1、-廣石化分子生物學試題及答案一、名詞解釋1cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2標準折疊單位：蛋白質(zhì)二級構(gòu)造單元螺旋與折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的構(gòu)造塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級構(gòu)造。幾乎所有的三級構(gòu)造都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標準折疊單位。3CAP：環(huán)腺苷酸cAMP受體蛋白CRPcAMP receptor protein ，cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAPcAMP activated protein 4回文序列：DNA片

2、段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。5micRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補，可抑制mRNA的翻譯。6核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。7模體：蛋白質(zhì)分子空間構(gòu)造中存在著*些立體形狀和拓撲構(gòu)造頗為類似的局部區(qū)域8信號肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有1536個氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。9弱化子：在操縱區(qū)與構(gòu)造基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。10魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產(chǎn)生一個應(yīng)急反響，停頓全部基因的表達。產(chǎn)生這一應(yīng)急反響的信號是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸pppG

3、pp。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調(diào)控子或稱為魔斑。11上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA、-35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。12DNA探針：是帶有標記的一段序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。13SD序列：是核糖體與mRNA結(jié)合序列，對翻譯起到調(diào)控作用。14單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。15考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保存噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16藍-白斑篩選：含LacZ基因編碼半乳糖苷酶該酶能分解生色底物*-

4、gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍-白斑篩選。17順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調(diào)控作用的基因元件。18Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了53外切酶活性19錨定PCR：用于擴增一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和的序列作為引物進展PCR擴增。20融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時表達翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。二、填 空1 DNA

5、的物理圖譜是DNA分子的限制性切酶酶解 片段的排列順序。2 RNA酶的剪切分為自體催化 、異體催化 兩種類型。3原核生物中有三種起始因子分別是IF-1、 IF-2 和IF-3 。4蛋白質(zhì)的跨膜需要 信號肽 的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)。5啟動子中的元件通常可以分為兩種：核心啟動子元件 和上游啟動子元件 。6分子生物學的研究容主要包含構(gòu)造分子生物學 、基因表達與調(diào)控 、 DNA重組技術(shù) 三局部。7證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個關(guān)鍵性實驗是肺炎球菌感染小鼠 、 T2噬菌體感染大腸桿菌 這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：生物體吸收的外源DNA改變了其遺傳潛能 。8hnRNA與mRN

6、A之間的差異主要有兩點： hnRNA在轉(zhuǎn)變?yōu)閙RNA的過程中經(jīng)過剪接，、 mRNA的5末端被加上一個m7pGppp帽子，在mRNA3末端多了一個多聚腺苷酸(polyA)尾巴。9蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點是亞基對DNA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法 、可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影響、活性能夠非常有效和迅速地被翻開和被關(guān)閉 。10蛋白質(zhì)折疊機制首先成核理論的主要容包括成核 、構(gòu)造充實、最后重排。 11半乳糖對細菌有雙重作用；一方面可以作為碳源供細胞生長 ；另一方面它又是細胞壁的成分 。所以需要一個不依賴于cAMPCRP的啟動子S2進展本底水平的永久型合成；同時需要一個依賴于cAMPC

7、RP的啟動子S1對高水平合成進展調(diào)節(jié)。有G時轉(zhuǎn)錄從 S2 開場，無G時轉(zhuǎn)錄從 S1 開場。12DNA重組技術(shù)也稱為基因克隆或分子克隆 。最終目的是把一個生物體中的遺傳信息DNA轉(zhuǎn)入另一個生物體。典型的DNA重組實驗通常包含以下幾個步驟：提取供體生物的目的基因或稱外源基因，酶接連接到另一DNA分子上克隆載體，形成一個新的重組DNA分子。將這個重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞并在受體細胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。對那些吸收了重組DNA的受體細胞進展篩選和鑒定。對含有重組DNA的細胞進展大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。13、質(zhì)粒的復(fù)制類型有兩種：受到宿主細胞蛋白質(zhì)合成的嚴格控制的稱為嚴緊型質(zhì)粒 ，不受

8、宿主細胞蛋白質(zhì)合成的嚴格控制稱為 松弛型質(zhì)粒 。14PCR的反響體系要具有以下條件：a、被別離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的 DNA引物約20個堿基左右。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。c、dNTPd、作為模板的目的DNA序列15PCR的根本反響過程包括：變性、退火、延伸 三個階段。16、轉(zhuǎn)基因動物的根本過程通常包括：將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€受精卵或胚胎干細胞的細胞核中；接種后的受精卵或胚胎干細胞移植到雌性的子宮；完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因；利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動物作為種畜，培育新的純合系。17雜交瘤細胞系的產(chǎn)生是由脾B細胞與骨髓瘤 細胞雜交產(chǎn)生的，由于脾細胞

