1、青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物基因工程課程論文題 目： 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物繁育上的研究 姓 名： 丁肖 學(xué) 院： 動(dòng)物科技學(xué)院 專 業(yè)： 動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè) 班 級(jí)： 2011-04 學(xué) 號(hào)： 20110584 任課教師： 閔令江 二一三年四月十日轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物繁育上的研究動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè) 丁肖任課教師：閔令江 指導(dǎo)教師：閔令江摘要：轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是現(xiàn)代生物技術(shù)中一個(gè)極其重要的研究領(lǐng)域，目前已經(jīng)有轉(zhuǎn)基因小鼠、兔、綿羊、山羊、豬、牛、雞和魚等多種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物問世。本文綜述了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制作方法、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用研究以及所取得的重要成就，轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究展望。 以豬為例：豬既是重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,又是常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。從其自然特性來

2、看,豬在解剖、組織、生理和營(yíng)養(yǎng)代謝等方面與人類最接近。因此,豬成了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的熱點(diǎn)。研究初期,人們主要致力于培育出生長(zhǎng)速度快的豬群,目前,人們主要嘗試用轉(zhuǎn)基因豬生產(chǎn)不易獲得或用重組菌發(fā)酵無天然功能蛋白和用于異種器官移植的器官。轉(zhuǎn)基因豬的研究與培育,不僅可以促進(jìn)其自身基因表達(dá)和調(diào)控的研究,而且能為大家畜的轉(zhuǎn)基因研究提供重要的技術(shù)依據(jù)。1豬的轉(zhuǎn)基因技術(shù)從1985年Hammer等1 得到第1批轉(zhuǎn)基因豬到現(xiàn)在,有關(guān)轉(zhuǎn)基因豬的研究已有10幾年的歷史,轉(zhuǎn)基因方法主要有以下6種,但比較成熟和公認(rèn)的方法仍然是受精卵原核的顯微注射法。 我們希望通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用使得動(dòng)物在遺傳育種上能夠有很大的進(jìn)步。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)

3、基因技術(shù)；顯微注射；基因打靶；乳腺生物發(fā)生器Abstract: Mastitis is a disease of the mammary gland caused by pathogens that find their way into the lumen of the gland through the teat canal. Mammary gland infections cost the US dairy industry approximately $2 billion dollars annually and have a similar impact in Europe. In

4、 the absence of effective treatments or breeding strategies to enhance mastitis resistance, we have created transgenic dairy cows that express lysostaphin in their mammary epithelium and secrete the antimicrobial peptide into milk. Staphylococcus aureus, a major mastitis pathogen, is exquisitely sen

5、sitive to lysostaphin. The transgenic cattle resist S. aureus mammary gland challenges, and their milk kills the bacteria, in a dose dependent manner. This first step in protecting cattle against mastitis will be followed by introduction of other genes to deal with potential resistance issues and ot

6、her mastitis causing organisms. Care will be taken to avoid altering milk's nutritional and manufacturing properties. Multi-cistronic constructs may be required to achieve our goals as will other strategies possibly involving RNAi and gene targeting technology. This work demonstrates the possibi

7、lity of using transgenic technology to address disease problems in agriculturally important species. Keywords: transgenic technology; microinjection; gene targeting; mammary bioreactor在動(dòng)物遺傳育種中，傳統(tǒng)的動(dòng)物品種改良方法是通過純系繁育和配套雜交，該方法帶來了明顯的經(jīng)濟(jì)效益，有力地促進(jìn)了動(dòng)物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，提高了人們的生活水平。但品種改良周期比較長(zhǎng)，也會(huì)產(chǎn)生負(fù)面的影響。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是在上世紀(jì)80年代初發(fā)展起來的一項(xiàng)生

