1、實驗四實驗四 細(xì)菌芽孢染色法細(xì)菌芽孢染色法目的要求目的要求 芽孢染色法是利用細(xì)菌的芽孢和菌體對染料的親和力不同的原理，用不同染料進(jìn)行著色，使芽孢和菌體呈不同顏色而便于區(qū)別。芽胞壁厚、透性低，著色、脫色均較困難，因此，當(dāng)先用一弱堿性染料，如孔雀綠或堿性品紅在加熱條件下進(jìn)行染色時，此染料不僅可以進(jìn)入菌體，而且也可以進(jìn)入芽孢，進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染料則難以透出，若再用復(fù)染液（如番紅）或襯托溶液（如黑色素溶液）處理，則菌體和芽孢易于區(qū)分。學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法，了解芽孢的形狀和著生位置等特點基本原理基本原理器材器材1.菌種：蘇云金芽孢桿菌2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基3.器具：顯微鏡

2、、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、洗瓶、擦鏡紙、無菌水；孔雀綠染液、番紅水染液、苯酚品紅、黑色素溶液等。操作步驟操作步驟1.將培養(yǎng)24左右的蘇云金芽孢桿菌，作涂片、干燥、固定。2.滴加3-5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。3.用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸干，必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4-5分鐘。也可以不加熱，改用飽和的孔雀綠溶液染10分鐘。4.傾去染液，待載玻片冷卻后水洗至不再褪色為止。5.用番紅水溶液復(fù)染1分鐘，水洗。6.待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。實驗五實驗五 酵母菌的形態(tài)觀察及死、活細(xì)胞酵母菌的形態(tài)觀察及死、活細(xì)胞的

3、鑒別的鑒別目的要求目的要求1.觀察酵母菌的細(xì)胞形態(tài)及出芽生殖方式。2.學(xué)習(xí)掌握區(qū)分酵母菌死、活細(xì)胞的染色方法?；驹砘驹?酵母菌是多形的、不運動的單細(xì)胞微生物，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)已有明顯的分化，菌體比細(xì)菌大。繁殖方式也較復(fù)雜，無性繁殖主要是出芽生殖，僅裂殖酵母屬是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊孢子。 本實驗通過用美藍(lán)染色制成水浸片，和水-碘水浸片來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而還原型是無色的，用它來對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色，由于細(xì)胞中新陳代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，所以酵母的活細(xì)胞無

4、色，而對于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。但美藍(lán)的濃度、作用的時間等均有影響，應(yīng)加注意。器材器材1.菌種：啤酒酵母，假絲酵母菌；2.培養(yǎng)基：酵母膏培養(yǎng)基；3.器具：顯微鏡，酒精燈，載玻片，蓋玻片，接種環(huán)，洗瓶，擦鏡紙，無菌水；0.1%呂氏堿性美藍(lán)染液，碘液。操作步驟操作步驟1.美藍(lán)浸片觀察美藍(lán)浸片觀察 在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍(lán)染液，液滴不可過多或過少，以免蓋上蓋玻片時，溢出或留有氣泡。然后按無菌操作法取在斜面上培養(yǎng)48小時的酵母菌少許，放在呂氏堿性美藍(lán)染液中，使菌體與染液均勻混合。 用鑷子夾蓋玻片一塊，小心的蓋在液滴上。蓋片時應(yīng)注意，不能將蓋玻片平放下去，應(yīng)先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后將整個蓋玻片慢慢放下，這樣可以避免產(chǎn)生氣泡。 將制好的水浸片放置3分鐘后鏡檢。先用低倍鏡觀察，然后換用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽情況，同時可以根據(jù)是否染上顏色來區(qū)別死、活細(xì)胞。 染色半小時后，再觀察一下死細(xì)胞數(shù)是否增加。 用0.05%呂氏堿性美藍(lán)染液重復(fù)上述的操作。 在載玻片中央滴