9、可以利用次黃嘌呤， 骨細胞 提供細胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。18隨著研究的深入第一代抗體稱為多克隆抗體、第二代單克隆抗體、第三代基因工程抗體 。19目前對昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入外源毒蛋白基因 ； 擾亂昆蟲正常生活周期的基因 ； 對病毒基因進展修飾 。20哺乳類RNA聚合酶啟動子中常見的元件TATA、GC、CAAT所對應(yīng)的反式作用蛋白因子分別是 TFIID 、 SP-1 和 CTF/NF1 。21RNA聚合酶的根本轉(zhuǎn)錄因子有、TF-A、TF-B、TFII-D、TF-E他們的結(jié)合順序是： D、A、B、E 。其中TFII-D的功能是與TATA盒結(jié)合 。22

10、與DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下幾種 螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋 、 鋅指模體 、堿性-亮氨酸拉鏈模體 。23限制性切酶的切割方式有三種類型分別是在對稱軸5' 側(cè)切割產(chǎn)生5' 粘端 、在對稱軸3' 側(cè)切割產(chǎn)生3' 粘端在對稱軸處切割產(chǎn)生平段。24質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是： SC構(gòu)型 、 oc構(gòu)型 、 L構(gòu)型 。在電泳中最前面的是 SC構(gòu)型 。25外源基因表達系統(tǒng)，主要有大腸桿菌 、 酵母、 昆蟲 和 哺乳類細胞表 。26轉(zhuǎn)基因動物常用的方法有：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法、DNA顯微注射法、胚胎干細胞法 。三、簡 答1 分

11、別說出5種以上RNA的功能.轉(zhuǎn)運RNA tRNA 轉(zhuǎn)運氨基酸 ；核蛋白體RNA rRNA 核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNA 蛋白質(zhì)合成模板 ；不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體；小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接；小胞漿RNA scRNA/7SL-RNA 蛋白質(zhì)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA 對基因的表達起調(diào)節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA2原核生物與真核生物啟動子的主要差異.原核生物TTGACA - TATAAT-起始位點 -35 -10真核生物增強子-GC -CAAT-TATAA5mGpp起始位點

12、 -110 -70 -253對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面.天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進展改造構(gòu)建：a、參加適宜的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。b、增加或減少適宜的酶切位點，便于重組。 c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。d、改變復(fù)制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件 4舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法.制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交比照找到目的基因。 例如：在腫瘤發(fā)生和開展過程中，

13、腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達的基因。 5雜交瘤細胞系的產(chǎn)生與篩選.脾B細胞+骨髓瘤細胞，加聚乙二醇PEG促進細胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T生長出來的脾B-骨髓瘤融合細胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。 細胞融合物中包含：脾-脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。骨-骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途 徑利用葉酸復(fù)原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對葉酸復(fù)原酶有抑制作用，因此不能生長。骨-脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃嘌呤，骨細胞提供細胞分裂功能。 6、利用雙脫氧末端終止法

14、Sanger法測定DNA一級構(gòu)造的原理與方法.原理是采用核苷酸鏈終止劑2，3，-雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據(jù)堿基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導(dǎo)致脫氧核苷酸鏈延長的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長短不一的DNA片段。 方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反響后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA

15、序列。 7、激活蛋白CAP對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用.環(huán)腺苷酸cAMP受體蛋白CRPcAMP receptor protein，cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAPcAMPactivated protein 。當大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖Lac等啟動子的功能。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的-35區(qū)序列特征TTGACA。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。 CAP的存在功能：能顯著提高酶與啟動子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：CAP通過改變啟動子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與-10區(qū)結(jié)合，起到取代-35區(qū)功

16、能的作用。CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點的結(jié)合，從而提高與其特定啟動子結(jié)合的概率。8、典型的DNA重組實驗通常包括哪些步驟.a、提取供體生物的目的基因或稱外源基因，酶接連接到另一DNA分子上克隆載體，形成一個新的重組DNA分子。 b、將這個重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞并在受體細胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。 c、對那些吸收了重組DNA的受體細胞進展篩選和鑒定。 d、對含有重組DNA的細胞進展大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。9、基因文庫的構(gòu)建對重組子的篩選舉出3種方法并簡述過程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選 或PCR篩選、差式篩選、DNA探針 多數(shù)克隆載體均帶有抗生

17、素抗性基因抗氨芐青霉素、四環(huán)素。當質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。 在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。 如pUC質(zhì)粒含LacZ基因編碼半乳糖苷酶該酶能分解生色底物*-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。 10、說明通過胚胎干細胞獲得轉(zhuǎn)基因動物的根本過程.胚胎干細胞embryonic stem cell,ES：是胚胎發(fā)育期的胚細胞，可以人工培

