1、 明確明確感染感染是否發(fā)生以及是否發(fā)生以及病原體的類型病原體的類型。 提供體外微生物提供體外微生物藥物敏感實驗藥物敏感實驗的結(jié)果。的結(jié)果。 密切監(jiān)視烈性傳染病與新的傳染病的發(fā)生，密切監(jiān)視烈性傳染病與新的傳染病的發(fā)生，及時向行政主管部門報告。及時向行政主管部門報告。 配合相關(guān)機構(gòu)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。配合相關(guān)機構(gòu)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。 本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法二、細(xì)菌耐藥性檢查二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染五、院內(nèi)感染一、一、細(xì)菌細(xì)菌檢驗標(biāo)本采集與送檢的基本原則

2、1.1.注明被檢人姓名、性別、年齡、臨床診斷、標(biāo)本來注明被檢人姓名、性別、年齡、臨床診斷、標(biāo)本來源及檢驗?zāi)康?、抗生素使用情況。源及檢驗?zāi)康摹⒖股厥褂们闆r。2.2.盡量在抗生素盡量在抗生素使用前使用前采集標(biāo)本。采集標(biāo)本。3.3.在采集血液、腦脊液、穿刺液等標(biāo)本時，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)在采集血液、腦脊液、穿刺液等標(biāo)本時，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行行無菌無菌操作，避免雜菌污染。操作，避免雜菌污染。4.4.立即送到實驗室，某些細(xì)菌還應(yīng)注意立即送到實驗室，某些細(xì)菌還應(yīng)注意保溫、保濕保溫、保濕。5.5.盛標(biāo)本容器須經(jīng)盛標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌滅菌處理，勿用處理，勿用消毒劑。消毒劑。 參考P463二、常見標(biāo)本的采集：血液與骨髓二、常見標(biāo)本的

3、采集：血液與骨髓1 1. .采血部位多為采血部位多為肘靜脈肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥物的靜，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采集血標(biāo)本，脈處采集血標(biāo)本，無菌操作無菌操作。 2 2. .每瓶采血量為每瓶采血量為5 510ml10ml左右，左右，培養(yǎng)基與血液之比以培養(yǎng)基與血液之比以10:110:1為宜，為宜，以稀釋血液中的抗生素、抗體等殺菌物質(zhì)。以稀釋血液中的抗生素、抗體等殺菌物質(zhì)。3 3. .選擇寒戰(zhàn)發(fā)熱之初采血。對已用抗菌藥物而又不選擇寒戰(zhàn)發(fā)熱之初采血。對已用抗菌藥物而又不能停藥者，應(yīng)在下次用藥前采血。能停藥者，應(yīng)在下次用藥前采血。4.4.每例建議不同時間不同部位采血每例建議不同時間不同部位采血3 3

4、次，注意區(qū)別次，注意區(qū)別 感染菌和感染菌和皮膚污染菌皮膚污染菌。尿液標(biāo)本的采集尿液標(biāo)本的采集1 1. .中段尿采集：中段尿采集：最常用的方法。采樣前須消毒尿道最常用的方法。采樣前須消毒尿道口將中段或近后段的尿液留于無菌容器中?？趯⒅卸位蚪蠖蔚哪蛞毫粲跓o菌容器中。2.2.導(dǎo)尿管采集尿液：可減少污染，但易引起導(dǎo)尿管采集尿液：可減少污染，但易引起逆行感逆行感染染。不可從集尿袋下端管口留取標(biāo)本。不可從集尿袋下端管口留取標(biāo)本。3 3. .膀胱穿刺采集尿液：病人恥骨上皮膚消毒后，以膀胱穿刺采集尿液：病人恥骨上皮膚消毒后，以無菌針筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液無菌針筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厭氧菌厭氧

