1、第一節(jié)第一節(jié)含金屬或鹵素有機(jī)藥物含金屬或鹵素有機(jī)藥物的前處理方法的前處理方法一有機(jī)藥物中金屬或鹵素的結(jié)合狀態(tài)一有機(jī)藥物中金屬或鹵素的結(jié)合狀態(tài)二不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法1 1含金屬的有機(jī)藥物含金屬的有機(jī)藥物u金屬原子不直接與碳原子相連 -結(jié)合不牢固有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物。有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物。u金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連 -結(jié)合牢固有機(jī)金屬藥物有機(jī)金屬藥物一有機(jī)藥物中金屬或鹵素的結(jié)合狀態(tài)一有機(jī)藥物中金屬或鹵素的結(jié)合狀態(tài)2 2含鹵素的有機(jī)藥物含鹵素的有機(jī)藥物u鹵素和芳環(huán)相連：結(jié)合牢固u鹵素和脂肪鏈的碳原子相連

2、：結(jié)合不牢固（一）直接測定法（一）直接測定法 適用于：水溶液中可以電離的藥物二不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法u金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物u某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物 如富馬酸亞鐵的含測l 直接回流后測定法： 適用于鹵素原子結(jié)合不牢固的含鹵素有機(jī)藥物 三氯叔丁醇的含測/六氯對二甲苯l 硫酸水解后測定法： 適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬的有機(jī)藥物。 硬脂酸鎂的含測（二）經(jīng)水解后測定法（二）經(jīng)水解后測定法1堿性還原后測定堿性還原后測定 適用于鹵素原子和芳環(huán)結(jié)合的含鹵素有機(jī)藥物。 生成的無機(jī)鹵化物用銀量法銀量法測定.2酸性還原后測定酸性還原后測定 同上3

3、利用藥物中可游離的金屬離子的氧化利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量性測定含量 含Sb5+藥物，含F(xiàn)e3+藥物（三）經(jīng)氧化還原后測定法（三）經(jīng)氧化還原后測定法 適用于結(jié)合狀態(tài)牢固的有機(jī)金屬藥物和含鹵素有機(jī)藥物（一）濕法破壞（一）濕法破壞 利用強(qiáng)氧化劑強(qiáng)氧化劑將有機(jī)金屬轉(zhuǎn)變成金屬離子。1 1硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法 適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞。 破壞后的金屬離子以高價(jià)態(tài)存在。 對含氮雜環(huán)藥物的破壞不夠完全。三經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法2 2硝酸硝酸- -硫酸法硫酸法 適用于大多數(shù)有機(jī)藥物的破壞，但不不適用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞適用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞

4、。 （生成硫酸鹽沉淀） 破壞后的金屬離子以高價(jià)態(tài)存在。硫酸硫酸- -硫酸鹽法硫酸鹽法 常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，得到低價(jià)態(tài)的三價(jià)砷或銻離子。（二）干法破壞（二）干法破壞 - 將有機(jī)物灼燒灰化 適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)藥物及某些不能用硫酸破壞的有機(jī)藥物 不適用于含易揮發(fā)金屬有機(jī)藥物易揮發(fā)金屬有機(jī)藥物的破壞 （砷、汞）（砷、汞） 常加入無水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂助灰化常加入無水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂助灰化 -是一種能將有機(jī)化合物中的待測元素定量定量分解成離子的快速快速有機(jī)破壞方法u 應(yīng)注意的有關(guān)問題應(yīng)注意的有關(guān)問題：氧氣要充足，確保燃燒完全燃燒產(chǎn)生的煙霧應(yīng)被完全定量吸收（三）氧瓶燃燒法三）氧瓶燃燒