18、養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細胞的功能。ES細胞的培養(yǎng)：別離胚泡的層細胞團進展培養(yǎng)。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時會分化為肌細胞、N細胞等多種功能細胞，在含有成纖維細胞中培養(yǎng)時ES將保持分化功能。 可以對ES進展基因操作，不影響它的分化功能可以定點整合，解決了隨機整合的問題。向胚胎干細胞導(dǎo)入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。蛋白質(zhì)的生物合成(一)名詞解釋1翻譯(translation)：以mRNA為模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質(zhì)因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA分子上的核苷酸順序表達為有特定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。2密碼子(codon)：mRNA中堿基

19、順序與蛋白質(zhì)中氨基酸順序的對應(yīng)關(guān)系是通過密碼實現(xiàn)的， mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。3密碼的簡并性(degeneracy)：個氨基酸具有兩個以上密碼子的現(xiàn)象。4同義密碼子(synonym codon)：為同種氨基酸編碼的各個密碼子，稱為同義密碼了。5變偶假說(wobble hypothesis)：指反密碼子的前兩個堿基(3-端)按照標準與密碼子的前兩個堿基(5-端)配對，而反密碼子中的第三個堿墓則有*種程度的變動，使其有可能與幾種不同的堿基配對。6移碼突變(frame-shift mutation)：在mRNA中，假設(shè)插入或刪去一個核苷酸，就會使讀碼

20、發(fā)錯誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。 7，同功受體(isoacceptor)：轉(zhuǎn)運同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。8反密碼子(anticodon)：指tRNA反密碼子環(huán)中的三個核苷酸的序列，在蛋白質(zhì)合成過程過堿基配對，識別并結(jié)合到mRNA的特殊密碼上。9多核糖體(polysome)：mRNA同時與假設(shè)干個核糖體結(jié)合形成的念珠狀構(gòu)造，稱為多核糖體。(二)問答題1參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?mRNA：蛋白質(zhì)合成的模板；tRNA：蛋白質(zhì)合成的氨基酸運載工具；核糖體：蛋白質(zhì)合成的場所；輔助因子：(a)起始因子-參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成；(b)延長因

21、子-肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一-終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2遺傳密碼是如何破譯的?提示：三個突破性工作 (1)體外翻譯系統(tǒng)的建立；(2)核糖體結(jié)合技術(shù)；(3)核酸的人工合成。3遺傳密碼有什么特點?(1)密碼無標點：從起始密碼始到終止密碼止，需連續(xù)閱讀，不可中斷。增加或刪除*個核苷酸會發(fā)生移碼突變。 (2)密碼不重疊：組成一個密碼的三個核苷酸只代表一個氨基酸，只使用一次，不重疊使用。 (3)密碼的簡并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對應(yīng)一個密碼外，其余氨基酸均有兩個以上的密碼，對保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。 (4)變偶假說：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要

22、性不大，因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性。 (5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)*些個別例外現(xiàn)象，如*些哺乳動物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子。 (6)起始密碼子AUG，同時也代表Met，終止密碼子UAA、UAG、UGA使用頻率不同。4簡述三種RNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用。(1)mRNA：DNA的遺傳信息通過轉(zhuǎn)錄作用傳遞給mRNA，mRNA作為蛋白質(zhì)合成模板，傳遞遺傳信息，指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。 (2)tRNA：蛋白質(zhì)合成中氨基酸運載工具，tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信

23、息的轉(zhuǎn)換器。 (3)rRNA 核糖體的組分，在形成核糖體的構(gòu)造和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。5簡述核糖體的活性中心的二位點模型及三位點模型的容。(1)二位點模型 A位：氨酰-tRNA進入并結(jié)合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結(jié)合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位。(2)三位點模型 大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個結(jié)合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結(jié)合無負載的tRNA及無負載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。6氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰

24、-tRNA合成酶，形成氨酰-tRNA，反響分兩步進展：(1)活化 需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP-酶復(fù)合物。 ，(2)轉(zhuǎn)移 在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸AMP酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA上，形成氨酰-tRNA。 7簡述蛋白質(zhì)生物合成過程。蛋白質(zhì)合成可分四個步驟，以大腸桿菌為例： (1)氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成，由氨酰-tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰-tRNA。 (2)肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S

