn)品內(nèi)毒素限值確定產(chǎn)品內(nèi)毒素限值成套器械成套器械成套器械被定義為在一個(gè)初包裝內(nèi)多組件的集合，成套器械在使用地點(diǎn)裝配成醫(yī)療產(chǎn)品。在這種情況下規(guī)定的內(nèi)毒素限值是針對(duì)組裝后器械的，而非各組件的內(nèi)毒素限值（見表1）。當(dāng)檢驗(yàn)一個(gè)成套器械的分組件時(shí)，可以使用混合的浸提液，前提是要保留各成套器械浸提液的比例。比如，某一器械可能有3個(gè)組件，各組件所用的浸提液總體積應(yīng)不超過MVD。這可以用一份浸提液對(duì)所有3個(gè)組件浸提，也可將三個(gè)組件各用一部分液體分別浸提然后混合，還可將這兩種方法組合起來。當(dāng)組合后樣品出現(xiàn)結(jié)果不確定時(shí)，就需要分別檢驗(yàn)各組件，以研

24、究各組件的污染源。器械包器械包器械包被定義為在一個(gè)初包裝內(nèi)或各種醫(yī)療器械過程中多個(gè)醫(yī)療產(chǎn)品的集合。各器械可以有各自的產(chǎn)品內(nèi)毒素限值，且宜分別進(jìn)行試驗(yàn)和評(píng)價(jià)（見表1）。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心產(chǎn)品單元檢驗(yàn)項(xiàng)目基于非致熱性聲稱說明a) 初包裝中獨(dú)立初包裝中獨(dú)立的醫(yī)療器械的醫(yī)療器械 獨(dú)立醫(yī)療器械獨(dú)立醫(yī)療器械獨(dú)立醫(yī)療器械獨(dú)立醫(yī)療器械各醫(yī)療器械在臨床應(yīng)用中各醫(yī)療器械在臨床應(yīng)用中獨(dú)立使用獨(dú)立使用b) 初包裝中成套初包裝中成套組件組件組件的組合組件的組合組件的組合組件的組合在臨床應(yīng)用中組件被裝配在臨床應(yīng)用中組件被裝配成一套產(chǎn)品并一起使成一套產(chǎn)品并一起使用。用。c) 初包裝

25、中若干初包裝中若干相同的醫(yī)療器相同的醫(yī)療器械械取自初包裝的單一取自初包裝的單一醫(yī)療器械醫(yī)療器械取自初包裝的單一醫(yī)取自初包裝的單一醫(yī)療器械療器械在臨床應(yīng)用中各醫(yī)療器械在臨床應(yīng)用中各醫(yī)療器械獨(dú)立使用獨(dú)立使用d) 醫(yī)療過程相關(guān)醫(yī)療過程相關(guān)的含多個(gè)器械的含多個(gè)器械包包聲稱無致熱性的每聲稱無致熱性的每種醫(yī)療器械種醫(yī)療器械聲稱無致熱性的每種聲稱無致熱性的每種醫(yī)療器械醫(yī)療器械 在臨床應(yīng)用中每種醫(yī)療在臨床應(yīng)用中每種醫(yī)療器械獨(dú)立使用，可有器械獨(dú)立使用，可有不同的產(chǎn)品內(nèi)毒素限不同的產(chǎn)品內(nèi)毒素限值值 表表1 檢驗(yàn)產(chǎn)品單元的選擇檢驗(yàn)產(chǎn)品單元的選擇資料介紹資料介紹-確定產(chǎn)品內(nèi)毒素限值確定產(chǎn)品內(nèi)毒素限值山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品

