1、蛋白（血清、尿、腦脊液等）電泳新技術(shù)與臨床應(yīng)用朱立華北京大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100034自從1937年瑞典科學(xué)家Tiselius教授利用U型管建立了移界電泳并用以分離血清蛋白， 而且獲得很好的電泳分析效果以來(lái)，電泳技術(shù)已使與各種體液蛋白質(zhì)（如血清/血漿、尿、 腦脊液等）的研究得到極好的發(fā)展。特別是近30年來(lái)，隨著各種新的電泳技術(shù)的出現(xiàn)，各 種電泳分析儀器與裝置的問(wèn)世，并被引入臨床實(shí)驗(yàn)室，為臨床疾病的診治提供了新的手段， 正發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。1血清蛋白電泳血清（血漿）蛋白是由來(lái)源不同、功能各異的許多蛋白混合組成，可通過(guò)蛋白電泳將 其分類(lèi)，并對(duì)多種疾病進(jìn)行診斷和臨床療效觀察。1.1血清蛋

2、白電泳的方法1.1.1醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現(xiàn)的拖尾現(xiàn)象，且分離速度快，電泳時(shí)間短，加樣體積少至0.1 gl、僅含5gg的蛋 白質(zhì)可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。目前醋酸纖 維素薄膜電泳除采用手工方法外，意大利Interlab公司生產(chǎn)了 Microtech全自動(dòng)電泳系統(tǒng)。 將常規(guī)醋酸纖維素薄膜電泳工作全部自動(dòng)化，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，消除了人 為因素的干擾。1.1.2 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及 其它力的作用使其互相盤(pán)繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝

3、膠。因此該凝膠適合于蛋白 質(zhì)、免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。常用于血清蛋白質(zhì)、LDH、CK等同 工酶的檢測(cè)。目前臨床上常用的自動(dòng)化檢測(cè)方法多采用固相的瓊脂糖凝膠電泳。最常用的儀 器是美國(guó)Helena公司和法國(guó)Sebia公司的自動(dòng)電泳儀。產(chǎn)品化的瓊脂糖凝膠板包含了電泳 緩沖系統(tǒng)，檢測(cè)極為方便。分辨率高，速度快，無(wú)拖尾現(xiàn)象，靈敏度和重復(fù)性都很好。1.2電泳結(jié)果血清蛋白電泳時(shí)，由于各種蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同，在同一pH下所帶電荷量多少有差 異，因而在同一電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不同，在載體上可將蛋白質(zhì)從正極到負(fù)極分離為A1b、 a2、0、Y球蛋白5個(gè)區(qū)帶，有時(shí)還可見(jiàn)到前白蛋白區(qū)帶，P區(qū)帶又可分為01、

4、P2區(qū)帶。從 陽(yáng)極到陰極，電泳區(qū)帶及其主要成分如下：前白蛋白區(qū)：前白蛋白（Pre A）白蛋白區(qū)：白蛋白（Alb）a1球蛋白區(qū)：a1脂蛋白（a1LP）、a1酸性糖蛋白（a1-AG）、a1抗胰蛋白酶（a1-AT）、 a1抗糜蛋白酶（a1-AC）、C1脂酶抑制物（C1 Inh）a1-a2球蛋白區(qū)：GC糖蛋白（GC）、銅藍(lán)蛋白（Cer）a2球蛋白區(qū)：a2巨球蛋白（a2M）、膽堿酯酶（Che）、結(jié)合珠蛋白（Hpt）、a2脂蛋白 （a2LP）01球蛋白區(qū)：0脂蛋白（0LP）、運(yùn)鐵血紅素（HPX）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）、C反應(yīng)蛋白（CRP） 02球蛋白區(qū)：纖維蛋白原（Fibr）、抗凝血酶-III（AT-III、

5、纖溶酶原（PI）、因子B（FB）、補(bǔ)體 C1q、C1r、C1s、C3、C4、C5Y球蛋白區(qū)：免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG、IgM電泳中重要的蛋白質(zhì)前白蛋白 由肝細(xì)胞合成，與白蛋白抗原性一致，分子量小，電荷量大，移動(dòng)速 度最快。部分正常人可出現(xiàn)前白蛋白帶?？膳c甲狀腺素結(jié)合稱(chēng)甲狀腺素結(jié)合性前白蛋白；也 可與維生素A結(jié)合蛋白絡(luò)合，起運(yùn)輸維生素A作用。降低見(jiàn)于嚴(yán)重肝病，營(yíng)養(yǎng)不良。白蛋白由肝細(xì)胞合成，占總蛋白60%左右。降低見(jiàn)于生成減少（肝?。G失過(guò)多（腎?。?、球蛋白合成增加（見(jiàn)后）。a1抗胰蛋白酶 血清中有許多蛋白酶，他們由肝細(xì)胞合成或由損傷的細(xì)胞及感染 的生物病原體釋放。這類(lèi)酶統(tǒng)稱(chēng)為胰