25、起始復(fù)合物，整個過程需GTP水解提供能量。 (3)肽鏈的延長：起始復(fù)合物形成后肽鏈即開場延長。首先氨酰-tRNA結(jié)合到核糖體的A位，然后，由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽酰基形成肽鍵，tRNAf或空載tRNA仍留在P位最后核糖體沿mRNA53方向移動一個密碼子距離，A位上的延長一個氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，全部過程需延伸因子EF-Tu、EF-Ts，能量由GTP提供。 (4)肽鏈合成終止，當核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時，終止因子RF-1、RF-2識別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。8蛋白質(zhì)合成中如何保證其翻譯

26、的正確性?提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對mRNA的識別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識別，保證了遺傳信息準確無誤地轉(zhuǎn)譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進入核糖體P位與起始密碼子結(jié)合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進入肽鏈部；(4)核糖體三位點模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA進入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對占據(jù)核糖體A位的氨酰-tRNA的校對；變異校對即基因校

27、對與基因間校對等多種校正作用可以保證翻譯的正確。9原核細胞和真核細胞在合成蛋白質(zhì)的起始過程有什么區(qū)別。(1)起始因子不同：原核為IF-1，IF-2，IF-2，真核起始因子達十幾種。 (2)起始氨酰-tRNA不同：原核為fMet-tRNAf，真核Met-tRNAi(3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體，分40S和60S兩種亞基10蛋白質(zhì)合成后的加工修飾有哪些容?提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚合。11蛋白質(zhì)的高級構(gòu)造是怎樣形成的? 提示：蛋白質(zhì)的高級構(gòu)造是由氨基酸的順序決定的，不

28、同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級構(gòu)造。折疊是在自然條件下自發(fā)進展的，在生理條件下，它是熱力學上最穩(wěn)定的形式，同時離不開環(huán)境因素對它的影響。對于具有四級構(gòu)造的蛋白質(zhì)，其亞基可以由一個基因編碼的一樣肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個不同單順反子mRNA翻譯，或由多順反子mRNA翻譯合成。12真核細胞與原核細胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的合成場所?原核細胞：70S核糖體由30S和50S兩個亞基組成；真核細胞：80S核糖體由40S和60S兩個亞基組成。利用放射性同位素標記法，通過核糖體的別離證明之。13.

29、一種突變的噬菌體蛋白是由于單個核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后，進展指紋圖分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有一個肽段的差異，測得其基酸順序如下： 正常肽段 Met-Val-Cys-Val-Arg 突變體肽段 Met-Ala-Met-Arg1什么核苷酸插入到什么地方導(dǎo)致了氨基酸順序的改變.2推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列.提示：有關(guān)氨基酸的簡并密碼分別為 Val: GUU GUC GUA GUG Arg: CGU CGC CGA CG AGA AGG Cys: UGU UGC Ala: GCU GCC GCA CGC提示：(1)在正常肽段的第一個Val的密碼G

30、UA的G后插入了一個C ；(2)正常肽段的核苷酸序列為：AUG GUA UGC GU CG；突變體肽段的核苷酸序列為：AUG GCU AUG CGU 。14. 試列表比擬核酸與蛋白質(zhì)的構(gòu)造。 核酸Nucleic acids蛋白質(zhì)Proteins DNARNA一級構(gòu)造Primary structure核苷酸序列AGTTCT 或AGUUCU 的排列順序3，5，- 磷酸二酯鍵氨基酸排列順序肽鍵二級構(gòu)造Secondarystructure 雙螺旋主要是氫鍵，堿基堆積力 配對莖-環(huán)構(gòu)造同左 有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象-heli* ，sheet，-turn氫鍵三級構(gòu)

31、造Tertiary structure 超螺旋 RNA空間構(gòu)象 一條肽鏈的空間構(gòu)象德華力 氫鍵 疏水作用 鹽橋 二硫鍵等四級構(gòu)造Quaternarystructure  多條肽鏈或不同蛋白15. 試比擬原核生物與真核生物的翻譯。原核生物與真核生物的翻譯比擬如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。1.起始Met不需甲酰化；2.無SD序列，但需要一個掃描過程；3.tRNA先于mRNA與核糖體小亞基結(jié)合；4.起始因子比擬多；5.只一個終止釋放因子。(三)填空題1蛋白質(zhì)的生物合成是以_ mRNA為模板，以_氨酰-tRNA _為原料直接供體，以_核糖體_

32、為合成所。2生物界共有_64_個密碼子，其中_61_個為氨基酸編碼，起始密碼子為_AUG_；終止密碼子為_ UAA _、_UAG_、_ UGA_。3原核生物的起始tRNA以_ tRNAf_表示，真核生物的起始tRNA以_ tRNAi _表示，延伸中的甲硫氨酰tRNA以_tRNAm_表示。4植物細胞中蛋白質(zhì)生物合成可在_核糖體_、_線粒體_和_葉綠體_三種細胞器進展。5延長因子T由Tu和Ts兩個亞基組成，Tu為對熱_不穩(wěn)定_蛋白質(zhì)，Ts為對熱_穩(wěn)定_蛋白質(zhì)。6原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識別終止密碼子_UAA_、_UAG_；RF-2識別_UAA_、_UGA_；真核中的釋放因子只有_R