5、菌培養(yǎng)或嬰幼兒。培養(yǎng)或嬰幼兒。糞便標(biāo)本的采集糞便標(biāo)本的采集1.挑取有挑取有膿血粘液膿血粘液部分的新鮮糞便約部分的新鮮糞便約2 23 3克盛克盛于滅菌容器中送檢，也可用拭子挑取糞便插于滅菌容器中送檢，也可用拭子挑取糞便插入入Cary-BlairCary-Blair運送培養(yǎng)基中送檢。運送培養(yǎng)基中送檢。2 2. .對不易獲取糞便者，如嬰幼兒可用對不易獲取糞便者，如嬰幼兒可用直腸拭子直腸拭子采集送檢。采集送檢。 呼吸道標(biāo)本的采集呼吸道標(biāo)本的采集1 1. .自然咳痰：自然咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳嗽，從呼吸道清水反復(fù)漱口后用力咳嗽，從呼吸道深深部部咳出咳出, ,以清晨以清晨第一口痰第一口痰為好。為好。2

6、 2. .氣管鏡下采集法、氣管穿刺法：下呼吸道病原學(xué)的氣管鏡下采集法、氣管穿刺法：下呼吸道病原學(xué)的理想標(biāo)本，可減少污染，但病人有一定的痛苦，不理想標(biāo)本，可減少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推廣。易接受和推廣。3 3. .應(yīng)應(yīng)及時及時送檢和處理送檢和處理( (11小時小時) )，放置時間長可導(dǎo)致肺，放置時間長可導(dǎo)致肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌等的檢出率明顯下降。炎鏈球菌，流感嗜血桿菌等的檢出率明顯下降。 腦脊液等無菌體液標(biāo)本的采集腦脊液等無菌體液標(biāo)本的采集1.1.嚴(yán)格嚴(yán)格無菌無菌條件下采集標(biāo)本。條件下采集標(biāo)本。2.2.盡量采集多的標(biāo)本送檢。盡量采集多的標(biāo)本送檢。3.3.盡快送檢或床旁接種可盡快

7、送檢或床旁接種可提高陽性率，特殊標(biāo)本提高陽性率，特殊標(biāo)本需需保溫保溫送檢。如腦膜炎奈瑟菌、送檢。如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等。肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等。其它標(biāo)本的采集其它標(biāo)本的采集( (傷口、燒傷創(chuàng)面、膿腫等傷口、燒傷創(chuàng)面、膿腫等) )1 1. .無菌生理鹽水清洗病灶表面后，用無菌生理鹽水清洗病灶表面后，用無菌拭子無菌拭子取病灶取病灶深部的膿液和分泌物，立即送檢。深部的膿液和分泌物，立即送檢。2 2. .對未潰破的膿腫直接用碘酒、酒精消毒皮膚后，以對未潰破的膿腫直接用碘酒、酒精消毒皮膚后，以無菌注射器抽取膿液無菌注射器抽取膿液送檢，也可以切開排膿時用無送檢，也可以切開排膿時用無

8、菌拭子采樣。菌拭子采樣。3.3.生殖道標(biāo)本包括尿道口分泌物、外陰糜爛物、宮頸生殖道標(biāo)本包括尿道口分泌物、外陰糜爛物、宮頸口分泌物、前列腺液等，應(yīng)注意保溫。口分泌物、前列腺液等，應(yīng)注意保溫。三、檢查方法三、檢查方法1 1. .直接涂片、鏡檢：直接涂片、鏡檢：初步診初步診斷但陽性率低。如抗酸染斷但陽性率低。如抗酸染色找結(jié)核桿菌色找結(jié)核桿菌。陰道毛滴蟲革蘭氏染色2.2.分離、培養(yǎng)、鑒定：分離、培養(yǎng)、鑒定：金標(biāo)準(zhǔn)較費時（金標(biāo)準(zhǔn)較費時（3 3天）天）, ,同時同時可進(jìn)行藥物敏感試驗。可進(jìn)行藥物敏感試驗。3.3.血清學(xué)檢查：血清學(xué)檢查：如肥達(dá)氏試驗、軍團菌抗體檢查等。如肥達(dá)氏試驗、軍團菌抗體檢查等?？贵w檢

9、測應(yīng)進(jìn)行雙份血清檢測，兩次抗體效價相抗體檢測應(yīng)進(jìn)行雙份血清檢測，兩次抗體效價相差差4 4倍以上有現(xiàn)癥診斷價值，但無早期診斷意義。倍以上有現(xiàn)癥診斷價值，但無早期診斷意義。 （但（但I(xiàn)gMIgM有早期診斷意義）有早期診斷意義） 主要內(nèi)容主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法二、細(xì)菌耐藥性檢查二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染五、院內(nèi)感染耐藥性及發(fā)生機制耐藥性及發(fā)生機制 1.1.當(dāng)前臨床分離的常見細(xì)菌當(dāng)前臨床分離的常見細(xì)菌 (1)(1)革蘭陰性菌革蘭陰性菌 大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠大腸