26、質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心供試品溶液的制備供試品溶液的制備 醫(yī)療器械在水性溶液中浸提制成供試品溶液醫(yī)療器械在水性溶液中浸提制成供試品溶液,必要時(shí)可調(diào)節(jié)被測(cè)溶必要時(shí)可調(diào)節(jié)被測(cè)溶液液(或其稀釋液或其稀釋液)的的pH值值,一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在值在6.0-8.0的范圍內(nèi)為宜的范圍內(nèi)為宜,可用適宜的酸或堿溶液或緩沖液調(diào)節(jié)可用適宜的酸或堿溶液或緩沖液調(diào)節(jié)pH值值.酸或堿酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器內(nèi)配制溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器內(nèi)配制.緩沖液必緩沖液必須經(jīng)過驗(yàn)證不含內(nèi)毒素和干擾因子須經(jīng)過驗(yàn)證

27、不含內(nèi)毒素和干擾因子.山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心醫(yī)療器械產(chǎn)品試驗(yàn)內(nèi)毒素限值醫(yī)療器械產(chǎn)品試驗(yàn)內(nèi)毒素限值一旦確定了產(chǎn)品內(nèi)毒素限值，試驗(yàn)內(nèi)毒素限值可按下式計(jì)算：一旦確定了產(chǎn)品內(nèi)毒素限值，試驗(yàn)內(nèi)毒素限值可按下式計(jì)算：試驗(yàn)內(nèi)毒素限值（試驗(yàn)內(nèi)毒素限值（EU/mL）K*N/VK= 每一器械內(nèi)毒素允許量（產(chǎn)品內(nèi)毒素限值）；N= 供試器械數(shù)量；V= 樣品組合中的浸提液總量（mL）。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心確定最大有效稀釋倍數(shù)確定最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)(MVD)MVD=試驗(yàn)內(nèi)毒素限值試驗(yàn)內(nèi)毒素限值/ 經(jīng)認(rèn)定的鱟試劑標(biāo)示靈敏度（凝膠法）或用

28、于繪制參照標(biāo)準(zhǔn)曲線（顯色和濁度）的最低 內(nèi)毒素濃度。 該MVD值表示了基于鱟試劑靈敏度的克服抑制/增強(qiáng)作用所能進(jìn)行的稀釋倍數(shù)。 如MVD為4，即按不大于1：4的比例稀釋樣品浸提液不影響檢測(cè)產(chǎn)品內(nèi)毒素限值的能力。如可行，宜在低于最大有效稀釋的稀釋度下對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行確認(rèn)。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法凝膠法定義：定義：凝膠法系通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來檢測(cè)或半定量檢測(cè)內(nèi)毒素的方法。標(biāo)示靈敏度：標(biāo)示靈敏度：在本檢查法規(guī)定的條件下,使鱟試劑產(chǎn)生凝集的內(nèi)毒素的最低濃度,即為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度,用EU/mL表示.當(dāng)使用新批號(hào)的鱟試劑或試驗(yàn)條件發(fā)生了任何可能影響檢

29、驗(yàn)結(jié)果的改變時(shí),應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn).注意：注意：山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法凝膠法 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo) 準(zhǔn)溶液的制備 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備將已充分溶解的待復(fù)核鱟試劑18支放在試管架上，排成5列，其中4列4支，1列2支。4支4列每列每支分別加入0.1ml2、1、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；另2支加入0.1ml檢查用水。加樣結(jié)束后保溫60min2min將每管拿出緩緩倒轉(zhuǎn)180觀察，若管內(nèi)形成凝膠，且凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為（）；未形成凝膠或形成的凝膠不堅(jiān)實(shí)、變形并從管壁滑脫者為陰性，

30、記錄為（）1.細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，75%乙醇棉球擦拭后啟開，啟開過程中應(yīng)防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解其內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置漩渦混合器混合15min。然后進(jìn)行稀釋，制備成4個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，即2、1、0.5、0.25（為所復(fù)核的鱟試劑的標(biāo)示靈敏度），每稀釋一步均應(yīng)在漩渦混合器上混合30秒鐘。2. 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備取待復(fù)核的鱟試劑，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入規(guī)定量的檢查用水