8、物技術(shù)。如今，轉(zhuǎn)基因技術(shù)正在對(duì)動(dòng)物育種產(chǎn)生一場(chǎng)新的革命。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是將外源基因通過載體導(dǎo)入受體生物體內(nèi)，讓其獲得新特性的一門復(fù)雜技術(shù)。由于這一技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)基因的種間轉(zhuǎn)移，用于動(dòng)物育種將大大提高育種的目的性，加快育種進(jìn)程。自Palmiter等1982年將大白鼠生長(zhǎng)激素基因顯微注射到小白鼠受精卵，獲得比正常小鼠大一倍的“超級(jí)巨鼠”以來，世界各國(guó)科學(xué)家競(jìng)相開展轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究，并通過多種轉(zhuǎn)基因方法在豬、牛、雞、兔、羊等動(dòng)物上獲得成功。轉(zhuǎn)基因技術(shù)在定向改造生物體中有著無法可比的優(yōu)越性。 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物品種改良的過程中，有著確定的目標(biāo)、周密的設(shè)計(jì)、精確的操作，是目前最先進(jìn)的技術(shù)。1 動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)所謂轉(zhuǎn)

9、基因就是將目的基因?qū)氲绞荏w細(xì)胞的過程。1997年，克隆羊Dolly的誕生，開創(chuàng)了哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的先河，隨后，乳腺中表達(dá)人凝血因子IX的轉(zhuǎn)基因克隆羊Polly培育成功。2005年，抗乳房炎轉(zhuǎn)基因牛的誕生，2006年，多不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育成功，標(biāo)志著轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種進(jìn)入了新的發(fā)展歷程。隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)將會(huì)不斷得到改善，從而在未來的動(dòng)物育種中發(fā)揮巨大的作用。目前轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種技術(shù)主要有一下幾種方法。1.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入法逆轉(zhuǎn)錄病毒法是最早用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，由于轉(zhuǎn)染過程中不能準(zhǔn)確控制整合時(shí)間，得到的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物大都是嵌合體，所以沒有得到更深入

10、的發(fā)展。1974年，Jaenisch和Mintz將SV40 DNA注入小鼠囊胚腔中，發(fā)現(xiàn)獲得的小鼠肝、腎組織中有SV40 DNA整合。此后，Jaenisch等成功地用逆轉(zhuǎn)錄病毒法獲得了轉(zhuǎn)基因小鼠。隨后，轉(zhuǎn)基因雞和牛也相繼產(chǎn)生。1.2 顯微注射法顯微注射法 (Microinjection) 是指通過顯微操作儀把外源基因注入受體動(dòng)物的受精卵，外源基因整合到受體細(xì)胞染色體組上，發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的技術(shù)。這是發(fā)展最早、目前使用最為廣泛，也是最有效的方法，已經(jīng)生產(chǎn)出了轉(zhuǎn)基因小鼠及兔、綿羊、豬、牛、魚和雞等各種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。顯微注射法的優(yōu)點(diǎn)是外源基因的轉(zhuǎn)移率和整合效率都較高，小鼠為6%40%，豬和羊分別為0.

11、98%和0.1%，魚類可達(dá)10%75%，外源基因的長(zhǎng)度不受限制，可向動(dòng)物原核胚導(dǎo)入250kb左右的DNA片斷。但該方法操作技術(shù)復(fù)雜，設(shè)備昂貴，導(dǎo)入外源基因的拷貝數(shù)無法控制，外源基因隨機(jī)整合到基因組內(nèi)，常導(dǎo)致宿主DNA染色體序列丟失或重排，造成嚴(yán)重的生理缺陷。1.3 精子載體法精子載體法是用精子作為基因轉(zhuǎn)移的載體 (Vector) 生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。大多數(shù)物種的精子都有一定的攝取外源DNA的能力，可以通過受精過程把外源基因?qū)氲绞芫阎?。精子介?dǎo)載體法獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的效率能達(dá)到30%左右。1989年，意大利的Lavitrano等通過精子介導(dǎo)成功獲得轉(zhuǎn)氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因 (CAT)的轉(zhuǎn)基因小鼠。1

12、.4 轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)體細(xì)胞克隆是將分化的體細(xì)胞核導(dǎo)入去核的卵母細(xì)胞中，并重新發(fā)育成個(gè)體的過程。體細(xì)胞核移植技術(shù)的建立，宣告了動(dòng)物分化的體細(xì)胞可以被逆轉(zhuǎn)為全能型的胚胎，并發(fā)育成完整的動(dòng)物個(gè)體。轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)是以體細(xì)胞核移植技術(shù)及細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)為基礎(chǔ)，將外源基因?qū)氲襟w細(xì)胞核內(nèi)，再以此轉(zhuǎn)基因細(xì)胞為核供體進(jìn)行動(dòng)物克隆的方法。體細(xì)胞核移植技術(shù)使得大批量的生產(chǎn)相同遺傳背景的動(dòng)物成為可能，在很大程度上提高了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的效率和穩(wěn)定性，為培育大規(guī)模的有育種價(jià)值的群體提供了技術(shù)條件。1.5 基因打靶技術(shù)基因打靶技術(shù)包括去除致病或不利基因座位的基因敲除技術(shù)，以及將目的基因定點(diǎn)整合到基因組特定位點(diǎn)的基因敲入技術(shù)。