10、埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、陰溝腸桿菌、不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞假單胞菌、陰溝腸桿菌、不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌等，占菌等，占70%70%。 (2)(2)革蘭陽性菌革蘭陽性菌 葡萄球菌、腸球菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌、腸球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌等，占卡他布蘭漢菌等，占30%30%。濫用抗生素的后果耐藥2.2.耐藥機制耐藥機制(1)(1)耐藥基因的整合子系統(tǒng)耐藥基因的整合子系統(tǒng)(2)(2)產(chǎn)生滅活抗生素的水解酶或鈍化酶產(chǎn)生滅活抗生素的水解酶或鈍化酶(3)(3)改變抗生素作用的靶位改變抗生素作用的靶位(4)(4)細(xì)菌膜的外排泵出系統(tǒng)細(xì)菌膜的外排泵出系統(tǒng)(5)(5)生物膜的形成，提高耐藥

11、性生物膜的形成，提高耐藥性3 3、藥物敏感試驗、藥物敏感試驗(1)(1)K-BK-B紙片瓊脂擴散法紙片瓊脂擴散法：最常用，操作相對方便：最常用，操作相對方便(2)(2)稀釋法稀釋法 包括瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法包括瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法 可獲得最小抑菌濃度（可獲得最小抑菌濃度（MICMIC），但較麻煩），但較麻煩(3)(3)E E試驗試驗 ：結(jié)合稀釋法和擴散法，價格昂貴：結(jié)合稀釋法和擴散法，價格昂貴4.4.重點耐藥菌株監(jiān)測試驗重點耐藥菌株監(jiān)測試驗 (1)(1)耐甲氧西林葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌( (MRSMRS) )的篩選的篩選 (2) (2)氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌氨基糖苷類抗生素高耐藥

12、腸球菌 ( (HLARHLAR) )篩選篩選 (3) (3)耐青霉素肺炎鏈球菌耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)(PRSP)篩選篩選 (4) (4)染色體染色體型型-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶AmpCAmpC酶的檢測酶的檢測(5)(5)超廣譜超廣譜內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶( (ESBL)ESBL)檢測檢測5.5.病原菌耐藥基因的檢測病原菌耐藥基因的檢測(1)(1)適全生長緩慢的細(xì)菌如結(jié)核分枝桿菌適全生長緩慢的細(xì)菌如結(jié)核分枝桿菌(2)(2)對病原菌的耐藥具有確證意義對病原菌的耐藥具有確證意義(3)(3)考核其它耐藥性檢查方法的考核其它耐藥性檢查方法的金標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)準(zhǔn), ,可能成為可能成為未來耐藥性檢查的未來耐藥性檢查的主

13、導(dǎo)主導(dǎo)方法。方法。 本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法二、細(xì)菌耐藥性檢查二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染五、院內(nèi)感染一、流行病學(xué)和臨床類型一、流行病學(xué)和臨床類型流行病學(xué)特征流行病學(xué)特征q新的病原體不斷被發(fā)現(xiàn)，如新的病原體不斷被發(fā)現(xiàn)，如SARSSARS病毒、禽流感染病毒、禽流感染病毒等。病毒等。q老傳染病死灰復(fù)燃老傳染病死灰復(fù)燃 如如結(jié)核結(jié)核、梅毒、霍亂等、梅毒、霍亂等 q多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)多重耐藥菌株不斷出現(xiàn) q器官移植、放器官移植、放/ /化療、侵入性醫(yī)療檢查

14、或治療導(dǎo)致化療、侵入性醫(yī)療檢查或治療導(dǎo)致醫(yī)院感染醫(yī)院感染發(fā)生率不斷增加發(fā)生率不斷增加二、檢查項目和臨床應(yīng)用二、檢查項目和臨床應(yīng)用1.細(xì)菌感染：細(xì)菌感染：細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法是最重要的確診方法2.病毒感染：常用病毒感染：常用血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查，如，如HIV3.真菌和寄生蟲感染：形態(tài)學(xué)檢查真菌和寄生蟲感染：形態(tài)學(xué)檢查 本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法一、標(biāo)本采集、運送和檢測方法二、細(xì)菌耐藥性檢查二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染五、院內(nèi)感染病毒性肝炎檢測病毒性肝炎檢測 P452