31、溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，并避免產(chǎn)生氣泡。然后每0.1ml分裝到18支管備用。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo) 準(zhǔn)溶液的制備 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備將已充分溶解的待復(fù)核鱟試劑18支放在試管架上，排成5列，其中4列4支，1列2支。4支4列每列每支分別加入0.1ml2、1、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；另2支加入0.1ml檢查用水。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo) 準(zhǔn)溶液的制備 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備加樣結(jié)束后保溫60min2min將已充分溶解的待復(fù)核鱟試劑18支放在試管架上，排成5列，其中4列4支，1列2支。4支4列每列每支分別加入0.1ml2、1、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；另2支加入0.1ml檢查用水。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)

32、準(zhǔn)溶液的制備 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備將每管拿出緩緩倒轉(zhuǎn)180觀察，若管內(nèi)形成凝膠，且凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為（）；未形成凝膠或形成的凝膠不堅(jiān)實(shí)、變形并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（）加樣結(jié)束后保溫60min2min將已充分溶解的待復(fù)核鱟試劑18支放在試管架上，排成5列，其中4列4支，1列2支。4支4列每列每支分別加入0.1ml2、1、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；另2支加入0.1ml檢查用水。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo) 準(zhǔn)溶液的制備 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作1.細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)

33、準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，75%乙醇棉球擦拭后啟開，啟開過程中應(yīng)防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解其內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置漩渦混合器混合15min。然后進(jìn)行稀釋，制備成4個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，即2、1、0.5、0.25（為所復(fù)核的鱟試劑的標(biāo)示靈敏度），每稀釋一步均應(yīng)在漩渦混合器上混合30秒鐘。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作 2. 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備 取待復(fù)核的鱟試劑，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防

34、止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入規(guī)定量的檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，并避免產(chǎn)生氣泡。然后每0.1ml分裝到18支管備用。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法凝膠法 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 當(dāng)最大濃度2 4管均為陽(yáng)性，最低濃度0.25 4管均為陰性，陰性對(duì)照為陰性時(shí)，試驗(yàn)為有效，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度的測(cè)定值（c）。c=lg-1(X/4)式中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列遞減的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液中最后一個(gè)呈陽(yáng)性結(jié)果的濃度。當(dāng)c在0.52（包括0.5和2）時(shí)判定該批鱟

35、試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于干擾試驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以為該批鱟試劑的靈敏度。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法凝膠法 干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn)?zāi)康氖谴_定供試品在多大的稀釋倍數(shù)或濃度下對(duì)內(nèi)毒素和鱟試劑的反應(yīng)不存在干擾作用，為能否使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法提供依據(jù)。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法凝膠法 干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn)?zāi)康模耗康模菏菣z驗(yàn)在某一濃度下的供試品對(duì)于鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)有無干擾作用。是檢驗(yàn)在某一濃度下的供試品對(duì)于鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)有無干擾作用。取1支細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成4個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶

36、液即2、1、 0.5、0.25。2. 用供試品溶液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋成4個(gè)濃度即2、1、0.5、0.25的含內(nèi)毒素的 供試品溶液。3. 準(zhǔn)備鱟試劑：輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%乙醇棉球 擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)，每支加入規(guī)定容量的檢查用水溶解，輕 輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡，按0.1mL/支的規(guī)格分裝36管備 用。加樣：將準(zhǔn)備好的鱟試劑取其中18支放在試管架上，排成5列，4列4支，1列2支。其中的4支4列 每列每支分別加入0.1mL的2、1、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，另一列2支加入0.1mL檢查用水作為陰性對(duì)照。將另外18支鱟試劑排成