33、F_一種。7氨酰-tRNA合成酶對_氨基酸_和相應(yīng)的_tRNA_有高度的選擇性。8原核細胞的起始氨基酸是_甲酰甲硫氨酸_，起始氨酰-tRNA是_甲酰甲硫氨酰-tRNA_。9原核細胞核糖體的_小_亞基上的 _16SrRNA_協(xié)助識別起始密碼子。l0每形成一個肽鍵要消耗_4_個高能磷酸鍵，但在合成起始時還需多消耗_1_個高能磷酸鍵。11肽基轉(zhuǎn)移酶在蛋白質(zhì)生物合成中的作用是催化_肽鍵_形成和_ 肽酰-tRNA_的水解。12肽鏈合成終止時，_終止因子_進人“A位，識別出_終止密碼子_，同時終止因子使_肽基轉(zhuǎn)移酶_的催化作用轉(zhuǎn)變?yōu)開水解作用_。13原核生物的核糖體由_30S_小亞基和_50S_大亞基組成

34、，真核生物核糖體由_40S_小亞基和_60S_大亞基組成。14.蛋白質(zhì)中可進展磷酸化修飾的氨基酸殘基主要為_Ser_、_Thr_、_Tyr_。(四)選擇題1蛋白質(zhì)生物合成的方向是( )。從CN端 定點雙向進展 從N端、C端同時進展 從NC端2不能合成蛋白質(zhì)的細胞器是( )。線粒體 葉綠體 高爾基體核糖體3真核生物的延伸因子是( )。EFTu EF一2 EF-G EF一1 4真核生物的釋放因子是()。RFRF一1 RF一2 RF一35能與tRNA反密碼子中的I堿基配對的是( )。A、G C、U U U、C、A6蛋白質(zhì)合成所需能量來自( )。ATP GTP ATP、GTPGTP7tRNA的作用是(

35、 )。將一個氨基酸連接到另一個氨基酸上 把氨基酸帶到mRNA位置上將mRNA接到核糖體上 增加氨基酸的有效濃度8關(guān)于核糖體的移位，表達正確的選項是( )?？蛰dtRNA的脫落發(fā)生在“A位上 核糖體沿mRNA的35方向相對移動核糖體沿mRNA的53方向相對移動核糖體在mRNA上一次移動的距離相當于二個核苷酸的長度9在蛋白質(zhì)合成中，以下哪一步不需要消耗高能磷酸鍵( )。肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵 氨酰一tRNA與核糖體的“A，位點結(jié)合核糖體沿mRNA移動fMettRNAf與mRNA的起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合10在真核細胞中肽鏈合成的終止原因是( )。已到達mRNA分子的盡頭 具有特異的tRNA識

36、別終止密碼子終止密碼子本身具有酯酶作用，可水解肽酰與tRNA之是的酯鍵終止密碼子被終止因子(RF)所識別11蛋白質(zhì)生物合成中的終止密碼是( )。UAAUAU UAC UAGUGA12根據(jù)擺動假說，當tRNA反密碼子第1位堿基是I時，能夠識別哪幾種密碼子( )A CG T U13以下哪些因子是真核生物蛋白質(zhì)合成的起始因子( )。IF1 IF2 eIF2 eIF4 elF4A14蛋白質(zhì)生物合成具有以下哪些特征( )。氨基酸必須活化 需要消耗能量 每延長一個氨基酸必須經(jīng)過進位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個步驟合成肽鏈由C端向N端不斷延長 新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質(zhì)15以下哪些容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、

37、修飾( )。切除含子，連接外顯子 切除信號肽 切除N-端Met形成二硫鍵 氨的側(cè)鏈修飾16蛋白質(zhì)生物合成過程中，以下哪些步驟需要消耗能量( )。氨基酸分子的活化 70S起始復(fù)合物的形成 氨酰tRNA進入核糖體A位肽鍵形成 核糖體移位17原核生物的肽鏈延伸過程有以下哪些物質(zhì)參與( )。肽基轉(zhuǎn)移酶 鳥苷三磷酸 mRNA 甲酰甲硫氨酰-tRNAEF-Tu、EF-Ts、 EF-G18.Shine-Dalgarno順序(SD-順序)是指: ( )在mRNA分子的起始碼上游8-13個核苷酸處的順序在DNA分子上轉(zhuǎn)錄起始點前8-13個核苷酸處的順序16srRNA3'端富含嘧啶的互補順序 啟動基因的順