15、甲型肝炎甲型肝炎( (糞口途徑糞口途徑) )： IgMIgM抗體：抗體：特異性早期診斷指標(biāo)特異性早期診斷指標(biāo), ,提示提示HAVHAV現(xiàn)癥感染現(xiàn)癥感染 IgGIgG抗體：抗體：出現(xiàn)于恢復(fù)期且長期存在出現(xiàn)于恢復(fù)期且長期存在, ,提示既往感染提示既往感染甲、乙、丙、丁、戊、庚、輸血傳播病毒肝炎乙型肝炎乙型肝炎 1.1.最常用的定性檢測最常用的定性檢測 乙肝兩對半乙肝兩對半 常用測定方法：常用測定方法：ELISAELISA法法 2.2.乙肝乙肝DNADNA定量定量PCRPCR檢測：病毒復(fù)制的指標(biāo)檢測：病毒復(fù)制的指標(biāo) 正常正常:HBV DNA10:HBV DNA5mm即為即為陽性陽性2.若若ESBLs

16、陽性陽性,對對青霉素青霉素類、所有頭孢菌素類及類、所有頭孢菌素類及單環(huán)類單環(huán)類抗菌素耐藥抗菌素耐藥 CTXCTX/CACAZCAZ/CA注注:CTX為頭孢噻肟為頭孢噻肟;CTX/CA為頭孢噻肟為頭孢噻肟/棒酸棒酸 CAZ為頭孢他啶為頭孢他啶;CAZ/CA為頭孢他啶為頭孢他啶/棒酸棒酸AmpC酶檢測酶檢測FOXFOX：頭孢西?。侯^孢西丁2. 若若AmpC酶陽性，對青霉酶陽性，對青霉素類、第一、二、三代頭素類、第一、二、三代頭孢菌素、單環(huán)類及頭霉類孢菌素、單環(huán)類及頭霉類抗菌素耐藥抗菌素耐藥乙肝的傳播途徑乙肝的傳播途徑我國我國HBSAg陽性率約為陽性率約為8。經(jīng)血傳播經(jīng)血傳播胎源性傳播胎源性傳播醫(yī)源

17、性傳播醫(yī)源性傳播性接觸傳播性接觸傳播生活密切接觸傳播生活密切接觸傳播(共用剃須刀、牙刷等共用剃須刀、牙刷等) 乙肝兩對半 HBsAgHBsAg：感染感染HBVHBV后后1 12 2月出現(xiàn)，月出現(xiàn)，若急性發(fā)病后若急性發(fā)病后3 3個月個月 不轉(zhuǎn)陰，易轉(zhuǎn)為慢性。是乙肝病毒感染的標(biāo)志。不轉(zhuǎn)陰，易轉(zhuǎn)為慢性。是乙肝病毒感染的標(biāo)志。 HBsAbHBsAb：為為保護(hù)性抗體保護(hù)性抗體，表明患者已產(chǎn)生了一定的免，表明患者已產(chǎn)生了一定的免 疫力。疫力。 HBeAgHBeAg：表明乙肝處于活動期，肝細(xì)胞受損狀態(tài)，有表明乙肝處于活動期，肝細(xì)胞受損狀態(tài)，有 較強傳染性。較強傳染性。HBeAbHBeAb：抗抗-HBe-HBe的出現(xiàn)意味著大部分乙肝病毒被消的出現(xiàn)意味著大部分乙肝病毒被消 除，傳染性顯著降低，病情出現(xiàn)好轉(zhuǎn)。除，傳染性顯著降低，病情出現(xiàn)好轉(zhuǎn)。 HBcAbHBcAb：陽性者代表正在感染或以往感染過乙肝病毒。陽性者代表正在感染或以往感染過乙肝病毒。 HBcAg(核心抗原)存在于肝細(xì)胞內(nèi)，血中不易檢測。當(dāng)