13、2000年，Mcgreath等首次應(yīng)用基因打靶技術(shù)，用人的基因替換了羊的基因，生產(chǎn)了轉(zhuǎn)基因克隆羊，證實(shí)了基因打靶技術(shù)可用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因家畜。2002年及2003年，Lai等和Sendai等利用基因敲除的方法分別獲得了-1，3-半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶基因滅活的轉(zhuǎn)基因豬和轉(zhuǎn)基因牛。1.6 慢病毒載體法慢病毒載體技術(shù)是一種高效的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備技術(shù)，其轉(zhuǎn)染效率可達(dá)60%以上。2003年，Clark等利用慢病毒載體制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的效率可達(dá)80%100%，生產(chǎn)1只轉(zhuǎn)基因綿羊只需5只受體母羊，而傳統(tǒng)的纖維注射法則需70只受體母羊。目前的轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)也主要采用慢病毒載體技術(shù)。1.7 胚胎干細(xì)胞法胚胎干細(xì)胞（ES cel

14、l）是高度未分化的全能干細(xì)胞，通過人工培養(yǎng)和定向誘導(dǎo)，可分化為多種組織細(xì)胞。將外源基因?qū)隕S細(xì)胞后進(jìn)行必要的篩選，篩選出的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到原腸時(shí)期的胚胎中便會(huì)得到帶有目的基因的嵌合體動(dòng)物，再通過雜交的方法得到一個(gè)品系。目前這種方法僅用于轉(zhuǎn)基因小鼠的基礎(chǔ)研究。2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物育種上的研究自Palmiter等1982年將大白鼠生長(zhǎng)激素基因顯微注射到小白鼠受精卵，獲得比正常小鼠大一倍的“超級(jí)巨鼠”以來。這一實(shí)驗(yàn)的成功揭開了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究的序幕，此后轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究發(fā)展迅速，短短二十幾年間，人們相繼獲得了轉(zhuǎn)基因兔、豬、羊、牛、魚和雞，并成功培育出了一些肉質(zhì)優(yōu)良、快速生長(zhǎng)、具有抗病性以及生產(chǎn)生物材料的轉(zhuǎn)基

15、因家畜。轉(zhuǎn)基因育種，即通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源基因?qū)雱?dòng)物受精卵內(nèi)組成一個(gè)新的融合基因，使其在動(dòng)物體內(nèi)整合與表達(dá)，產(chǎn)生具有新遺傳特性的動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因技術(shù)育種可以避開物種間雜交不育的生殖隔離，在較短時(shí)期內(nèi)培育出常規(guī)方法不能育成或難以育成的動(dòng)物品種，從而加快動(dòng)物改良進(jìn)程，使選擇效率提高，改良機(jī)會(huì)增多，因而極具研究?jī)r(jià)值。2.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在豬遺傳育種上的研究與應(yīng)用1985年，Hammer R. E.等人首次利用顯微注射法得到了1頭轉(zhuǎn)基因豬。與同窩非轉(zhuǎn)基因豬相比，生長(zhǎng)速度、飼料利用率均有提高，胴體脂肪率降低。1989年，Pursel等，把牛的生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)入豬體內(nèi)，獲得2個(gè)豬的家系，其生長(zhǎng)速度提高1114，