37、5列，4列4支，1列2支。其中的4支4列每列每支分別加入0.1mL的2、1、0.5、0.25的內(nèi)毒素的供試品溶液，另一列2支加入0.1mL供試品溶液作為樣品陰性對(duì)照。4.山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法干擾試驗(yàn)溶液的制備 編號(hào)編號(hào)內(nèi)毒素濃度內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的被加入內(nèi)毒素的溶液溶液稀釋用液稀釋用液稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)所含內(nèi)毒素濃度所含內(nèi)毒素濃度平行管數(shù)平行管數(shù)AB無無/供試品溶液供試品溶液2/供試品溶液供試品溶液-供試品溶液供試品溶液-1248-210.50.2524444C2/檢查用水檢查用水檢查用水檢查用水1248210.50254444D無無/檢查用水

38、檢查用水-2山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法干擾試驗(yàn)溶液的制備v注：注：vA為供試品溶液；為供試品溶液；vB為干擾試驗(yàn)系列；為干擾試驗(yàn)系列；vC為鱟試劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列；為鱟試劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列；vD為陰性對(duì)照。為陰性對(duì)照。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法干擾試驗(yàn)v只有當(dāng)溶液只有當(dāng)溶液A和陰性對(duì)照溶液和陰性對(duì)照溶液D的所有平行管都的所有平行管都為陰性，并且系列溶液為陰性，并且系列溶液C的結(jié)果符合鱟試劑靈敏的結(jié)果符合鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)要求時(shí)，試驗(yàn)方為有效。度復(fù)核試驗(yàn)要求時(shí)，試驗(yàn)方為有效。v當(dāng)系列溶液當(dāng)系列溶液C的結(jié)果符

39、合鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)的結(jié)果符合鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)要求時(shí)，認(rèn)為供試品在該濃度下無干擾作用。要求時(shí)，認(rèn)為供試品在該濃度下無干擾作用。v其它情況則認(rèn)為供試品在該濃度下有干擾作用。其它情況則認(rèn)為供試品在該濃度下有干擾作用。v若供試品溶液在小于若供試品溶液在小于MVD的稀釋倍數(shù)下對(duì)試驗(yàn)有的稀釋倍數(shù)下對(duì)試驗(yàn)有干擾，應(yīng)將供試品溶液進(jìn)行不超過干擾，應(yīng)將供試品溶液進(jìn)行不超過MVD的進(jìn)一步的進(jìn)一步稀釋，再重新干擾試驗(yàn)。稀釋，再重新干擾試驗(yàn)。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法干擾試驗(yàn)v可通過對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋或通過其它可通過對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋或通過其它適宜的方法（

40、如過濾適宜的方法（如過濾,中和中和,透析或加熱處理等）透析或加熱處理等）排除干擾。為確保所選擇的處理方法能有效的排排除干擾。為確保所選擇的處理方法能有效的排除干擾且不會(huì)使內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先填除干擾且不會(huì)使內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先填加了標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素再經(jīng)過處理的供試品溶液進(jìn)行干加了標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素再經(jīng)過處理的供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。擾試驗(yàn)。v 當(dāng)進(jìn)行新產(chǎn)品的內(nèi)毒素檢驗(yàn)試驗(yàn)前，須進(jìn)行干擾試驗(yàn)。當(dāng)進(jìn)行新產(chǎn)品的內(nèi)毒素檢驗(yàn)試驗(yàn)前，須進(jìn)行干擾試驗(yàn)。v 或無內(nèi)毒素檢驗(yàn)項(xiàng)的品種建立內(nèi)毒素檢查法時(shí)，須進(jìn)行干擾試或無內(nèi)毒素檢驗(yàn)項(xiàng)的品種建立內(nèi)毒素檢查法時(shí)，須進(jìn)行干擾試驗(yàn)。驗(yàn)。v 當(dāng)鱟試劑，供試品的處方，生產(chǎn)工藝改變

41、或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了當(dāng)鱟試劑，供試品的處方，生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，須重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，須重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法凝膠法 干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn)5.試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 如兩組最大濃度2均為陽(yáng)性，最低濃度0.25均為陰性，陰性對(duì)照4管均為陰 性時(shí)，按下式計(jì)算用檢查用水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的檢查用水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值（幾何平均值（Es） 和用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的

