1、磁珠法質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒MagBeadsPlasmidDNAMiniExtractionKit【目錄號(hào)】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100【運(yùn)輸條件】225C；【保存條件】組分、于28c保存；組分于-20C保存；其它組分室溫保存;【試劑盒組成】KitComponent試劑盒組成PDE-5005(50T)PDE-5010(100T)PDE-5030(300T)PDE-5100(100T)PDE-Buffer1菌體懸浮液12mL22mL65mL220mLPDE-Buffer2菌體裂解液12mL22mL65mL220mLPDE-Buffer3質(zhì)粒復(fù)性液20m

2、L40mL110mL400mLMagneticBeads磁珠懸浮液3mL6mL16mL55mLWashBuffer清洗液30mL60mL160mL520mLEluteBuffer洗脫液10mL20mL30mL60mLRNaseASolutionRNaseA酶溶液30妙60妙165妙600口【考前須知】1.使用前將RNaseA溶液組分全部參加菌體懸浮液組分中,4c保存?zhèn)溆?2 .使用前檢查菌體裂解液組分是否出現(xiàn)渾濁,如有請(qǐng)置于37c水浴中溫浴至澄清；3 .實(shí)驗(yàn)前質(zhì)粒復(fù)性液組分需提前置于4c冷卻充分；4 .菌體裂解液組分和質(zhì)粒復(fù)性液組分使用后應(yīng)請(qǐng)立即蓋緊蓋子；5 .磁珠懸浮液組分嚴(yán)禁凍融和離心,以

3、免磁珠受到損害,使用前務(wù)必充分混勻；6 .所有離心步驟均為室溫下進(jìn)行,其中參加質(zhì)粒復(fù)性液組分后低溫離心效果更佳；7 .RNaseA溶液組分長(zhǎng)期不使用于-20C保存,融化后4c保存,并盡快使用;8 .質(zhì)粒DNA抽提得量與細(xì)菌的培養(yǎng)濃度、宿主菌、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)；9 .本操作指南經(jīng)公司反復(fù)驗(yàn)證,使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀并按指南建議操作.【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】本試劑盒可應(yīng)用于對(duì)小量菌液進(jìn)行質(zhì)粒DNA抽提.試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩沖液系統(tǒng).磁珠外表修飾有特殊化學(xué)基團(tuán),在一定條件下對(duì)質(zhì)粒DNA具有極強(qiáng)的親和力,當(dāng)條件改變時(shí)可以可逆的釋放質(zhì)粒DNA,從而到達(dá)別離純化質(zhì)粒DNA的效果.整個(gè)操作過程簡(jiǎn)便、快速.本產(chǎn)

4、品可最大限度的去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì),保證提取所得質(zhì)粒DNA的純度,所得質(zhì)粒DNA產(chǎn)物可直接應(yīng)用于酶切、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn).本試劑盒可在EP管中進(jìn)行手動(dòng)法操作、在96孔圓孔板中實(shí)現(xiàn)手動(dòng)法高通量操作單人同時(shí)操作16塊96孔板,可同步實(shí)現(xiàn)96576份樣本抽提工作、或者與各種自動(dòng)化核酸提取儀配合使用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高通量操作.【試劑盒說明】樣本量核酸得量單樣本提取時(shí)間6X96孔板提取時(shí)間菌液1.05.0mL10-20g40min60min【自備儀器、耗材和試劑】手動(dòng)普通版金屬浴、渦旋混合儀、離心機(jī)、EP管、EP管用磁力架、80%乙醇.手動(dòng)高通量版渦旋混合儀、吸水紙、烘箱或電風(fēng)扇、

5、水浴鍋、96孔圓孔板孔體積2.2mL、96孔圓孔板專用磁力架、96孔板離心機(jī)、48孔尖底板孔體積4mL、48孔板用硅膠墊或PCR板封板膜、80%乙醇.儀器自動(dòng)版英芮誠(chéng)ETP-400核酸提取儀、渦旋混合儀、離心機(jī)、EP管、96孔圓孔板、80%乙醇.【手動(dòng)普通版操作步驟】1 .菌體收集將適量菌體1.05.0mL轉(zhuǎn)移至EP管中,室溫、12000rpm離心2min,吸棄上清液.2 .菌體懸浮向EP管中參加200pL菌體懸浮液,搖晃將菌體沉淀徹底懸浮.3 .菌體裂解向EP管中參加200pL菌體裂解液,上下輕柔顛倒EP管約2min使菌體充分裂解,裂解液應(yīng)變?yōu)楦境吻?注：如果菌液量較大,可延長(zhǎng)裂解時(shí)間至約