16、飼料轉(zhuǎn)化率提高1618；使用類胰島素生長(zhǎng)因子-I (IGF-1) 構(gòu)建轉(zhuǎn)基因豬也可以加快豬的生長(zhǎng)速度，Pursel等又把IGF-I基因轉(zhuǎn)入豬中，首次獲得表達(dá)IGF-I的轉(zhuǎn)基因豬。當(dāng)年，我國(guó)研究人員將豬GH基因轉(zhuǎn)入湖北白豬受精卵中獲得首批轉(zhuǎn)基因豬。經(jīng)過幾個(gè)世代的觀察，其生長(zhǎng)速度與飼料利用率分別比同窩提高13%和10。1990年，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)培育的轉(zhuǎn)基因豬，生長(zhǎng)速度顯著提高，超過對(duì)照組40。1991年，Wall等將小鼠編碼乳清酸蛋白 (WAP) 的基因轉(zhuǎn)移給豬，獲得了3頭轉(zhuǎn)基因豬，對(duì)這3頭轉(zhuǎn)基因豬的整個(gè)泌乳期的乳汁進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)小鼠的WAP在奶中的濃度為l g/l。相應(yīng)的mRNA只存在于乳腺中在轉(zhuǎn)

17、基因豬的乳中。WAP占總?cè)榱康?%。1993年，Suetlali等將含有編碼小鼠粘病毒抗性蛋白 (Mxl蛋白) 的cDNA的3種基因構(gòu)件分別整合到豬染色體中，獲得抗流感病毒的轉(zhuǎn)基因豬，但基因轉(zhuǎn)移效率很低。1995年，湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)院與中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所合作，得到了抗豬瘟病毒的轉(zhuǎn)基因豬。1998年，Vin將豬生長(zhǎng)激素因子與MT啟動(dòng)子融合基因注入豬受精卵內(nèi)，獲得1頭可表達(dá)豬生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因豬。1998年，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)培育的轉(zhuǎn)基因群脂肪減少10，瘦肉率增加68。2004年，日本科學(xué)家Saeki將菠菜-12去飽和酶 (fad-2) 基因轉(zhuǎn)入豬體內(nèi)并在脂肪組織特異表達(dá)，培育出6頭轉(zhuǎn)基因豬，豬體內(nèi)

18、-6型不飽和脂肪酸的含量明顯提高，且不飽和脂肪酸含量高于普通豬20。2006年4月，美國(guó)密蘇里-哥倫比亞大學(xué)的Lai等獲得了l0頭轉(zhuǎn)有線蟲的fat-1基因 (-3去飽和酶基因) 的體細(xì)胞克隆豬，F(xiàn)AT-1蛋白可將豬體內(nèi)的-6型多不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為-3型，轉(zhuǎn)基因克隆豬體內(nèi)-6/-3的比值達(dá)到12，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于正常豬的8左右，大大提高了豬肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。多不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育成功，標(biāo)志著轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種進(jìn)入了新的發(fā)展歷程。2006年4月，韓國(guó)ParkJK等通過精子微注射豬受精卵獲得了整合人重組促紅細(xì)胞生成素的轉(zhuǎn)基因豬，對(duì)Fl代以及F2代泌乳母豬的乳樣分析表明，其氨基酸組成與商業(yè)化的重組hEPO完

19、全相同。2006年12月22日，我國(guó)首例成體體細(xì)胞“克隆”東北民豬的東北農(nóng)業(yè)大學(xué)教授劉忠華帶領(lǐng)的課題組，又成功培育出國(guó)內(nèi)首例綠色熒光蛋白“轉(zhuǎn)基因”克隆豬，這是世界上繼美國(guó)、韓國(guó)、日本之后第四例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因豬。綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因豬的出生，標(biāo)志著我國(guó)在轉(zhuǎn)基因克隆豬技術(shù)研究領(lǐng)域步入世界先進(jìn)水平行列。這項(xiàng)技術(shù)為家豬的目標(biāo)育種、人類疾病醫(yī)療模型豬的建立以及生產(chǎn)為人類器官移植提供器官的特殊家豬提供了可靠技術(shù)平臺(tái)，從而為畜牧業(yè)發(fā)展和醫(yī)學(xué)研究開辟了新的天地。2008年8月，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所和軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所合作同樣獲得了轉(zhuǎn)有-3脂肪酸去飽和酶基因的轉(zhuǎn)基因克隆豬。2008年9月