42、幾何平均值（幾何平均值（Et）。）。Es= lg-1(Xs/4)Et= lg-1(Xt/4) 式中Xs和Xt分別為檢查用水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。當(dāng)Es在0.52（包括0.5和2）時(shí)，且Et在0.5Es2Es（包括0.5 Es和2 Es）時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，可在該濃度下對(duì)此供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。當(dāng)Et不在0.5Es2Es（包括0.5 Es和2 Es）時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下干擾試驗(yàn)，應(yīng)使用適宜方法排除干擾。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查v 1.供試品溶液的制

43、備供試品溶液的制備 首先計(jì)算首先計(jì)算MVD= CL/，然后將供，然后將供試品進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù)不得超過試品進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù)不得超過MVD。v 2 .陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備 用檢查用水將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋制成用檢查用水將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋制成2濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。v 3.供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備 用待檢測(cè)的供試品溶液或用待檢測(cè)的供試品溶液或其稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成其稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成2濃度的內(nèi)毒素溶液。濃度的內(nèi)毒素溶液。v 4. 陰性對(duì)照液陰性對(duì)照液 即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水.v 5. 鱟試劑的準(zhǔn)備鱟試劑的準(zhǔn)備 取若干支鱟試

44、劑輕彈瓶壁使粉末落入瓶取若干支鱟試劑輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%乙醇棉球擦拭后啟開乙醇棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)，每支加入規(guī)定容量的檢查用備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)，每支加入規(guī)定容量的檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡，按泡，按0.1mL/支的規(guī)格分裝支的規(guī)格分裝8管備用。管備用。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心 凝膠限度試驗(yàn)溶液的制備 編號(hào)編號(hào) 內(nèi)毒素濃度內(nèi)毒素濃度/配制內(nèi)毒素的溶液配制內(nèi)毒素的溶液平行管數(shù)平行管數(shù)A無無/供試品溶液

45、供試品溶液2B2/供試品溶液供試品溶液2C2/檢查用水檢查用水2D無無/檢查用水檢查用水2山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠法干擾試驗(yàn)溶液的制備v注：注：vA為供試品溶液為供試品溶液;vB為供試品溶液陽(yáng)性對(duì)照；為供試品溶液陽(yáng)性對(duì)照；vC為陽(yáng)性對(duì)照；為陽(yáng)性對(duì)照；vD為陰性對(duì)照。為陰性對(duì)照。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心v6. 加樣加樣 取取8支溶解好的鱟試劑，其中支溶解好的鱟試劑，其中2支加入支加入0.1mL供試品溶液或其稀釋液作為供試品管，供試品溶液或其稀釋液作為供試品管，2支加入支加入0.1mL陽(yáng)性對(duì)照溶液作為陽(yáng)性對(duì)照管，陽(yáng)性對(duì)照溶

46、液作為陽(yáng)性對(duì)照管，2支加入支加入0.1mL檢查用水作為陰性對(duì)照，檢查用水作為陰性對(duì)照，2支加入支加入0.1mL供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照。（。（371），（，（602）min保溫后，觀察保溫后，觀察并記錄結(jié)果并記錄結(jié)果。供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心v 7. 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照、供試品陽(yáng)性對(duì)照都為陽(yáng)性且陰當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照、供試品陽(yáng)性對(duì)照都為陽(yáng)性且陰性對(duì)照為陰性時(shí)，試驗(yàn)方為有效。若供試品性對(duì)照為陰性時(shí)，試驗(yàn)方為有效。若供試品2管均為陰性管均為陰性，認(rèn)為該供試品符合規(guī)定；如供試品