6、4min,但不宜超過4min,否那么質(zhì)粒難以復(fù)性.4 .質(zhì)粒復(fù)性向EP管中參加350pL質(zhì)粒復(fù)性液已4c冷卻充分,上下輕柔顛倒EP管使質(zhì)粒復(fù)性最正確狀態(tài)為內(nèi)容物呈蛋花狀.將EP管于4C、12000rpm離心10min,將上精液轉(zhuǎn)移到新的EP管中,并做好記錄.5 .核酸結(jié)合向轉(zhuǎn)入上精液的EP管中參加50卜L吹打均勻的磁珠懸浮液,渦旋振蕩5min,保證磁珠與溶液充分混勻.6 .磁性別離將EP管置于磁力架上靜置約20s至磁珠吸附完全.如EP管內(nèi)蓋有磁珠殘夜,保持EP管于磁力架上,整體顛倒兩次使磁珠吸附完全,然后徹底吸棄上清液,期間防止接觸磁珠.7 .清洗1向EP管中參加500小口青洗液,從磁力架上取

7、下,上下用力搖動(dòng)35次或使用移液器吹打使磁珠分散均勻,然后渦旋震蕩1min,參考步驟6進(jìn)行磁性別離.2使用500仙L80%乙醇,參照步驟71操作2次.注：該步驟DNA量過多時(shí)可能引起磁珠團(tuán)聚,但不影響最終DNA得量及質(zhì)量.8 .除醇保持EP管于磁力架上,置于55c烘箱中枯燥8min.注：如沒有烘箱,可將EPf置于通風(fēng)櫥通風(fēng)或電風(fēng)扇直接吹10min.9 .洗脫取出EP管,參加50小酰脫液,用移液器吹打3min或1000rpm渦旋振蕩3min使磁珠與洗脫液充分混勻.注：該步驟操作完畢后,將EPT放入金屬浴中繼續(xù)溫浴5min,再次1000rpm曷旋振蕩3min,可增進(jìn)一步提升洗脫效率,特別是針對(duì)分子

8、量較大的質(zhì)粒.10 .核酸轉(zhuǎn)移將EP管置于磁力架上靜置20s至磁珠吸附完全,用移液器將洗脫液轉(zhuǎn)移至另一干凈EP管中得DNA回收產(chǎn)物,抽提過程完畢,此時(shí)可棄去磁珠.【手動(dòng)高通量版操作步驟】本試劑盒直接在48孔板中完成搖菌、收菌、重懸、裂解和復(fù)性步驟后,轉(zhuǎn)入96孔板完成后續(xù)抽提工作1 .菌體收集菌液提前在48孔板中培養(yǎng)過夜,將48孔板于4000rpm離心5min,保證沉淀緊附于48孔板底.小心直接倒扣棄去培養(yǎng)液,繼續(xù)呈倒扣狀置于干凈吸水紙上吸盡殘液.2 .菌體懸浮向48孔板樣本孔中分別參加200仙L菌體懸浮液,4000rpm渦旋震蕩12min將菌體沉淀徹底懸浮.3 .菌體裂解向48孔板樣本孔中分別

9、參加200口菌體裂解液,將48孔板于400500rpm溫和渦旋震蕩1min使菌體裂解,裂解液應(yīng)變?yōu)楦境吻?然后靜置1min.注：如果菌液量較大,可延長(zhǎng)裂解時(shí)間至約4min,但勿超過4min,否那么質(zhì)粒難以復(fù)性.4 .質(zhì)粒復(fù)性：向48孔板樣本孔中分別參加350口質(zhì)粒復(fù)性液已提前4c冷卻充分.將48孔板于700rpm溫和渦旋震蕩1min使質(zhì)粒復(fù)性最正確狀態(tài)為內(nèi)容物呈蛋花狀.將48孔板4000rpm離心15min,查看是否依然有懸浮物,假設(shè)有那么繼續(xù)離心5min使孔道底部形成密實(shí)白色沉淀.注：此步驟離心操作務(wù)必在板孔底部形成密實(shí)白色沉淀,否那么應(yīng)繼續(xù)延長(zhǎng)離心時(shí)間510min.5 .核酸結(jié)合分別轉(zhuǎn)移