5、法 oxygen flask combustion method樣品點(diǎn)燃放入燃燒瓶后，應(yīng)用手按緊瓶塞（最好用少量水封閉瓶口），直到火焰熄滅，以防燃燒產(chǎn)生的熱氣將瓶塞頂動；測定氟化物，應(yīng)用石英燃燒瓶。生成的HF腐蝕玻璃，且與玻璃中的硼生成BF3 (BF3在水溶液中僅部分解離成氟離子，使氟的測定結(jié)果偏低)；燃燒瓶洗凈；防爆。第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法特點(diǎn)定量分析方法特點(diǎn)一容量分析法一容量分析法二光譜分析法二光譜分析法三三色譜分析法色譜分析法一容量分析法一容量分析法1 1方法方法： 2 2關(guān)鍵關(guān)鍵： 準(zhǔn)確地確定等當(dāng)點(diǎn)3 3滴定誤差滴定誤差： 滴定終點(diǎn)與等當(dāng)點(diǎn)之間的誤差 將已知濃度的滴定液由滴定管加到

6、待測藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測藥物按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積，就可以計(jì)算出被測藥物的含量滴定液與被測藥物完全作用，反應(yīng)達(dá)到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)即等當(dāng)點(diǎn)4 4特點(diǎn)特點(diǎn)： 簡便，快速，精密、準(zhǔn)確 專屬性、靈敏度較差 常用于測定高含量或中含量組分 1%以上的含量5 5計(jì)算問題計(jì)算問題u 滴定度滴定度T T： 指每ml某摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的重量 aA + bB cC + dD T = M (b/a) B （mg/ml） M: 滴定液的毫摩爾濃度(mmol/ml)； B: 被測藥物的毫摩爾質(zhì)量(mg/mmol)u 百分含量計(jì)算：百分含量計(jì)算： 直接滴定直接滴定：

7、 含量% = F =滴定液的實(shí)際摩爾濃度/ /滴定液 的規(guī)定摩爾濃度%100WFTV 剩余滴定（做空白實(shí)驗(yàn)）剩余滴定（做空白實(shí)驗(yàn)）： 先加入定量過量的滴定液A,當(dāng)與被測藥物反應(yīng)完全后,再用另一滴定液B回滴剩余的滴定液A 含量% = V0：空白試驗(yàn)消耗滴定液B的體積 VB：樣品測定試驗(yàn)消耗滴定液B的體積%100)(0WFTVVBB二光譜分析法二光譜分析法1 1Lambert-Beer Lambert-Beer 定律定律：摩爾吸收系數(shù) ：百分吸收系數(shù) = (M/10)1cmE%1cmE%（一）（一）UV-UV-VisVis分光光度法分光光度法2 2儀器校正和檢定儀器校正和檢定 n 波長校正：儀器使

8、用前校正n 吸收度準(zhǔn)確度的檢定： 用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定n 雜散光的檢查：3. 3. 對溶劑的要求對溶劑的要求 溶劑在所選波長附近的吸收度應(yīng)不超過一定值 空氣為空白4 4測定法測定法n 核對: 供試品的實(shí)際吸收峰波長是否與藥典給出的波長一致(1nm) 如果不一致，可能與試樣的真?zhèn)?、純度及儀器波長的準(zhǔn)確度有關(guān).n 選擇合適的定量方法測定選擇合適的定量方法測定 校正曲線法 對照法 吸收系數(shù)法: 儀器應(yīng)仔細(xì)校對、檢定 計(jì)算分光光度法n 以配制供試品溶液的同批溶劑為空白1 1特點(diǎn)特點(diǎn)n 應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行 高濃度：產(chǎn)生高濃度：產(chǎn)生內(nèi)濾光效應(yīng)內(nèi)濾光效應(yīng)和和自吸收自吸收現(xiàn)象現(xiàn)象 線

9、性偏離線性偏離內(nèi)濾光效應(yīng)內(nèi)濾光效應(yīng)：溶液中存在能吸收激發(fā)光和：溶液中存在能吸收激發(fā)光和熒光的物質(zhì)，使熒光強(qiáng)度減少。熒光的物質(zhì)，使熒光強(qiáng)度減少。n 干擾多，需做空白試驗(yàn)干擾多，需做空白試驗(yàn)（二）熒光分析法（二）熒光分析法n 校正儀器靈敏度校正儀器靈敏度：供試品對激發(fā)光供試品對激發(fā)光穩(wěn)定穩(wěn)定： 可用樣品的對照品溶液校正可用樣品的對照品溶液校正供試品對激發(fā)光供試品對激發(fā)光不穩(wěn)定不穩(wěn)定： 采用發(fā)射光譜與供試品近似的物質(zhì)校正采用發(fā)射光譜與供試品近似的物質(zhì)校正 藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光-硫酸奎寧的稀硫酸溶液硫酸奎寧的稀硫酸溶液 黃綠色熒光黃綠色熒光-熒光素鈉水溶液熒光素鈉水溶液 紅色熒光紅色熒光-羅丹明羅丹明B