6、蛋白酶類(lèi)酶。同樣機(jī)體為對(duì)抗其異常作用，血清中還存 在抗蛋白酶系統(tǒng)，這些抗酶蛋白90%為位于al球蛋白區(qū)，其余位于a2球蛋白區(qū)。主要作 用：調(diào)節(jié)內(nèi)源性蛋白水解，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，各類(lèi)急性炎癥、感染、 組織損傷、壞死、惡性腫瘤、口服避孕藥時(shí)增高；重癥肝病、遺傳性al抗胰蛋白酶缺乏癥 降低。a2巨球蛋白 血清中最大的非免疫球蛋白，維持膠體體滲透壓，與蛋白酶共價(jià)結(jié) 合使之失活，并促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞吞噬。增加見(jiàn)于腎病綜合征、其他腎病、巨球蛋白血癥、 血色病、肝硬化、口服避孕藥。結(jié)合珠蛋白為a2球蛋白主要成分，肝臟合成，與血紅蛋白結(jié)合。血管內(nèi)溶血時(shí)迅速降低，同時(shí)伴有游離血紅蛋白升高；急性時(shí)

7、相反應(yīng)時(shí)升高。銅藍(lán)蛋白位于a2球蛋白區(qū)，肝臟合成，為銅氧化酶，血清中90%銅與之結(jié)合。肝豆?fàn)詈俗冃詴r(shí)水平下降，伴有尿液和肝活檢銅增加。轉(zhuǎn)鐵蛋白 為主要的P球蛋白，肝臟合成，在組織間轉(zhuǎn)送鐵。缺鐵性貧血、肝細(xì) 胞壞死時(shí)升高；腎病、肝硬化、溶血性貧血、慢性感染、白血病、遺傳性轉(zhuǎn)鐵蛋白缺乏癥時(shí) 減少。血紅素結(jié)合蛋白位于P球蛋白區(qū)，肝細(xì)胞合成，與高鐵血紅素結(jié)合，使帶鐵原子的卟琳不被排泄，保存體內(nèi)鐵。早期溶血時(shí)降低。C反應(yīng)蛋白位于。、Y之間，肝細(xì)胞合成的非抗體免疫性物質(zhì)，激活補(bǔ)體、促進(jìn)白細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和對(duì)細(xì)菌的吞噬、抑制血小板聚集和血塊收縮作用。為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。免疫球蛋白 為多克隆球蛋白，包括IgA、IgD

8、、IgE、IgG、IgM。主要位于Y 區(qū)，IgA常位于p區(qū)或緊隨其后。升高見(jiàn)于各類(lèi)慢性感染、自身免疫病、多發(fā)性骨髓瘤等； 減低見(jiàn)于先天性低或無(wú)Y球蛋白血癥。主要疾病血清蛋白電泳變化表電泳圖形總蛋白白蛋白ala2pY主要疾病低蛋白血癥型IIIIN, fN,III (N)營(yíng)養(yǎng)不良、吸收不良、非選擇性蛋白漏失選擇性蛋白漏失型IIIIffI(N, f)N,I腎病綜合征重癥肝損傷型I ,NIIIIIf重癥肝炎肝硬化型I,N, fIIIpY橋f,ff肝硬化急性炎癥型I ,NN,IfNf ,NN, f急性感染慢性炎癥型I,N, fIfff ,Iff慢性感染、風(fēng)濕病多克隆高球蛋白血I,N, fIfff慢性感染

