1、分析方法論證項(xiàng)目分析方法論證項(xiàng)目分析方法分析方法分析方法是指進(jìn)行分析的方式，應(yīng)詳細(xì)描述進(jìn)行每個(gè)分析試驗(yàn)所必需的步驟。它包括但不局限于：樣品、參比對照品、試劑的配制、儀器的使用、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、計(jì)算公式的運(yùn)用 等。典型的論證項(xiàng)目典型的論證項(xiàng)目分析方法的目的，因?yàn)檫@將決定需評價(jià)的論證項(xiàng)目。典型的論證項(xiàng)目如下：準(zhǔn)確性 精密度（重復(fù)性 中間精密度）專屬性 檢測限度定量限度 線性范圍各論證項(xiàng)目的定義見后面的術(shù)語表。表中列舉了在不同類型分析方法專屬性專屬性u鑒別u含量測定和雜質(zhì)檢查 可以得到雜質(zhì)的情況 無法得到雜質(zhì)的情況專屬性專屬性專屬性是指在一些可能存在的組分，如雜質(zhì)、降解物、基質(zhì)等存在時(shí)，對被分析物準(zhǔn)

2、確 可靠測定的能力。 一種分析方法缺乏專屬性時(shí)，可由其他輔助的分析方法作補(bǔ)充。 專屬性有以下含義： 鑒別：確證被分析物符合其特性。 純度檢查：確保采用的分析方法可檢出被分析物中雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、溶劑殘留量等。 含量測定(含量或效價(jià))：提供樣品中被分析物的含量或效價(jià)的難確結(jié)果。專屬性專屬性 在鑒別、雜質(zhì)和含量測定的方法學(xué)論證中應(yīng)進(jìn)行專屬性研究，證明專屬性的方法將取決于分析方法的預(yù)期目的。 一般一種分析方法不太可能對某一特定的被分析物具有專屬性(完全鑒定)，在此情況下，建議采用兩種或兩種以上的分析方法以達(dá)到能鑒定的水平。鑒別鑒別 合適的鑒別試驗(yàn)應(yīng)能區(qū)別出可能存在結(jié)構(gòu)相似的化合物。

3、可以通過與已知參比物比較， v 從含有被分析物的樣品中得到的正結(jié)果和不含被分析物的樣品中得到的負(fù)結(jié)果來確定。v 鑒別試驗(yàn)也可以取與被測物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)的物質(zhì)來試驗(yàn)而得不到正反應(yīng)來證實(shí)。 在考慮可能會造成干擾的前提下，應(yīng)根據(jù)合理科學(xué)的判斷來選擇可能存在的干擾物。含量測定和雜質(zhì)檢查含量測定和雜質(zhì)檢查產(chǎn)色譜方法中，應(yīng)用典型的色譜圖來證明專屬性，并在圖上恰當(dāng)?shù)貥?biāo)出每一種成分，其他分離技術(shù)也應(yīng)如此。在色譜方法中，應(yīng)在一等程度上考察關(guān)鍵性的分離。對關(guān)鍵性分離，可用兩個(gè)洗脫程度 最接近的化合物的分離度來證明其專屬性。當(dāng)非專屬性方法測定含量時(shí)，可用其他輔助性的分析方法來證實(shí)整個(gè)方法的專屬性，如： 用滴定法來測

4、定出廠原料藥的含量，可結(jié)合使用和是的雜質(zhì)檢查方法。下述方法均適用于含量測定和雜質(zhì)檢查以得到雜質(zhì)的情況對含量測定來說，專屬性應(yīng)包括提供被分析物在雜質(zhì)和(或)賦形劑存在時(shí)能被區(qū)分的證 明，實(shí)際操作中可以在純物質(zhì)(原料或制劑)中加入一定量的雜質(zhì)或輔料，與未加雜質(zhì)或輔料 的樣品測定結(jié)果相比較，以證明其含量測定結(jié)果不受這些物質(zhì)的影響。對雜質(zhì)檢查采說，通過加入含有一定量雜質(zhì)的原料藥或制劑，證明各雜質(zhì)之間能分離， 并也能與樣品基質(zhì)中其他組分分離。無法得到雜質(zhì)的情況如果雜質(zhì)或降解物的對照品不能得到，專屬性可以通過路含一定量的雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的 樣品測定結(jié)果與另一種成熟的方法測定結(jié)果比較，如藥典方法或經(jīng)論證的其他

5、方法(獨(dú)立的 方法)進(jìn)行比較來證實(shí)。必要時(shí)，應(yīng)包括放置在強(qiáng)力破壞試驗(yàn)條件下，即光、熱、濕度、酸 堿破壞及氧化情況下的樣品的測定。一對于含量測定，需要比較兩種方法的結(jié)果。 一對于雜質(zhì)檢查，要比較雜質(zhì)的概況。 峰的純度試驗(yàn)是很有用的，它顯示被測物色譜峰是單個(gè)還是多個(gè)成分(如二極管陣列、質(zhì)譜)。線性線性線性是在分析方法的范圍內(nèi)(見第 3 節(jié))對方法進(jìn)行評價(jià)?？捎盟ㄗh的分析方法，直接 對原料藥(用標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液稀釋)和(或)對分別稱取制劑組分的混合物進(jìn)行測定，以證明其線 性。線性關(guān)系應(yīng)以信號對被分析物的濃度或含量做圖，根據(jù)圖形是否線性進(jìn)行評價(jià)。如果有 線性關(guān)系，可用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法估算試驗(yàn)結(jié)果，如最小二