10、B水溶液水溶液2含量測定含量測定 Cx = Cs 0.5-2.0 熒光強(qiáng)度與藥物濃度成正比關(guān)系00FFFFsx00FFFFsx1 1HPLCHPLC法法n最常用固定相： octadecylsilane-bonded silica gel 十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS或C18）n柱溫、檢測器： 室溫、紫外檢測器三三. .色譜分析法色譜分析法n 藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分和檢測器類型不得任意改變外，其余條件如色譜柱內(nèi)經(jīng)、長度、固定相牌號、流動相流速及各組分比例等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體樣品品種及達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)u 色譜柱的理論塔板數(shù)

11、色譜柱的理論塔板數(shù)u 分離度分離度u 重復(fù)性重復(fù)性u 拖尾因子拖尾因子u 色譜柱的理論塔板數(shù)色譜柱的理論塔板數(shù)N = 5.54 (tR/W1/2)2 = 16(t/W)2 改變柱長、內(nèi)徑、固定相牌號、固定相顆粒粒徑等 定量峰與其它峰或內(nèi)標(biāo)峰之間的分離度R應(yīng)大于1.5u 分離度分離度取各品種項(xiàng)下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，其峰面積測量值的RSD不應(yīng)大于2.0%配制相當(dāng)于80%，100%，120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其RSD不應(yīng)大于2.0%u 重復(fù)性重復(fù)性 T = W0.05h / 2A W0.05h ：0.05峰高處的峰寬

12、A：峰前沿與色譜峰頂點(diǎn)至基線的 垂線之間的距離峰高法定量峰高法定量：T應(yīng)在0.95-1.05之間u 拖尾因子拖尾因子n藥物分析中常用的藥物分析中常用的HPLCHPLC定量方法：定量方法：內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)法： 內(nèi)標(biāo)校正曲線法 內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法：對照法 內(nèi)標(biāo)校正因子法外標(biāo)法：外標(biāo)法： 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 外標(biāo)一點(diǎn)法：對照法2 2氣相色譜法氣相色譜法n 藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除 固固定液品種、檢測器類型定液品種、檢測器類型及及特殊指定的色譜特殊指定的色譜柱材料不得任意改變柱材料不得任意改變外，其余條件如色譜柱內(nèi)經(jīng)、長度、載體牌號、載氣流速等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。n系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：同

13、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：同HPLCHPLCn定量方法：定量方法：手動進(jìn)樣：內(nèi)標(biāo)法 消除較大的進(jìn)樣誤差 留針時(shí)間、氣化室高溫自動進(jìn)樣：內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法頂空進(jìn)樣：標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法(內(nèi)加法) 消除基質(zhì)效應(yīng)的影響供試品和對照品處于不完全相同的基質(zhì)中標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法 精密稱取待測成分對照品適量，配制成適當(dāng)濃度的對照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測定主成分含量，再扣除加入的對照品溶液含量，即得供試品溶液中主成分含量。 外標(biāo)法按下述公式進(jìn)行計(jì)算： 加入對照品溶液前、后校正因子應(yīng)相同，即：xxxxisCCCAA1)/(xisxxAACCCx和和Ax：供試品中組分：供試品中組分X的

14、濃度和色譜峰面積；的濃度和色譜峰面積；Cx：所加入的已知濃度的待測組分對照品的：所加入的已知濃度的待測組分對照品的 濃度；濃度；Ais：加入對照品后組分：加入對照品后組分X的色譜峰面積。的色譜峰面積。第三節(jié)第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證驗(yàn)證 需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)限度或定量檢查雜質(zhì)限度或定量檢查原料藥或制劑中有效成分的含量測定原料藥或制劑中有效成分的含量測定制劑中其它成分的含量測定制劑中其它成分的含量測定溶出度、釋放度測定方法溶出度、釋放度測定方法 需驗(yàn)證的內(nèi)容需驗(yàn)證的內(nèi)容：準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 精密度精密度專屬性專屬性 檢測限檢測限定量限定量限 線