47、，認(rèn)為該供試品符合規(guī)定；如供試品2管均為陽(yáng)性，應(yīng)認(rèn)管均為陽(yáng)性，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如為不符合規(guī)定；如2管中一管為陽(yáng)性，一管為陰性，按上管中一管為陽(yáng)性，一管為陰性，按上述方法另取述方法另取4支供試品管復(fù)試，支供試品管復(fù)試，4管中如有管中如有1管為陽(yáng)性，即管為陽(yáng)性，即認(rèn)為不符合規(guī)定。若第一次試驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于認(rèn)為不符合規(guī)定。若第一次試驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而結(jié)果出現(xiàn)而結(jié)果出現(xiàn)2管均為陽(yáng)性或管均為陽(yáng)性或2管中管中1管為陽(yáng)性時(shí)，按管為陽(yáng)性時(shí)，按同樣方法重新進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)要求將其稀釋至同樣方法重新進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)要求將其稀釋至MVD。供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查山東省醫(yī)療器械

48、產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心內(nèi)毒素試驗(yàn)實(shí)例展示內(nèi)毒素試驗(yàn)實(shí)例展示 凝膠限度法凝膠限度法山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心內(nèi)內(nèi) 容容試驗(yàn)設(shè)備試驗(yàn)設(shè)備 1 2 3試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程2試驗(yàn)耗材試驗(yàn)耗材2 3山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)設(shè)備試驗(yàn)設(shè)備振蕩培養(yǎng)箱振蕩培養(yǎng)箱試管恒溫儀試管恒溫儀漩渦振蕩器漩渦振蕩器電熱恒溫干烤箱電熱恒溫干烤箱山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)耗材試驗(yàn)耗材v內(nèi)毒素檢查用水內(nèi)毒素檢查用水(0.015EU/ml,0.005EU/ml)v0.9%氯化鈉注射液氯化鈉注射液v鱟試劑

49、鱟試劑(0.25EU/ml0.03EU/ml）v無熱原吸頭無熱原吸頭v內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：中國(guó)食品藥品檢定研究院內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：中國(guó)食品藥品檢定研究院山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v1.制備供試品溶液，以一次性使用血液回收罐裝置制備供試品溶液，以一次性使用血液回收罐裝置為例，根據(jù)藥典的規(guī)定，每套器材加為例，根據(jù)藥典的規(guī)定，每套器材加100ml氯化氯化鈉注射液，在鈉注射液，在37恒溫培養(yǎng)箱中浸提恒溫培養(yǎng)箱中浸提1h。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v2.制備陽(yáng)性對(duì)照溶液。取一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)制備陽(yáng)性對(duì)照溶

50、液。取一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行溶準(zhǔn)品，加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行溶解，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置漩渦混合器混合解，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置漩渦混合器混合15min。 然后將工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到然后將工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到2 濃度。濃度。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v每稀釋一步均應(yīng)在漩渦混合器上混合每稀釋一步均應(yīng)在漩渦混合器上混合30秒鐘秒鐘 。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v3.制備供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液制備供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液 用待檢測(cè)的供試品用待檢測(cè)的供試品溶液或其稀釋液將內(nèi)

51、毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成溶液或其稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成2濃度的內(nèi)濃度的內(nèi)毒素溶液。毒素溶液。 例如：例如： 100ul待測(cè)的供試品溶液待測(cè)的供試品溶液+100ul 4濃度的內(nèi)濃度的內(nèi)毒素溶液毒素溶液=200ul 2濃度的供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液濃度的供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。v4.陰性對(duì)照液陰性對(duì)照液 即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v3.制備供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液制備供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液 用待檢測(cè)的供試品用待檢測(cè)的供試品溶液或其稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成溶液或其稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成2濃度的內(nèi)濃度的內(nèi)毒素溶液。毒素溶液。 例如：例如：

52、 100ul待測(cè)的供試品溶液待測(cè)的供試品溶液+100ul 4濃度的內(nèi)濃度的內(nèi)毒素溶液毒素溶液=200ul 2濃度的供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液濃度的供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。v4.陰性對(duì)照液陰性對(duì)照液 即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v5.準(zhǔn)備鱟試劑準(zhǔn)備鱟試劑 每支鱟試劑加入規(guī)定容量的檢查每支鱟試劑加入規(guī)定容量的檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡，按避免產(chǎn)生氣泡，按0.1mL/支的規(guī)格分裝支的規(guī)格分裝 。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中