6、乘法。在某些情況下為使分析指標(biāo) 和樣品濃度呈線性關(guān)系，在回歸分析前應(yīng)對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。由線性回歸估算所測得 的數(shù)據(jù)本身又有助于數(shù)學(xué)評價(jià)線性的程度。上報(bào)資料中應(yīng)含相關(guān)系數(shù)、y 軸上的截距、回歸線的斜率、剩余方差，還應(yīng)包括數(shù)據(jù)圖 表。另外，分析真值與回歸線的偏差也有助于對線性作評價(jià)。一些分析方法，如免疫測定法，在任何轉(zhuǎn)換后，均不能證明呈線性，在這種情況下，分 析的響應(yīng)值應(yīng)用樣品中被分析物的濃度(含量)的適當(dāng)函數(shù)來表示。為建立線性，建議至少用 5 個(gè)濃度。若用其他方法則應(yīng)證明其合理性。 范圍范圍特定的范圍一般是從線性研究中得到的，它依賴于分析方法應(yīng)用目的。確定范圍的方法 是：樣品中含有被分析物

7、的量在范圍內(nèi)或在范圍末端，該分析方法均能獲得良好的線性、精 密度和準(zhǔn)確性。至少應(yīng)考慮如下最小的規(guī)定范圍： 一對原料藥或成品的含量測定：測試濃度范圍一般應(yīng)在 80一 120內(nèi)。 一對含量均勻度檢查：應(yīng)在測試濃度 70一 130內(nèi)，超出此范圍，應(yīng)有正當(dāng)理由，主要是根據(jù)劑型的特點(diǎn)(如計(jì)量型的吸入劑)。一對于溶出度試驗(yàn)，應(yīng)為規(guī)定范圍的 20，例如：如果是控釋制劑，規(guī)定 1 小時(shí)后達(dá)到 20，24 小時(shí)后為 90以上，它的合理范圍應(yīng)為標(biāo)示量的 0110。對于雜質(zhì)檢查，應(yīng)為雜質(zhì)的報(bào)告水平至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的 120。對已知有異常功效的、有 毒的或有意外藥理作用的雜質(zhì)，其檢測限度和定量限度應(yīng)與該雜質(zhì)必須被限制的水平

8、相當(dāng)。注意：在研制階段進(jìn)行雜質(zhì)檢查方法論證時(shí)，有必要根據(jù)建議(可能)的限度來考慮范圍。 一如果用一個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行含量測定和純度檢查，且僅使用 100的標(biāo)難品，線性范圍應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報(bào)告水平強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含量的 120。準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性分析方法的準(zhǔn)確性指的是真實(shí)值或認(rèn)可的參考值與測量值之間相近程度。準(zhǔn)確性有時(shí)也稱真實(shí)度。含量測定 原料藥、制劑 雜質(zhì)(定量) 申報(bào)數(shù)據(jù)術(shù)語術(shù)語精密度分析方法的精密度指的是規(guī)定條件下對均質(zhì)樣品多次取樣進(jìn)行一系列檢測結(jié)果的接近 程度(離散程度)。 精密度可以從三個(gè)層次考慮：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。精密度考察應(yīng)使用均質(zhì)的、可信的樣品。如果得不到，可用人為配制的樣品或樣品溶液 進(jìn)

9、行研究。分析方法的精密度通常以多次測量結(jié)果的變異性、標(biāo)準(zhǔn)偏差或變異系數(shù)采表達(dá)。復(fù)性重復(fù)性的評價(jià)：(1)在方法的規(guī)定線性范圍內(nèi)至少測定 9 次(如 3 種濃度屑種方法重復(fù)測定 3 次)，或(2)在 100的試驗(yàn)濃度，至少測定 6 次。中間精密度中間精密度的考察程度應(yīng)根據(jù)方法使用的環(huán)境而定，申請者應(yīng)確定隨機(jī)事件對分析方法 精密度的影響。需研究的典型變異包括：日期、分析者、儀器等，沒有必要逐個(gè)考察每個(gè)因 素。鼓勵(lì)使用試驗(yàn)設(shè)計(jì)(矩陣)重現(xiàn)性重現(xiàn)性通過試驗(yàn)室之間的試驗(yàn)來評價(jià)，如果方法需要標(biāo)準(zhǔn)化，如收載到藥典中的方法， 則應(yīng)考慮重現(xiàn)性。這些資料不是申請上市文檔的一部分。申報(bào)數(shù)據(jù)在每一種精密度研究中都必須報(bào)