38、序特征 以上都正確19.在研究蛋白合成中,可利用嘌呤霉素,這是因為它: ( )使大小亞基解聚 使肽鏈提前釋放抑制氨基酰-tRNA合成酶活性 防止多核糖體形成 以上都正確20.氨基酸活化酶：()活化氨基酸的氨基 利用GTP作為活化氨基酸的能量來源催化在tRNA的5磷酸與相應(yīng)氨基酸間形成酯鍵每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應(yīng)的tRNA以上都不正確(五)是非題1DNA不僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。( × )2密碼子在mRNA上的閱讀方向為53。( )3每種氨基酸都有兩種以上密碼子。(× )4一種tRNA只能識別一種密碼子。( × )5線粒體和葉綠體的核糖體

39、的亞基組成與原核生物類似。( )6大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時，才能與mRNA結(jié)合。( × )7大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與mRNA結(jié)合。( )8在大腸桿菌中，一種氨基酸只對應(yīng)于一種氨酰-tRNA合成酶。( )9氨基酸活化時，在氨酰-tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗個高能磷酸鍵。( × )10線粒體和葉綠體的蛋白質(zhì)生物合成起始與原核生物一樣。( )11每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應(yīng)。( × )12AUG既可作為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈部Met的密碼子。( )13構(gòu)成密碼子

40、和反密碼子的堿基都只是A、U、C、G。( × )14核糖體大小亞基的結(jié)合和別離與Mg2+，的濃度有關(guān)。( )15核糖體的活性中心“A位和“P位都主要在大亞基上。( × )16. E.coli中，DnaA與復(fù)制起始區(qū)DNA結(jié)合，決定復(fù)制的起始。( )核酸的生物合成(一)名詞解釋1中心法則(central dogma)：生物體遺傳信息流動途徑。最初由Crick(1958)提出，經(jīng)后人的不斷補充和修改，現(xiàn)包括反轉(zhuǎn)錄和RNA復(fù)制等容。2半保存復(fù)制(簡稱復(fù)制)semiconservative replication)：親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對原則各合成一條互補鏈，這樣

41、一條親代DNA雙螺旋，形成兩條完全一樣的子代DNA螺旋，子代DNA分子中都有一條合成的“新鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保存復(fù)制。3DNA聚合酶(DNA polymerase)：指以脫氧核苷三磷酸為底物，按5 3方向合成DNA的一類酶，反響條件：4種脫氧核苷三磷酸、Mg+、模板、引物。DNA聚合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。4解旋酶(helicase)：是一類通過水解ATP提供能量，使DNA雙螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對堿基，水解2分子ATP。5拓撲異構(gòu)酶(topoisomerase)：是一類引起DNA拓撲異構(gòu)反響的酶，分為兩類：類型I的酶

42、能使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反響無需供應(yīng)能量，類型的酶能使DNA的兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當它引入超螺旋時，需要由ATP供應(yīng)能量。6單鏈DNA結(jié)合蛋白(single-strand binding protein ,SSB)：是一類特異性和單鏈區(qū)DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。它的功能在于穩(wěn)定DNA解開的單鏈，阻止復(fù)性和保護單鏈局部不被核酸酶降解。 7DNA連接酶(DNA ligase)：是專門催化雙鏈DNA中缺口共價連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。反響需要能量。8引物酶及引發(fā)體(primase primosome)：以DNA為模板，以核糖核苷酸為底物，在DN

43、A合成中，催化形成RNA引物的酶稱為引物酶及引物體。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成一個復(fù)合體，即引發(fā)體才有生物活性。 9復(fù)制叉(replication fork)：復(fù)制中的DNA分子，末復(fù)制的局部是親代雙螺旋，而復(fù)制好的局部是分開的，由兩個子代雙螺旋組成，復(fù)制正在進展的局部呈丫狀叫做復(fù)制叉。 10復(fù)制眼構(gòu)造：在一段DNA上，正在復(fù)制的局部形成眼狀構(gòu)造。復(fù)制眼在環(huán)狀DNA上形成的構(gòu)造與希臘字母相象，所以叫構(gòu)造。 11前導(dǎo)鏈(1eading strand)：在DNA復(fù)制過程中，以親代鏈(3 5為模板時，子代鏈的合成 (5 3)是連續(xù)的這條能連續(xù)合成的鏈稱前導(dǎo)鏈。 1