10、600pL質(zhì)粒復(fù)性上精液至96孔板中,向樣本孔中分別參加50pL吹打均勻的磁珠懸浮液,將96孔板用封板膜封住,于1200rpm渦旋震蕩5min,使磁珠均勻分散于溶液中.6 .磁性別離將96孔板置于專用磁力架上約20s至磁珠吸附完全.如板孔內(nèi)壁有磁珠殘夜,保持96孔板于磁力架上,傾斜96孔板使上精液沖洗磁珠將磁珠吸附完全.然后小心直接倒扣棄去上清液,繼續(xù)呈倒扣狀置于干凈吸水紙上吸盡殘液.7 .清洗1向96孔板樣本孔中分別參加500小的洗液,1200rpm渦旋振蕩1min,參考步驟6進(jìn)行磁性別離.2使用500卜L80%乙醇,參照步驟71操作2次.8 .除醇保持96孔板在磁力架上,置于55c烘箱中枯

11、燥8min.注：如沒有烘箱,可將EPt置于通風(fēng)櫥通風(fēng)或電風(fēng)扇直接吹10min.9 .洗脫取出96孔板,向樣本孔中分別參加50口洗脫液,1200rpm渦旋振蕩3min,使磁珠與洗脫液充分混勻.注：該步驟操作完畢后,將96?板放入65c水浴鍋中繼續(xù)溫浴5min,再次1200rpm曷旋振蕩3min,可增進(jìn)一步提升洗脫效率,特別是針對(duì)分子量較大的質(zhì)粒.10 .核酸轉(zhuǎn)移將96孔板置于磁力架上靜置約20s至磁珠吸附完全,用移液器將洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈EP管或者PCR板中,抽提過程完畢,此時(shí)可棄去磁珠.亦可使用本公司96孔板配套磁力爪,直接將磁珠從96孔板中移除,將洗脫液留在96孔板中【儀器自動(dòng)提取操作步驟】本

12、方法以英芮誠(chéng)ETP-400型全自動(dòng)核酸提取儀為例,在96孔圓孔板中進(jìn)行操作,同步可完成48份樣本的質(zhì)粒DNA抽提工作.1 .準(zhǔn)備96孔板參照下表用量向96孔板相應(yīng)孔位中參加對(duì)應(yīng)試劑：樣本孔位1、5、92、6、103、7、114、8、12試齊I磁珠懸浮液50科L上清液600科L清洗液600.80%乙醇600.洗脫液40dL2 .菌體收集、懸浮、裂解、復(fù)性參考【手動(dòng)普通版操作步驟】或者【手動(dòng)高通量版操作步驟】完成菌體收集、菌體懸浮、菌體裂解和質(zhì)粒復(fù)性操作.將質(zhì)粒復(fù)性液轉(zhuǎn)移至96孔板的第2/8列孔位,并做好記錄.3.上機(jī)提取將96孔板放入ETP-400型核酸提取儀中,插入磁棒套,翻開儀器操作軟件,選

13、擇“質(zhì)粒DNA提取程序,點(diǎn)擊“運(yùn)行執(zhí)行程序.“質(zhì)粒DNA提取程序各參數(shù)設(shè)置如下,如機(jī)器和說明書不一致,請(qǐng)以說明書為準(zhǔn)：步驟聊城運(yùn)行姬助時(shí)陽秒分|艘前慚勵(lì)直峨弓網(wǎng)溫曙組溫真組溫康四組溫賴組溫腐卡組溫度C11結(jié)合P300504強(qiáng)0100P00022消洗100205強(qiáng)00000033清洗:6023005強(qiáng)00000044洗脫350202強(qiáng)45454545454552棄磁工k15005強(qiáng)0000004.核酸轉(zhuǎn)移程序運(yùn)行完畢,取下96孔板,將洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈的EP管或者PCR板中,提取過程完畢,此時(shí)可以棄去96孔板附錄1:ETP-300|自動(dòng)核酸提取儀-具有卓越性能的磁棒法自動(dòng)化核酸純化系統(tǒng)【儀器簡(jiǎn)介】