15、性線性線性范圍線性范圍 耐用性耐用性一準(zhǔn)確度一準(zhǔn)確度高、中、低三個濃度，每個濃度3份1原料藥： 用已知純度的對照品測定。2 2制劑：制劑： 用含已知量被測物（對照品）的各組分混合物進(jìn)行測定 回收率 若不能得到制劑的全部組分，可向已測定含量的制劑中加入已知量待測物（對照品）進(jìn)行測定。 加樣回收率1表示方法表示方法 標(biāo)準(zhǔn)偏差SD 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 relative standard deviation RSD 即變異系數(shù) coefficient of variation CV二精密度二精密度2. 重復(fù)性重復(fù)性 在相同條件下，由同一個分析人員測定同一種樣品所得結(jié)果的精密度。 日內(nèi)精密度日內(nèi)精密度 測定高

16、、中、低3個不同濃度的樣品，每個濃度測定3-5份樣本。 或一種濃度的溶液連續(xù)測定6次。3中間精密度中間精密度 在同一個實(shí)驗(yàn)室、不同時(shí)間由不同分析人員用不同儀器測定結(jié)果的精密度。 常做日間精密度 由于測定持續(xù)時(shí)間長，往往在同一天內(nèi)不能完成，故樣品測定時(shí)使用的儀器性能、試劑、標(biāo)準(zhǔn)曲線及環(huán)境條件等都可能發(fā)生變化，而使測定結(jié)果發(fā)生變化。重現(xiàn)性重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室，由不同分析人員測定結(jié)果的精密度。 若分析方法作為法定標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)做 指樣品中有其他成分存在其他成分存在時(shí)，分析方法能準(zhǔn)確準(zhǔn)確測定出測定出待測藥物待測藥物的特性 鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定： 均考察專屬性 對鑒別反應(yīng)： 不含被測藥物的樣品，應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)

17、三專屬性三專屬性 對雜質(zhì)檢查和含量測定：對雜質(zhì)檢查和含量測定：待測成分應(yīng)能與其它成分分離給出代表性圖譜，說明專屬性若無雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，可用強(qiáng)光照射、強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸破壞、堿破壞、氧化破高溫、高濕、酸破壞、堿破壞、氧化破壞壞的方法，產(chǎn)生雜質(zhì)和降解產(chǎn)物 指待測物能被檢測出的最低濃度或量。 反映：分析方法與儀器的靈敏度、 儀器的噪音大小、 樣品經(jīng)處理后空白值的高低。 四檢測限四檢測限 limit of detection, LODUV-Vis和熒光分光光度法和熒光分光光度法 做多次空白試驗(yàn)，求背景響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差SD，則: LOD = 3 SD 有時(shí)用校正系數(shù)進(jìn)行校正：UV-Vis： LOD

18、 = f 3 SD = （C樣 / A樣）3 SD熒光分析熒光分析： LOD = f 3 SD = C樣 /（F樣-F空）3 SD2色譜法色譜法 S/N=2或 3時(shí)的對應(yīng)濃度 或注入儀器的量 指待測物能被定量定量測定的最低濃度或量。 能滿足一定準(zhǔn)確度和精密度的要求 S/N = 10時(shí)，待測物濃度或注入儀器的量五定量限五定量限 limit of quantitation, LOQ 在一定濃度范圍內(nèi)，測試結(jié)果與樣品中待測物濃度或量直接呈正比關(guān)系的程度。 UV法：CA 色譜法： CH or A 數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求： 回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。 至少5個點(diǎn)六線性六線性達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性精密度

