1、微生物數(shù)量的測定微生物數(shù)量的測定 1明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理2掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。 微生物個(gè)體生長的時(shí)間較短，很快進(jìn)入分裂繁殖階段，個(gè)體生長難以測定。它們的生長一般以繁殖即群體生長作為微生物生長的指標(biāo)。群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法、光電比濁法等。 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。 1. 酵母菌液酵母菌液2. 顯微鏡、血球計(jì)數(shù)器顯微鏡、血球計(jì)數(shù)器3. 蓋玻片、毛細(xì)管等蓋玻片、毛細(xì)管等4-2血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載

2、玻片，有四條豎槽和一條橫槽。橫槽兩邊的平臺(tái)上各有一個(gè)有九個(gè)大方格的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室：邊長為mm，深為0.1mm，容積為0.1mm3(10-4ml)。計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格：一是分為16個(gè)中方格，每中方格中有25個(gè)小方格；另一種是分為25個(gè)中方格，每中方格有16個(gè)小方格。兩種都共有400個(gè)小方格。4-2血球計(jì)數(shù)板正面結(jié)構(gòu)圖計(jì)數(shù)室放大圖16小格 25大格計(jì)數(shù)室 25小格 16大格計(jì)數(shù)室 計(jì)數(shù)室的兩種刻度形式一.酵母菌數(shù)量的檢測（顯微鏡直接計(jì)數(shù)法）l 注意事項(xiàng):A. 取樣時(shí)先要搖勻菌液;加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。B. 調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。 1. 取清潔無油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻

3、片。取清潔無油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻片。 2. 取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。 3. 靜止靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。后，用低倍鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。 4. 在高倍鏡下計(jì)數(shù)：隨機(jī)計(jì)數(shù)五個(gè)中格的平均值，然后求得每在高倍鏡下計(jì)數(shù)：隨機(jī)計(jì)數(shù)五個(gè)中格的平均值，然后求得每個(gè)中格的平均值。乘上個(gè)中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出一大格中的總菌數(shù)，）就得出一大格中的總菌數(shù)，最后再換算到每最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。菌液中

4、的含菌數(shù)。 5. 計(jì)算方法：計(jì)算方法： 6. 注意事項(xiàng)：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上注意事項(xiàng)：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計(jì)入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時(shí)，若芽體和母體同的菌體計(jì)入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時(shí)，若芽體和母體同等大，就按單個(gè)酵母計(jì)數(shù)。等大，就按單個(gè)酵母計(jì)數(shù)。 7. 計(jì)數(shù)完畢后，血球計(jì)數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸計(jì)數(shù)完畢后，血球計(jì)數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。 （X1+X2+X3+X4+X5）5X 25（或或16）X 10 X 1000 x 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 酵母菌細(xì)胞數(shù)酵母菌細(xì)胞

5、數(shù)/mL=1 1、結(jié)果記錄：、結(jié)果記錄： 將計(jì)數(shù)結(jié)果記錄下表。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)。B稀釋倍數(shù)為102。注注:1 mL菌液總數(shù)菌液總數(shù)=A/525104B=5107A細(xì)菌大小的測定細(xì)菌大小的測定 l學(xué)習(xí)測微尺的使用和計(jì)算方法l利用測微尺測量微生物的大小 微生物個(gè)體生長的時(shí)間較短，很快進(jìn)入分裂繁殖階段，個(gè)體生長難以測定。它們的生長一般以繁殖即群體生長作為微生物生長的指標(biāo)。群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法、光電比濁法等。 微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測量

6、工具即測微尺，包括目鏡測微尺和鏡臺(tái)測微尺。1. 酵母菌液酵母菌液2. 顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺(tái)測微尺顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺(tái)測微尺3. 載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、膠頭吸管等載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、膠頭吸管等注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：觀察時(shí)光線不宜過強(qiáng),否則難以找到鏡臺(tái)測微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時(shí),務(wù)必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺(tái)測微尺和損壞鏡頭。1.測微尺的校正（標(biāo)定）：測微尺的校正（標(biāo)定）： 兩重合線間鏡臺(tái)測微尺格數(shù)10目鏡測微尺每格長度(m)= 兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2酵母菌大小的測定：酵母菌大小的測定： 利用制好的血球器浸片，用高倍鏡測出寬和長各占目鏡測微尺的格數(shù)，再將測到的格數(shù)乘以目鏡測微尺（用高倍鏡時(shí)標(biāo)定的）每格所代表的長度，即為酵母菌的實(shí)際大小。（1）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表: 接目鏡放大倍數(shù)：接目鏡放大倍數(shù)：-10-(2)(2)將酵母菌大小測定結(jié)果填入下表：將酵母菌大小測定結(jié)果填入下表：2.2.思考題