9、、風(fēng)濕病癥型單克隆高球蛋白血M蛋白峰良、惡性M蛋白血癥型癥、多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病高F脂蛋白血癥型NNfffN高脂血癥妊娠1Iff妊娠無(wú)白蛋白血癥IIIIIINNNN無(wú)白蛋白血癥無(wú)a1球蛋白血癥NINNNa1球蛋白缺乏癥無(wú)8球蛋白血癥N, III8球蛋白缺乏癥無(wú)Y球蛋白血癥IINNNNIIIIgG缺乏癥2 尿蛋白電泳概論腎臟是人體重要的排泄器官。腎單位是腎臟的基本功能單位，兩側(cè)腎臟大約有200萬(wàn)個(gè)腎單位，腎單位由腎小球、小球囊腔、近曲小管、髓祥和遠(yuǎn)曲小管組成。腎小球 為血液濾過(guò)器，每天流經(jīng)血量約1600L，原尿通過(guò)近曲、髓祥和遠(yuǎn)曲小管被重吸收，形成約 12L/24h終尿排至體外。腎小球?yàn)V過(guò)膜分為

10、3層，即內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜、上皮細(xì)胞層。濾 過(guò)膜具有分子大小的孔徑選擇性屏障和電荷選擇性屏障作用?？讖竭x擇性屏障是由濾過(guò)膜的 三層細(xì)胞間縫隙構(gòu)成，其內(nèi)皮細(xì)胞間隙窗直徑40100nm，上皮細(xì)胞伸出許多偽足敷衍于基 底膜上稱(chēng)為足賓(foot process)，兩相鄰足突間的裂隙孔直徑為2550nm。在正常生理?xiàng)l件 下，使中分子以上的蛋白質(zhì)絕大部分不能通過(guò)濾過(guò)膜，少量選擇性被濾過(guò)的微量蛋白又被腎 小管重吸收或分解：正常人尿蛋白含量極微(30mg/24hr)，而微量蛋白中的各組份僅為微克 或毫克水平。2.2腎臟損傷和蛋白尿分類(lèi)在各種致病因子作用后，腎小球?yàn)V過(guò)膜的孔徑屏障和電荷屏障受到不同程度損傷。使 血

11、漿中蛋白質(zhì)經(jīng)腎小球?yàn)V出增加；腎小管受損后，重吸收蛋白質(zhì)減少；腎結(jié)構(gòu)破壞-組織蛋 白釋放增加，均可使尿液中蛋白質(zhì)濃度升高，形成蛋白尿。尿蛋白產(chǎn)生機(jī)制大致可分為腎小 球性、腎小管性、混合性、分泌性和組織性等類(lèi)型，臨床最為常見(jiàn)的是腎小球性、腎小管性 兩種。蛋白尿分類(lèi)如下：2.2.1生理性蛋白尿或無(wú)癥狀性蛋白尿指由于各種體內(nèi)外環(huán)境因素對(duì)機(jī)體的影響而導(dǎo)致的尿蛋白含量增多，主要是由腎小 球?yàn)V過(guò)而未被重吸收的蛋白質(zhì)加上腎或泌尿生殖道分泌的蛋白質(zhì)共同組成，主要成分為白蛋 白?？煞譃楣δ苄缘鞍啄蚣绑w位性蛋白尿。功能性蛋白尿 指機(jī)體由于劇烈運(yùn)動(dòng)、發(fā)熱、低溫刺激、精神緊張、交感神經(jīng) 興奮等所致的暫時(shí)性、輕度的蛋白尿

12、。其形成機(jī)制可能與上述原因造成腎血管痙攣或充血而 使腎小球毛細(xì)血管壁的通透性增加所致。當(dāng)誘發(fā)因素消失，尿蛋白也迅速消失。功能性蛋白 尿的蛋白定性一般不超過(guò)(+)，蛋白定量小于0.5g/24h，多見(jiàn)于青少年。體位性蛋白尿或直立性蛋白尿指由于直立體位或腰部前突時(shí)引起的蛋白尿。其特點(diǎn)為臥床時(shí)尿蛋白定性為陰性，起床活動(dòng)若干時(shí)間后即可出現(xiàn)蛋白尿，尿蛋白定性可達(dá)(2+)甚至(3+)，而平臥后又轉(zhuǎn)成陰性，常見(jiàn)于青少年，可隨年齡增長(zhǎng)而消失。此種蛋白 尿發(fā)生機(jī)制可能與直立時(shí)前突的脊柱壓迫腎靜脈，或直立位時(shí)腎的位置向下移動(dòng)，使腎靜脈 扭曲而致腎臟處于淤血狀態(tài)以及淋巴、血流受阻有關(guān)。2.2.2病理性蛋白尿可分為腎前