19、、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。通常指線性范圍七范圍七范圍n 當(dāng)測定條件有小的變動時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度。n 常見變動因素常見變動因素：被測溶液的穩(wěn)定性； 樣品提取次數(shù)、時(shí)間等； HPLC中：流動相組成和pH，色譜柱的廠牌、 批號，柱溫，流動相流速等； GC中：色譜柱的廠牌、批號，固定相和 載體的類型，柱溫等。八耐用性八耐用性n 驗(yàn)證分析方法的具體內(nèi)容 鑒鑒別別 雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查含量測定及含量測定及溶出度測定溶出度測定 定量定量限度限度準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 重復(fù)性重復(fù)性精密度精密度 中間精密度中間精密度* * *專屬性專屬性檢測限檢測限* * *定量限定量限線性線性范圍范

20、圍耐用性耐用性* *已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，則不需* * *視具體情況予以驗(yàn)證第四節(jié)第四節(jié)生物樣品分析概述生物樣品分析概述一常用樣品的種類、采集和貯藏一常用樣品的種類、采集和貯藏二生物樣品分析預(yù)處理技術(shù)二生物樣品分析預(yù)處理技術(shù)三定量分析方法驗(yàn)證三定量分析方法驗(yàn)證常用品種： 血液、尿液、唾液其次： 可用乳汁、淚液、腦脊液、膽汁等。（一）（一）生物樣品生物樣品一常用樣品的種類、采集和貯藏一常用樣品的種類、采集和貯藏 1血樣 血細(xì)胞血漿（plasma）血小板血清（serum）血細(xì)胞測定血樣中平均分布于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的藥濃抗凝自然全血（加抗凝劑）血液采樣與保存 采樣： 保存： 血樣（血漿、血清）及時(shí)分離冷藏或

21、-70，有時(shí)加入穩(wěn)定劑 穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑： 酶抑制劑（NaF、三氯醋酸）， 抗氧劑 解凍方法： 2尿樣 目的：藥物劑量回收，藥物清除率，藥物代謝和生物利用度 特點(diǎn)：濃度高，易于收集，體內(nèi)代謝研究，應(yīng)作水解處理 保存：立即測定（尿中含水、無機(jī)鹽、尿素等）；4保存；放置較長時(shí)間需冷凍；加入防腐劑（1%甲苯；飽和氯仿）或改變pH1、預(yù)處理的目的u存在形式的多樣性： 游離、結(jié)合物、代謝物u濃度低，雜質(zhì)多 u出現(xiàn)渾濁和沉淀u影響色譜柱壽命二生物樣品分析預(yù)處理技術(shù)二生物樣品分析預(yù)處理技術(shù)藥物理化性質(zhì)： pKa 親脂性 揮發(fā)性 溶解度 穩(wěn)定性 光譜特征 與蛋白的結(jié)合程度濃度范圍： 測定目的：定性 定量 母體 代

22、謝生物樣品的種類：樣品處理與分析方法的選擇 專一性 靈敏性2、預(yù)處理方法選擇的一般原則3 3、生物樣品中蛋白質(zhì)的處理、生物樣品中蛋白質(zhì)的處理（1）目的：l 去除蛋白質(zhì)，使結(jié)合型藥物和代謝物釋放出來，便于測定總濃度；l 預(yù)防提取過程中蛋白質(zhì)發(fā)泡，減少乳化的形成；l 保護(hù)儀器性能。（2 2）方法：）方法：l 蛋白質(zhì)沉淀劑法蛋白質(zhì)沉淀劑法 與水相混溶的有機(jī)溶劑與水相混溶的有機(jī)溶劑： 乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，THF 中性鹽中性鹽：飽和硫酸銨，硫酸鈉，磷酸鹽， NaCL ， 枸櫞酸鹽 強(qiáng)酸：強(qiáng)酸： 三氯醋酸，高氯酸，硫酸-鎢酸混合液 含鋅鹽和酮鹽的沉淀劑含鋅鹽和酮鹽的沉淀劑： CuSO4-Na2WO4,