10、告標(biāo)難差 1 相對標(biāo)難差(變異系數(shù))和置信區(qū)間。術(shù)語術(shù)語重復(fù)性重復(fù)性是指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔的精密度，也稱為間隙測量精密度。中間精密度中間精密度是指試驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如不同日、不同分析者、不同儀器等情況下的精 密度。量現(xiàn)性重現(xiàn)性是指不同實(shí)驗(yàn)室之間的精密度(合作研究，通常用于方法學(xué)的標(biāo)難化)。術(shù)語術(shù)語檢測限度某一分析方法的檢測限度是指樣品中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準(zhǔn) 確定量。定量限度某一分析方法的定量限度是指在合適的難確性和精密度下，能夠定量測定樣品中被分析 物的最低量。它是樣品中含量低的化合物定量測定的參數(shù)，特別適用于雜質(zhì)和(或)降解產(chǎn)物 的測定。線性分析方法

11、的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度(量)成比例關(guān) 系的能力。檢測限度根據(jù)分析方法是采用非儀器分析還是儀器分析可用幾種方法來確定檢測限度，除了下面 所列的方法外其他的方法也可能被接受。根據(jù)直觀評價(jià)直觀評價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 檢測限度的測定是通過對一系列已知濃度分析物的樣品進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確測得被分析物的最小量來建立。根據(jù)信噪比該方法儀適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。 信噪比的測定是通過比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測試信號，確定被分析物可被確切地檢測的最小濃度，當(dāng)信噪比在 3：1 或 2：1 時(shí)的檢測限度通常被接受。根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和

12、斜率檢測限度（DL）表示為：DL=3.3/S：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差 S：校正曲線的斜率斜率 S 可從被分析物的校正曲線來估算，的值可由多種途徑估算。如：根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差通過幾份空白樣品的分析，然后計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差，測出分析背景響應(yīng)值的大小。根據(jù)校正曲線通過對含有 DL 范圍內(nèi)被分析物樣品的分析來研究其標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸線的剩余標(biāo)難差或 回歸線的 y 軸截距標(biāo)準(zhǔn)差都可作為標(biāo)準(zhǔn)差。申報(bào)數(shù)據(jù)必須同時(shí)提供檢測限度和測定檢測限度的方法。如果見是根據(jù)直觀評估或信噪比得來 的，應(yīng)提供相關(guān)的一些色譜圖。如通過計(jì)算或外推法得到檢測限度的估算值，可對一系列接近或等于檢測限度樣品的逐 個(gè)分析來論證這一估算值。定量限度定量

13、限度根據(jù)檢測方法是用非儀器分析還是儀器分析，可用幾種方法采評價(jià)定量檢測限度，除了 下面列出的方法外，其他方法也是可接受的。71 根據(jù)直觀評價(jià)直觀評估既可用于非儀器的分析方法，也可用于儀器分析方法。 定量限度一般通過對一系列含有已知濃度被分析物的樣品分析，在準(zhǔn)確度和精密度都符合要求的情況下，來確定被分析物能被定量測得的最小量。72 根據(jù)信噪比該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。 信噪比的測定是通過比較含有已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測定信號，來建立被測物能夠準(zhǔn)確定量的最小濃度。典型信噪比為 10：1。根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率定量限度(QL)表示九 QL10/S：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差 S：校正

14、曲線的斜率斜率 S 可從被分析物的校正曲線估算，值的估算可由多種途徑得到。如731 根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差分析幾份空白樣品，然后計(jì)算其響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差，即可得出分析背景響應(yīng)的大小。732 根據(jù)校正曲線校正曲線的研究應(yīng)通過對幾份含有QL 水平被分析物的樣品的測試來進(jìn)行。回歸線的剩余標(biāo)準(zhǔn)差或回歸線的y 軸截距標(biāo)準(zhǔn)差都可作為標(biāo)準(zhǔn)差。74 申報(bào)數(shù)據(jù)應(yīng)提供定量限度及其測定方法；可通過分析一系列接近或等于定量限度的樣品來論證這一限度。范圍分析方法的范圍是指樣品中被分析物的較高濃度(量)和較低濃度(量)的一個(gè)區(qū)間，并已證實(shí)在此區(qū)間內(nèi)，該方法具有合適的準(zhǔn)確性、精密度和線性。耐用性分析方法的耐用性是指試驗(yàn)參數(shù)適當(dāng)?shù)匕l(fā)生細(xì)小改變時(shí)，測量保持不受影響的能力，可 用于說明正常使用時(shí)的可靠性。耐用性耐用性在研制階段應(yīng)對耐用性進(jìn)行評估，它取決于所研究的分析方法的類型，并能表明方法參數(shù)在微小變異后分析方法的可靠性。如果測量結(jié)果表明對分析條件的變化是敏感的，那么該分析條件就應(yīng)適當(dāng)控制或在方法中預(yù)先注明。耐用性評估的結(jié)果建立了一系列的系統(tǒng)適用性參數(shù)(如分離度試驗(yàn))，以確保在任何時(shí)候使用該分析方法都是有效的。典型