44、2岡崎片段(Okazaki fragment)、后隨鏈(1agging strand)：在DNA復(fù)制過程中，以親代鏈(5 3)為模板時，子代鏈的合成不能以3 5方向進展，而是按5 3方向合成出許多小片段，因為是岡崎等人研究發(fā)現(xiàn)，因此稱岡崎片段。由許多岡崎片段連接而成的子代鏈稱為后隨鏈。13半不連續(xù)復(fù)制(Semidiscontinuous replication)：在DNA復(fù)制過程中，一條鏈的合成是連續(xù)的，另一條鏈的合成是不連續(xù)的，所以叫做半不連續(xù)復(fù)制。14逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription)：以RNA為模板合成DNA的過程。15逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transeriptas

45、e)：催化以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程的酶。 Temin(1960)首次從勞氏肉瘤病毒中發(fā)現(xiàn)。逆轉(zhuǎn)錄酶具有多種酶活性：依賴RNA的DNA聚合酶活性；依賴DNA的DNA聚合酶活性，RNA水解酶活性，DNA合成方向5 3。合成時需要引物與模板。16突變(mutation)：基因組DNA順序上的任何一種改變都叫做突變。分點突變和構(gòu)造畸變。17點突變(Point mutation)：是指一個或幾個堿基對被置換(replacement)，這種置換又分兩種形式：轉(zhuǎn)換(transition)一-指用一個嘌呤堿置換另一個嘌呤堿，一個嘧啶堿置換另一個嘧啶堿；顛換(transversion)一-指用嘌呤堿

46、置換嘧啶堿或用嘧啶堿置換嘌呤堿。18構(gòu)造畸變：基因中的缺口、或插入(insertion)或缺失(deletion)*些堿基造成移碼突變使 DNA的模板鏈失去功能。19誘變劑(mutagen)：使基因組發(fā)生突變的物理、化學、生物因素叫誘變劑。20修復(fù)(repair)：除去DNA上的損傷，恢復(fù)DNA的正常構(gòu)造和功能是生物機體的一種保護功能。21光裂合酶修復(fù)(又稱光復(fù)活)(photoreactivation)：可見光將光裂合酶激活，它分解DNA上由紫外線照射而形成的嘧啶二聚體，使它們恢復(fù)成兩個單獨的嘧啶堿。22切除修復(fù)(e*cision repair)：在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷局部切

47、除，以互補鏈為模板，合成出空缺的局部，使DNA恢復(fù)正常構(gòu)造的過程。23重組修復(fù)(rebination repair)：DNA在有損傷的情況下也可以復(fù)制，復(fù)制時子代鏈躍過損傷部位并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應(yīng)的核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核苷酸的序列補上母鏈的空缺，此過程稱重組修復(fù)。24誘導(dǎo)修復(fù)和應(yīng)急反響(induction repair and SOS response)(SOS修復(fù))：由于DNA受到損傷或復(fù)制系統(tǒng)受到抑制所誘導(dǎo)引起的一系列復(fù)雜的應(yīng)急效應(yīng)，稱為應(yīng)急反響。SOS反響主要包括兩個方面：DNA損傷修復(fù)(SOS修復(fù)或稱誘導(dǎo)修復(fù))和誘變效應(yīng)。SO

48、S修復(fù)是一種易出過失的修復(fù)過程，雖能修復(fù)DNA的損傷而防止死亡。但卻帶來高的變異率。25DNA重組(rebination)：DNA重組是指在真核生物減數(shù)分裂過程中，細菌細胞的轉(zhuǎn)化中、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)中等發(fā)生的DNA片段的交換或插入。26基因工程(又稱基因重組技術(shù))(gene/genetic engineering)：是將外源基因經(jīng)過剪切加工，再插入到一個具有自我復(fù)制能力的載體DNA中，將新組合的DNA轉(zhuǎn)移到一個寄主細胞中，外源基因就可以隨著寄主細胞的分裂進展繁殖，寄主細胞也借此獲得外源基因所攜帶的新特性。27轉(zhuǎn)錄(transcription)：由依賴于DNA的RNA聚合酶催化，以DNA的一條鏈的一定區(qū)

49、段為模板，按照堿基配對原則，合成一條與DNA鏈互補的RNA鏈的過程。28模板鏈(template strand)又稱負(-)鏈，反意義鏈(antisense strand)：轉(zhuǎn)錄過程中用作模板的這條DNA鏈，稱模板鏈。29非模板鏈(nontemplate strand)又稱正(+)鏈，編碼鏈(coding strand)，有意義鏈(sense strand)：與模板鏈互補的那條DNA鏈，稱非模板鏈。30不對稱轉(zhuǎn)錄(asymmetric transcription)：因為RNA的轉(zhuǎn)錄只在DNA的任一條鏈上進展，所以把RNA的合成叫做不對稱轉(zhuǎn)錄。31啟動子(promoter)：DNA鏈上能指示RN