13、性、腎性和腎后性蛋白尿。腎前性蛋白尿 多為溢出性蛋白尿，是由于血液流經(jīng)腎臟前的疾病引起。這些 疾病導(dǎo)致血循環(huán)中某些低分子蛋白質(zhì)異常增多，因而腎小球?yàn)V過(guò)亦增加，超過(guò)腎小管閾值， 尿中出現(xiàn)大量低分子量蛋白質(zhì)。如Bens-Jons protein (BJP，本周蛋白)重鏈蛋白或其他免 疫球蛋白的碎片，肌紅蛋白及血紅蛋白等BJP為免疫球蛋白輕鏈，為腫瘤性漿細(xì)胞過(guò)量制 造，其單體和二聚體均可自由通過(guò)腎小球?yàn)V膜，當(dāng)超過(guò)腎小管重吸收極限時(shí)，自尿中排出。 見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤、輕鏈病和原發(fā)性巨球蛋白血癥。肌紅蛋白于骨骼肌嚴(yán)重?fù)p傷或急性大面 積心肌梗死時(shí)出現(xiàn)于尿中，血紅蛋白見(jiàn)于各種原因引起的急性血管內(nèi)溶血病人尿中。

14、2.2.2.2腎性蛋白尿見(jiàn)于腎小球或腎小管疾病，可因炎癥、血管病、中毒等原因引起。腎小球性蛋白尿：因炎癥、免疫等因素的損害，導(dǎo)致腎小球?yàn)V膜損傷，孔徑增大；腎小球毛細(xì)血管壁通 透性增加，腎小球?yàn)V膜各層，特別是足突細(xì)胞層的唾液酸減少或消失，以至靜電屏障作用減 弱。血漿蛋白，其中70%80%是白蛋白大量進(jìn)入Bowman囊，超過(guò)近端腎小管對(duì)蛋白質(zhì)的 重吸收能力所致的蛋白尿。以白蛋白增多為主，02微球蛋白正?；蜉p度增多，尿蛋白含量 常N2g/24h （小兒N40mg/m2/h）。由于腎小球?yàn)V膜病變程度不同而漏出的蛋白質(zhì)分子量也有 相應(yīng)的變化。早期腎小球?yàn)V膜小微孔孔徑擴(kuò)大，中等分子量的蛋白質(zhì)濾出增加，尿中

15、以白蛋 白為主。晚期腎小球?yàn)V膜增厚變性，小微孔減少或消失，大微孔增大增多，大分子蛋白質(zhì)漏 出增加。主要見(jiàn)于各類(lèi)腎小球疾病，如急性腎小球腎炎、腎缺血、缺氧、淤血、淀粉樣變；某 些繼發(fā)性腎臟改變，如血管病變、糖尿病性腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎病。腎小管性蛋白尿因炎癥或中毒引起近曲小管對(duì)低分子量蛋白質(zhì)重吸收功能減退而致的蛋白尿，以0 2-微球蛋白（MW 11.8KD）、a 1-微球蛋白（MW30KD）、視黃醇結(jié)合蛋白（RBP，MW 21KD）、溶菌酶、clara cell蛋白（cc16, MW16KD）等增多為主。單純性腎小管性蛋白尿， 尿蛋白含量較低，一般1g/24h尿（小兒40mg/m2/h）。常見(jiàn)

16、于腎盂腎炎、間質(zhì)性腎炎、腎小管性酸中毒、重金屬汞、鎘、鉍）中毒，應(yīng)用慶大 霉素、多粘菌素B及腎移植術(shù)后發(fā)生排異反應(yīng)等?；旌闲缘鞍啄蛑改I臟病變同時(shí)累及腎小球和腎小管而導(dǎo)致的蛋白尿。如腎小球損傷較輕，以49 萬(wàn)的中分子量蛋白尿?yàn)橹鲿r(shí)，稱(chēng)選擇性蛋白尿。病變加重，大分子量蛋白如IgG、IgA甚至 IgM也漏出時(shí)，則稱(chēng)為非選擇性蛋白尿?？赏ㄟ^(guò)測(cè)定尿中A/G比值粗略地加以鑒別。當(dāng)比 值5時(shí)為選擇性蛋白尿，表示病變不甚嚴(yán)重，此種腎病綜合征對(duì)類(lèi)固醇激素療效好；反之 為非選擇性蛋白尿，尿中低分子量的蛋白質(zhì)和中分子量的白蛋白同時(shí)增多，嚴(yán)重時(shí)還可見(jiàn)到 大分子量免疫球蛋白。見(jiàn)于慢性腎小球腎炎和慢性腎盂腎炎等。組織性蛋