53、心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v 6.加樣加樣 取取8支溶解好的鱟試劑，其中支溶解好的鱟試劑，其中2支加入支加入0.1mL供供試品溶液或其稀釋液作為供試品管，試品溶液或其稀釋液作為供試品管，2支加入支加入0.1mL陽(yáng)性陽(yáng)性對(duì)照溶液作為陽(yáng)性對(duì)照管，對(duì)照溶液作為陽(yáng)性對(duì)照管，2支加入支加入0.1mL檢查用水作為檢查用水作為陰性對(duì)照，陰性對(duì)照，2支加入支加入0.1mL供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液作為供試供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照。（品陽(yáng)性對(duì)照。（371），（，（602）min保溫后，保溫后，觀察并記錄結(jié)果。觀察并記錄結(jié)果。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心試驗(yàn)過程試驗(yàn)過程v7.結(jié)果判斷結(jié)

54、果判斷陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠半定量試驗(yàn)v本方法系通過確定反應(yīng)終點(diǎn)濃度來量化供試品中本方法系通過確定反應(yīng)終點(diǎn)濃度來量化供試品中內(nèi)毒素的含量。按下表制備溶液內(nèi)毒素的含量。按下表制備溶液A,B,C和和D。按。按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。 山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠半定量試驗(yàn)溶液的制備 編號(hào)編號(hào)內(nèi)毒素濃度內(nèi)毒素濃度/被加入被加入內(nèi)毒素的溶液內(nèi)毒素的溶液稀釋用液稀釋用液稀釋稀釋倍倍數(shù)數(shù)所含內(nèi)毒素濃度所含內(nèi)毒素濃度平行管數(shù)平行管數(shù)A無無/供試品溶液供試品溶液檢查用水檢查用水12

55、48-2222B2/供試品溶液供試品溶液122C2/檢查用水檢查用水檢查用水檢查用水1248210.50252222D 無無/檢查用水檢查用水- 2山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠半定量試驗(yàn)v注：注：vA為不超過為不超過MVD并且通過干擾試驗(yàn)的供試品溶液并且通過干擾試驗(yàn)的供試品溶液。從通過干擾試驗(yàn)的稀釋倍數(shù)開始用檢查用水稀。從通過干擾試驗(yàn)的稀釋倍數(shù)開始用檢查用水稀釋至釋至1倍，倍，2倍，倍，4倍，倍，8倍，最后的稀釋倍數(shù)不倍，最后的稀釋倍數(shù)不得超過得超過MVD。vB為為2濃度標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素的溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素的溶液A（供試品陽(yáng)性對(duì)（供試品陽(yáng)性對(duì)照）。照）。vC為鱟試

56、劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列。為鱟試劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列。vD為陰性對(duì)照。為陰性對(duì)照。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心凝膠半定量試驗(yàn)結(jié)果判斷v 若陰性對(duì)照溶液若陰性對(duì)照溶液D的平行管均為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的平行管均為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液B的平行管均為陽(yáng)的平行管均為陽(yáng)性，系列溶液性，系列溶液C的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值在的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值在0.5-2，試驗(yàn)有效。，試驗(yàn)有效。v 系列溶液系列溶液A中每一系列的終點(diǎn)稀釋倍數(shù)乘以中每一系列的終點(diǎn)稀釋倍數(shù)乘以，為每個(gè)系列的反應(yīng)終點(diǎn)濃度。，為每個(gè)系列的反應(yīng)終點(diǎn)濃度。v 如果檢驗(yàn)的是經(jīng)稀釋的供試品，則將終點(diǎn)濃度乘以供