14、ETP-300系列自動(dòng)核酸提取儀是基于納米磁珠分選技術(shù),集富集、清洗、洗脫于一體,且全過程能自動(dòng)化限制的一種儀器.其可以從全血、病毒、組織、植物、細(xì)菌和培養(yǎng)細(xì)胞等樣本中自動(dòng)純化核酸.憑借預(yù)先錄入的程序,該儀器可為每個(gè)忙碌的實(shí)驗(yàn)室提供一個(gè)高穩(wěn)定性、高效率的自動(dòng)化核酸純化解決方案.【儀器型號(hào)】ETP-300:適用96孔板,單個(gè)處理體積為：201000W1,可輕松實(shí)現(xiàn)132個(gè)樣本處理.【儀器參數(shù)】孔位中混合強(qiáng)度強(qiáng)、中和弱,共3檔孔位中振動(dòng)幅度1-5,共5檔磁珠釋放磁棒釋放磁珠的高度位置可以選擇,最大程度杜絕磁珠的掛壁現(xiàn)象提取孔間差CV98%加熱溫度8個(gè)獨(dú)立模塊,可以程序自動(dòng)選擇裂解加熱與洗脫加熱,室

15、溫至75c樣本板中的實(shí)際溫度,非加熱模塊的表觀溫度操作界囿window8系統(tǒng),彩色液晶+觸控操作內(nèi)部程序可新建、編輯、刪除模式程序,且可存儲(chǔ)大于100組程序程序設(shè)定操作步驟可設(shè)置為2-12步,孔位間可以自由選擇移動(dòng),滿足了所有磁珠法試劑盒的磁棒移動(dòng)需求使用電源AC110240V50Hz/60Hz1000VA操作濕度范圍低于80%紫外消毒內(nèi)置紫外燈,可進(jìn)行消毒處理【儀器應(yīng)用】本儀器可用于植物組織、動(dòng)物組織、全血、細(xì)菌、質(zhì)粒、病毒、血清游離、法醫(yī)檢材、海洋生物、中草藥和真菌等各種樣本的核酸提取,亦可應(yīng)用于各種藥物篩選、小分子、大分子以及蛋白純化等過程.【卓越的優(yōu)勢(shì)】1、局靈活性磁棒/磁套的混合強(qiáng)度

16、和振度幅度可自由選擇混合強(qiáng)度和振動(dòng)幅度的可調(diào)使得溶液混勻和清洗等更加合適,完美滿足要求；獨(dú)有的20秒微振技術(shù)在磁珠吸附過程中配有獨(dú)特的提前20秒2mm微震模式,使得磁珠更加容易聚集到磁棒的底端,杜絕磁珠上跑現(xiàn)象,使提取率98%,結(jié)果更加穩(wěn)定;唯一的磁珠釋放高度可調(diào)技術(shù)磁棒釋放磁珠的高度位置可以選擇,最大程度杜絕磁珠的掛壁現(xiàn)象;創(chuàng)新的多步驟程序設(shè)定技術(shù),樣本的操作具有極高的自由度操作步驟可設(shè)置為2-12步,孔位間可以自由選擇移動(dòng),可以滿足cfDNA提取、片段DNA篩選、雙磁珠法等所有磁珠法試劑盒的磁棒移動(dòng)需求.2、獨(dú)一無二的8道獨(dú)立控溫技術(shù)采用獨(dú)一無二的8道獨(dú)立控溫技術(shù)每個(gè)通道的溫控均可在室溫-75C間自由選擇.唯一實(shí)現(xiàn)同一樣本位不同溫度裂解需求結(jié)合多步驟程序設(shè)定技術(shù),唯一實(shí)現(xiàn)在同一個(gè)樣本位先后采用不同的加熱溫度,完美實(shí)現(xiàn)組織樣本的不同溫度深度裂解需求.3、程序提醒功能自動(dòng)化程序操作結(jié)束,即有美妙的音樂提醒.附錄2:英芮誠(chéng)磁珠法局部試劑盒一覽1 .高通量PCR產(chǎn)物回收試劑盒；2 .高通量膠DNA回收試劑盒；3 .質(zhì)粒DNA抽提試劑盒；4 .唾液基因組DNA提取試劑盒；5 .拭子基因組DNA提取試劑盒；6