20、，吉林大學(xué)農(nóng)學(xué)部畜牧獸醫(yī)學(xué)院和軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院第十一所合作，得到了帶有抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬的克隆后代，經(jīng)檢測(cè)3只克隆豬均帶有抗豬瘟病毒基因。2009年，生產(chǎn)高比例的抗原特異性人源抗體的轉(zhuǎn)染色體牛的出生，是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥用蛋白的又一個(gè)里程碑。2.2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在牛遺傳育種上的研究與應(yīng)用美國(guó)Genzyme Transgene公司用酪蛋白啟動(dòng)子與人乳鐵蛋白 (hLF) 的cDNA構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因載體，通過顯微注射法獲得世界上第1頭名為“Herman”的轉(zhuǎn)基因公牛，該公牛與非轉(zhuǎn)基因母牛生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因后代，1/4后代母牛乳汁中表達(dá)了人乳鐵蛋白 (McEcog等，1990)。Krimpenfort等 (2001)

21、利用顯微注射技術(shù)向牛體外受精早期胚胎注射外源基因，通過非外科手術(shù)法進(jìn)行胚胎移植，在所生的19頭牛中，經(jīng)Southern-blot檢測(cè)有2頭為轉(zhuǎn)基因牛。荷蘭的GenPharm公司用相同的方法也培育出含人乳鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因牛，牛奶中人乳鐵蛋白含量為1000g/ml (Valander等，1992)。Berkel等 (2002) 利用牛的-s1-酪蛋白啟動(dòng)子與人乳鐵蛋白基因組的6.2 kb片段構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體，通過顯微注射獲得轉(zhuǎn)基因牛，ELISA結(jié)果分析表明，轉(zhuǎn)基因牛奶中人乳鐵蛋白的含量為3002800g/ml。在國(guó)內(nèi)，上海醫(yī)學(xué)遺傳研究所黃淑幀等 (2000) 利用向體外受精的早期胚胎中注射外源基因的方

22、法成功培育出了我國(guó)第1頭轉(zhuǎn)有人血清白蛋白 (hALB) 基因的轉(zhuǎn)基因牛，該成果被評(píng)為1999年中國(guó)十大科技進(jìn)展。2.3轉(zhuǎn)基因技術(shù)在羊遺傳育種上的研究與應(yīng)用Nancarrow 等 (1991) 把來自于優(yōu)質(zhì)羊毛的一種A2蛋白的主要成分 (半胱氨酸) 基因?qū)刖d羊原核期胚胎，獲得的轉(zhuǎn)基因羊的產(chǎn)毛率明顯提高。Powell 等 (1994) 將毛角蛋白型中間細(xì)絲基因?qū)刖d羊基因組，獲得的轉(zhuǎn)基因羊毛光澤亮麗，羊毛中羊毛脂的含量得到明顯提高。Damak等 (1996) 將小鼠超高硫角蛋白啟動(dòng)子與綿羊的IGF-I cDNA融合基因顯微注入綿羊原核期胚胎，得到轉(zhuǎn)基因羊凈毛平均產(chǎn)量比非轉(zhuǎn)基因羊提高了6.2%。B

23、awden 等 (1998) 將毛角蛋白型中間細(xì)絲基因?qū)刖d羊基因組并使其在皮質(zhì)中特異表達(dá)，結(jié)果轉(zhuǎn)基因羊毛光澤亮麗，羊毛中羊毛脂的含量得到明顯的提高。Adams 等 (2005) 通過對(duì)成年的轉(zhuǎn)綿羊生長(zhǎng)激素基因的轉(zhuǎn)基因綿羊性能進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)速度和羊毛產(chǎn)量都比對(duì)照組顯著提高。目前，新西蘭、澳大利亞、英國(guó)等主要產(chǎn)羊毛國(guó)家正致力于開發(fā)一種可以生產(chǎn)彩色羊毛的高產(chǎn)轉(zhuǎn)基因羊。Clement 等 (1994) 將Visna病毒的衣殼蛋白基因轉(zhuǎn)入綿羊，獲得了抗病能力明顯提高的轉(zhuǎn)基因羊。朊病毒 (PrP) 是一種對(duì)羊極為致命的病毒粒子，能引起羊的搔癢癥 (scrapie) 等致命性中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能退化癥 (