57、試品進(jìn)行半定量試驗(yàn)的初如果檢驗(yàn)的是經(jīng)稀釋的供試品，則將終點(diǎn)濃度乘以供試品進(jìn)行半定量試驗(yàn)的初始稀釋倍數(shù)，即得到每一系列內(nèi)毒素濃度始稀釋倍數(shù)，即得到每一系列內(nèi)毒素濃度c.v 若每一系列內(nèi)毒素濃度均小于規(guī)定的限值，判定供試品符合規(guī)定。每一系列內(nèi)若每一系列內(nèi)毒素濃度均小于規(guī)定的限值，判定供試品符合規(guī)定。每一系列內(nèi)毒素內(nèi)毒素濃度的幾何平均值即為供試品溶液的內(nèi)毒素濃度（毒素內(nèi)毒素濃度的幾何平均值即為供試品溶液的內(nèi)毒素濃度（ cE=lg-1(c/2) ）。）。v 若試驗(yàn)中供試品溶液的所有平行管均為陰性，應(yīng)記為內(nèi)毒素濃度小于若試驗(yàn)中供試品溶液的所有平行管均為陰性，應(yīng)記為內(nèi)毒素濃度小于（若檢（若檢驗(yàn)的是稀釋過的

58、供試品，記為小于驗(yàn)的是稀釋過的供試品，記為小于乘以供試品進(jìn)行半定量試驗(yàn)的初始稀釋倍乘以供試品進(jìn)行半定量試驗(yàn)的初始稀釋倍數(shù)）。數(shù)）。v 若任何系列內(nèi)毒素濃度不小于規(guī)定的限值時(shí)，則判定供試品不符合規(guī)定。當(dāng)供若任何系列內(nèi)毒素濃度不小于規(guī)定的限值時(shí)，則判定供試品不符合規(guī)定。當(dāng)供試品溶液的所有平行管均為陽(yáng)性，可記為內(nèi)毒素濃度大于或等于最大的稀釋倍試品溶液的所有平行管均為陽(yáng)性，可記為內(nèi)毒素濃度大于或等于最大的稀釋倍數(shù)乘以數(shù)乘以。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定儀細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定儀動(dòng)態(tài)濁度法動(dòng)態(tài)濁度法試管恒溫儀試管恒溫儀凝膠法凝

59、膠法電熱恒溫干烤箱電熱恒溫干烤箱山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心實(shí)例v產(chǎn)品一次性使用輸液器要求內(nèi)毒素限量不大于產(chǎn)品一次性使用輸液器要求內(nèi)毒素限量不大于20EU/套，現(xiàn)使用內(nèi)毒素靈敏度為套，現(xiàn)使用內(nèi)毒素靈敏度為0.25EU/mL的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算最多使用的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算最多使用多少體積的浸提液進(jìn)行試驗(yàn)。多少體積的浸提液進(jìn)行試驗(yàn)。v浸提液體積計(jì)算公式為：浸提液體積計(jì)算公式為：20EU/套套0.25EU/mL=80mLv浸提液體積應(yīng)不大于浸提液體積應(yīng)不大于80mL/套套山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心注意v熱原試驗(yàn)中，初試熱原試驗(yàn)中，

60、初試3只家兔中，體溫升高均低于只家兔中，體溫升高均低于0.6，并且，并且3只家兔升溫總和低于只家兔升溫總和低于1.3可判定可判定為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。v熱原試驗(yàn)是按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)熱原試驗(yàn)是按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886.11-2011醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第11部分：全身毒部分：全身毒性試驗(yàn)性試驗(yàn)的規(guī)定，按中華人民共和國(guó)藥典的規(guī)定，按中華人民共和國(guó)藥典2015年版四部通則年版四部通則1142熱原檢查法的方法進(jìn)行的。熱原檢查法的方法進(jìn)行的。山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心 初始污染菌檢驗(yàn)初始污染菌檢驗(yàn)山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量