23、 ZnSO4-NaOHl 酶解法酶解法 適用于遇酸不穩(wěn)定及與蛋白質(zhì)結(jié)合牢固的藥物 常用蛋白水解酶中的枯草菌溶素（細(xì)菌性堿性蛋白分解酶）l 微孔濾膜法微孔濾膜法 用于測定樣品中的游離藥物或代謝物游離藥物或代謝物 與蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物不能濾過。4 4、生物樣品中綴合物的水解、生物樣品中綴合物的水解（1）目的：l 使綴合物中的藥物或代謝物游離，便于用有機(jī)溶劑提取l 綴合物的極性較大（2 2）方法）方法 酸水解法酸水解法：鹽酸 酶解法酶解法： -葡萄糖醛酸苷酶， 芳基硫酸酯酶， 二者的混合酶； 溶劑解溶劑解 某些藥物的硫酸酯，往往加入提取溶劑時(shí)發(fā)生分解，同時(shí)提取到有機(jī)溶劑中5 5、生物樣品中藥物或代謝物

24、的萃取、生物樣品中藥物或代謝物的萃取u液液- -液提取液提取l提取率 在有機(jī)相與水相中溶解度的比值；一般少量多次，提取率高 對生物樣品： 樣品量少、樣品數(shù)多、藥物含量低， 一般一次萃?。ㄖ炼鄡纱危?， 提取率一般應(yīng)50% l影響提取率的因素 水相水相pHpH：堿性藥物在堿性pH， 酸性藥物在酸性pH 提取溶劑提取溶劑：相似相溶原理。 沸點(diǎn)低，不影響檢測，性質(zhì)穩(wěn)定，不起化學(xué)反應(yīng) 離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度：加入中性鹽， 增加離子強(qiáng)度，與水結(jié)合強(qiáng)，便于有機(jī)溶劑提取 提取次數(shù)：提取提取次數(shù)：提取- -反提取反提取l離子對提取 適用于離子性特強(qiáng)，水溶性極大的藥物 藥物含陰離子：-COO- -SO3- 離子對試劑：

25、烷基季銨鹽 藥物含陽離子：-NH+ 離子對試劑：烷基或芳基磺酸鹽 l乳化問題預(yù)防措施預(yù)防措施： 輕緩振搖； 不溶物應(yīng)過濾掉 避免在高pH條件下，從水中提取藥物 避免使用易發(fā)生乳化的溶劑對： 如水-苯，水-己烷 萃取前水相中加入少量NaCl l乳化問題破乳方法：破乳方法： 機(jī)械法 加乙醇或少量高級脂肪醇, 改變表面張力 改善混合溶劑比例， 增加分散相的百分?jǐn)?shù)u液液- -固提取固提取l操作步驟：操作步驟：固相柱選擇固相柱選擇： 依據(jù)樣品體積、被測物的量及理化性質(zhì)固相柱處理固相柱處理 反相C18：固定相的6-10倍體積甲醇洗柱，使溶劑化；6-10倍緩沖液沖洗達(dá)分離狀態(tài)上樣上樣分離：分離： 用適當(dāng)?shù)娜?/p>

26、溶劑洗滌洗去雜質(zhì)，通N2干燥固相柱洗脫待測物洗脫待測物： 改變洗脫劑pH或極性l影響液影響液- -固提取的因素固提取的因素流速流速 上樣流速快：按觸不充分，樣品流失, 回收率低裝樣：過載 樣品突破性試驗(yàn)： 一系列體積的已知濃度樣品液上樣，洗脫后，求回收百分率；當(dāng)回收率下降時(shí)為過載。u柱切換HPLC： 兩個泵，預(yù)柱，分析柱u固相微萃取SPME：6、生物樣品中待測組分的濃集 避免直接加熱濃縮7、生物樣品中待測組分的衍生化處理 GC衍生化 HPLC衍生化 生物樣品中藥物和代謝物的定量分析方法： 首先色譜法，內(nèi)標(biāo)法定量 驗(yàn)證的關(guān)鍵： 專屬性、靈敏度三定量分析方法驗(yàn)證三定量分析方法驗(yàn)證 須證明待測物是原形藥物或特定代謝物，且其測定不受其他物質(zhì)的干擾。 需提供的色譜圖: 空白生物樣品 質(zhì)控樣品 用藥后生物樣品1.1.專屬性專屬性或選擇性或選擇性 specificity , selectivityspecificity