24、Hill 等，1997)。這些疾病已使眾多歐洲國(guó)家遭受了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。PrP為單拷貝基因，從人們從對(duì)PrP敲除小鼠的實(shí)驗(yàn)來看，它們都不受朊病毒疾病的感染，且沒有發(fā)現(xiàn)其它副作用(Bueler 等，1992)。因此如果將羊的PrP基因敲除掉，產(chǎn)生抗PrP種群，這對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康都有著積極的作用。Denning 等 (2001) 從綿羊體細(xì)胞剔除PrP基因后，經(jīng)核移植生產(chǎn)出4只敲除掉PrP基因的羊羔，其中一只存活了12 d。Yu等 (2006) 報(bào)道利用基因打靶技術(shù)獲得敲除了一個(gè)PrP基因位點(diǎn)的體細(xì)胞克隆山羊，經(jīng)過3個(gè)月觀察這些基因敲除羊沒有異常表現(xiàn)，該中心正在進(jìn)行PrP基因位點(diǎn)雙敲除研究。

25、3 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物育種中的應(yīng)用3.1 促進(jìn)動(dòng)物生產(chǎn)，改善畜產(chǎn)品質(zhì)量常規(guī)育種改良畜禽品種進(jìn)展較慢，而且有些種畜的生產(chǎn)性能已達(dá)到相當(dāng)高的水平，很難獲得較大的進(jìn)展，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將所需的優(yōu)良基因直接轉(zhuǎn)入待改良群體中，從而培育出具有優(yōu)良品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因品系。生長(zhǎng)激素（GH）基因是轉(zhuǎn)基因研究中運(yùn)用最早的基因， Hammer于1985年， Rexroad于1989年及Pursel于1993年分別獲得轉(zhuǎn)人的生長(zhǎng)激素釋放因子 (hGRF) 的轉(zhuǎn)基因小鼠、轉(zhuǎn)基因母豬和轉(zhuǎn)基因綿羊。提高了豬的生長(zhǎng)速度和飼料利用效率，胴體脂肪率也明顯下降。1994年，德國(guó)成功培育出轉(zhuǎn)入生長(zhǎng)素的轉(zhuǎn)基因豬，使世界上出現(xiàn)了壯如小牛的“超級(jí)

26、豬”。3.2 提高抗病能力和適應(yīng)性畜禽傳染病一直是嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)的毒瘤，不僅直接影響到畜禽產(chǎn)品生產(chǎn)，同時(shí)也降低了產(chǎn)業(yè)投入的積極性，轉(zhuǎn)基因家畜在抗病育種方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)。將抗病性基因?qū)胧芫?，發(fā)育成的個(gè)體就可能表現(xiàn)抗病性。在對(duì)各種動(dòng)物的抗病基因轉(zhuǎn)移研究中，對(duì)雞的抗病效果研究最為顯著。美國(guó)和日本已用反轉(zhuǎn)錄病毒載體法和顯微注射法產(chǎn)生了抗馬立克和新城疫的新品種雞。美國(guó)農(nóng)業(yè)部以禽白血病病毒 (ALV) 為載體，獲得了抗ALV的新品系雞。我國(guó)殷震等將豬瘟病毒抗性基因?qū)胴i體內(nèi)獲得了抗豬瘟豬個(gè)體；扈榮良 (1994，1995) 將狂犬病毒糖蛋白的基因?qū)胄∈?，已獲得免疫耐受的轉(zhuǎn)基因小鼠，為培養(yǎng)抗狂犬病毒

27、的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物打下了基礎(chǔ)。3.3 提高動(dòng)物的繁育速度 利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體改進(jìn)常規(guī)育種，在轉(zhuǎn)基因兔研究中以轉(zhuǎn)入GH基因和hGRF基因?yàn)槎嘁?。在提高生產(chǎn)速度和體型方面，Hammer等 (1985) 率先報(bào)道了將含有mMT啟動(dòng)因子和人GH基因的融合基因?qū)爰彝檬芫言囼?yàn)，但其轉(zhuǎn)基因子代并沒有表現(xiàn)明顯的促生長(zhǎng)效應(yīng)。而部分實(shí)驗(yàn)表明，外源GH基因可促進(jìn)轉(zhuǎn)基因兔生長(zhǎng)，如和協(xié)超等 (1995) 獲得的轉(zhuǎn)oGH基因兔體重比對(duì)照兔高出1.7倍。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究和應(yīng)用將是21世紀(jì)生物工程技術(shù)領(lǐng)域最活躍、最具有應(yīng)用價(jià)值的項(xiàng)目之一。它將給人類的醫(yī)藥衛(wèi)生、生物材料、家畜改良等領(lǐng)域帶來革命性的變化，尤其是在乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥

28、物方面，它帶來的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益更是難以估量的。在未來的研究中，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其產(chǎn)品必將進(jìn)入全面產(chǎn)業(yè)化和市場(chǎng)化階段，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器產(chǎn)業(yè)將成為最具高額利潤(rùn)的新型行業(yè)。在改良家畜方面，轉(zhuǎn)基因技術(shù)在新的世紀(jì)也將成為培育動(dòng)物新品種的革命性途徑之一。致謝： 天下沒有不散的宴席，轉(zhuǎn)眼間一個(gè)學(xué)期已經(jīng)接近了尾聲。當(dāng)然動(dòng)物基因工程這門課也結(jié)束了，這半年來，沒有傷感，更多的則是遺憾。人生不如意事十有八九，過去的事不能挽回，我們能做的就是帶著百倍的信心去迎接明天。所以這段文字既是感激過去又是憧憬未來。 這篇論文所涉及到的知識(shí)點(diǎn)大部分都是老師上課講過的，當(dāng)熱也有一部分是自己在網(wǎng)上以及圖書館查閱的，我希望通過

29、我自己的積累以及努力寫出自己滿意的東西。論文寫起來并不如想象中的容易，為此，我也曾迷茫，失望，甚至想過放棄，但后來想想，做什么事都不是那么輕易就成功的，于是，我便堅(jiān)持把它寫完了。 論文得以完成，與許多人的指導(dǎo)是分不開的，當(dāng)然，首先感激的還是任課老師閔老師。感謝老師的諄諄教導(dǎo)，細(xì)心講解。同樣也喜歡閔老師的上課方式，讓我們不僅學(xué)到了知識(shí)，更是知道了許多與專業(yè)相關(guān)的常識(shí)，這為我們以后的學(xué)習(xí)生活奠定了很好的基礎(chǔ)。感激的同時(shí)，我又深感抱歉，因?yàn)榧幢闶抢蠋熌敲瓷羁痰闹v解，我還是有些地方不太明白。在此，請(qǐng)老師見諒，也請(qǐng)老師放心，我會(huì)加倍努力，不辜負(fù)您的深切期望。 千言萬語(yǔ)道不盡心中的感激，在此希望那些幫助過

30、我的人萬事如意！參考文獻(xiàn)：1黃淑幀，陳美玨，黃 英，等. 乳汁中分泌有活性的人凝血因子IX的轉(zhuǎn)基因羊的研制J. 科學(xué)通報(bào)，1998，48: 783-7842趙淑娟，龐有志，任洪濤，等. 轉(zhuǎn)基因技術(shù)與豬的育種研究. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2004，(4): 65663龐有志，趙淑娟. 轉(zhuǎn)基因技術(shù)與雞的抗病育種J. 中國(guó)獸醫(yī)科技，1999, 3: 43-444盧一凡，鄧?yán)^先，肖成祖，等. 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物理論與技術(shù)的研究進(jìn)展J. 生物技術(shù)通報(bào)，1997，4: 175黃俊成轉(zhuǎn)基因豬的研究進(jìn)展生物技術(shù)通訊，1997(6)：586李寧，劉巖，童佳，張然，等. 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種研究的現(xiàn)狀與趨勢(shì). 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)，20

31、09,4(5): 329334英文參考文獻(xiàn)：1Wilmut I, Schnieke AE, McWhir J, et al. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells. Nature, 1997, 385(6619): 810-8132Schnieke AE, Kind AJ, Ritchie WA, et al. Human factor IX transgenic sheep produced by transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts.

32、Science, 1997, 278(5346): 2130-21333Donovan DM, Kerr DE, Wall RJ. Engineering disease resistant cattle. Transgenic Res, 2005, 14(5): 563-5674Lai L, Kang JX, Li R, et al. Generation of cloned transgenic pigs rich in omega-3 fatty acids. Nat Biotechnol, 2006, 24(4): 435-4365Kupriyanov S, Zeh K, Baribault H. Double pronuclei injection of