50、A轉(zhuǎn)錄起始的DNA序列稱啟動子。32轉(zhuǎn)錄單位(transcription unit)：RNA的轉(zhuǎn)錄只在DNA的一個片段上進展，這段DNA序列叫轉(zhuǎn)錄單位。33含子(intron)：真核生物基因中，不為蛋白質(zhì)編碼的、在mRNA加工過程中消失的DNA序列，稱含子。 34外顯子(e*on)：真核生物基因中，在mRNA上出現(xiàn)并代表蛋白質(zhì)的DNA序列，叫外顯子。35轉(zhuǎn)錄加工(post-transcriptional processing)：細菌中很多RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RNA分子，這個過程叫轉(zhuǎn)錄后加工。36核不均一RNA(hnRNA)：是真核生物

51、細胞核的mRNA前體分子，分子量較大，并且不均一，含有許多含子。 37RNA的復(fù)制(RNA replication)：*些病毒RNA既可以做為模板合成病毒蛋白質(zhì)又可在 RNA復(fù)制酶(RNA replicase)的催化下，以自身RNA為模板，合成互補的RNA新鏈，合成方向5'3，這一過程叫RNA復(fù)制。(二)問答題1試述Meselson和Stahl關(guān)于DNA半保存復(fù)制的證明實驗。提示：將Ecoli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代，使所有DNA分子標記上15N；將15N標記的Ecoli再放入普通的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在細胞生長一代、二代 、 、n代的時間間隔采樣；采用氯

52、化銫密度梯度離心別離DNA，并用紫外照相技術(shù)檢測DNA所在位置；結(jié)果如下：其結(jié)果確切地證明DNA以半保存方式復(fù)制。2描述大腸桿菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。Ecoli DNA聚合酶I是多功能酶，具有：DNA聚合酶活性，能按模板要求，以5 3方向合成DNA，在DNA復(fù)制中，常用以填補引物切除后留下的空隙；5'3外切酶活性，DNA復(fù)制后期，用于切除RNA引物；3'5外切酶活性，用以校對復(fù)制的正確性，當出現(xiàn)錯配堿基時，切除錯配堿基直到正確配對為止；DNA聚合酶I不是DNA復(fù)制和校正中的主要聚合酶，它的功能主要是修復(fù)。3試述DNA復(fù)制過程，總結(jié)DNA復(fù)制的根本規(guī)律。以E

53、coli為例，DNA復(fù)制過程分三個階段；起始：從DNA上控制復(fù)制起始的序列即起始點開場復(fù)制，形成復(fù)制叉，復(fù)制方向多為雙向，也可以是單向，假設(shè)以雙向進展復(fù)制，兩個方向的復(fù)制速度不一定一樣。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復(fù)制需要有含3-OH的引物，引物由含有引物酶的引發(fā)體合成一段含3一10個核苷酸的RNA片段；延長：DNA復(fù)制時，分別以兩條親代DNA鏈為模板，當復(fù)制叉沿DNA移動時，以親代35鏈為模板時，子鏈的合成方向是5'3'，可連續(xù)進展，以親代53鏈為模板時，子鏈不能以35方向合成，而是先合成出許多53方向的岡崎片段，然后連接起來形成一條子鏈；終止：當一個岡崎

54、片段的3'-OH與前一個岡崎片段的5-磷酸接近時，復(fù)制停頓，由DNA聚合酶I切除引物，填補空隙，連接酶連接相鄰的DNA片段。 DNA復(fù)制時，由DNA解旋酶(又稱解鏈酶)通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈，并沿復(fù)制叉方向移動，所產(chǎn)生的單鏈很快被單鏈結(jié)合蛋白所覆蓋，防止DNA的變性并保護其單鏈不被降解，復(fù)制叉前進過程中，雙螺旋產(chǎn)生的應(yīng)力在拓撲異構(gòu)酶的作用下得到調(diào)整。DNA復(fù)制根本規(guī)律：復(fù)制過程為半保存方式；原核生物單點起始，真核生物多點起始，復(fù)制方向多為雙向，也有單向；復(fù)制方式呈多樣性，(直線型、Q型、滾動環(huán)型等)；新鏈合成需要引物，引物RNA長度般為幾個10個核苷酸，新鏈合成方向5 3，與模板鏈反向，堿基互補；復(fù)制為半不連續(xù)的，以解決復(fù)制過程中，兩條不同極性的鏈同時延伸問題，即條鏈可按5 3方向連續(xù)合成稱