17、白尿正常人腎小管代謝產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，如sIgA和THP等，每日排出量約為20mg。由 于炎癥或藥物等刺激致使腎小管分泌或破壞解離的蛋白質(zhì)增多時(shí)，這類(lèi)蛋白質(zhì)排出增加而形 成組織性蛋白尿。見(jiàn)于腎小管炎癥、中毒等。此類(lèi)蛋白質(zhì)的增加也是疾病狀態(tài)下形成管型 和結(jié)石的條件之一。2.2.2.3腎后性蛋白尿 多為偶然性蛋白尿。原因是尿中混有多量血、膿、粘液等成分而導(dǎo) 致尿蛋白定性陽(yáng)性。主要見(jiàn)于泌尿道炎癥、出血，或陰道分泌物、精液混入尿中，一般不伴 有腎臟本身的損害。2.2.2.4蛋白尿的分類(lèi)還可按尿中蛋白質(zhì)含量多少而分為三類(lèi)輕度蛋白尿，尿蛋白尿含量0.5g/24h，可見(jiàn)于腎小管及腎小球病變的非活動(dòng)期、泌尿系感染

18、、發(fā)熱性疾病等； 中度蛋白尿，尿蛋白含量0.54g/24h，除急、慢性腎小球腎炎外，還見(jiàn)于高血壓腎動(dòng)脈 硬化、間質(zhì)性腎炎及慶大霉素、四環(huán)素、水楊酸鹽等引起的藥物中毒；重度蛋白尿，尿蛋 白含量 4g/24h，主要見(jiàn)于腎病綜合征。以上病理性蛋白尿分類(lèi)是相對(duì)的，當(dāng)病變同時(shí)累及腎小球及腎小管時(shí)，低分子量、 高分子量蛋白均增多，此時(shí)動(dòng)態(tài)觀察24h尿蛋白排出量有助于病程監(jiān)測(cè)及療效判斷。臨床進(jìn)行尿蛋白電泳的主要目的是：（1）確定尿蛋白的來(lái)源，（2）了解腎臟病變 的嚴(yán)重程度（選擇性蛋白尿與非選擇性蛋白尿）。從而有助于診斷和預(yù)后的判斷。2.3尿蛋白電泳的方法醋酸纖維素薄膜電泳以醋纖薄膜為載體，由于各種蛋白質(zhì)等電

19、點(diǎn)不同，在同一 pH下所帶電荷量多少有差異，因而在同一電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不同，在薄膜上可將蛋白質(zhì)分 離為A1b、a2、伙Y球蛋白。它和淀粉膠電泳，瓊脂糖凝膠電泳一樣都不能達(dá)到按分 子量大小分離尿蛋白成分的目的。自動(dòng)化檢測(cè)：意大利Microtech全自動(dòng)電泳系統(tǒng)，樣品不 濃縮，金染色法。凝膠過(guò)濾又稱(chēng)凝膠層析由于尿蛋白分子大小不同，流經(jīng)凝膠速度不一，從而達(dá)到分離效果，但方法繁瑣。二維尿蛋白電泳（Iso Dalt電泳）二維尿蛋白電泳技術(shù)是以聚丙烯酰胺作支持物將尿蛋白先進(jìn)行等電聚焦電泳（isoeletric focusing，Iso），然后在同一膜片上以垂直方向再 進(jìn)行SDS電泳（根據(jù)分子量的單位Dalt

20、ons將SDSPAGE電泳簡(jiǎn)稱(chēng)為Dalt電泳）。 Iso Dalt電泳是根據(jù)蛋白質(zhì)的最重要的兩個(gè)理化特性，等電點(diǎn)（pI）和分子量分離尿蛋白， 因此其分辨比單純SDSPAGE電泳要高得多。尿蛋白經(jīng)二維電泳并染色后呈現(xiàn)尿蛋白圖 譜，尿蛋白可被分離成數(shù)十乃至上百個(gè)位點(diǎn)，如用已知的各種蛋白質(zhì)用Iso Dalt電泳制成標(biāo) 準(zhǔn)圖譜可對(duì)數(shù)十種尿蛋白進(jìn)行鑒定和定量，對(duì)疾病的診斷和預(yù)后的判斷有極高的價(jià)值。但成 本昂貴，不適合常規(guī)使用。十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS） SDS與尿中所有蛋白均 結(jié)合形成帶陰電荷的蛋白質(zhì)-SDS分子，從而消除了蛋白質(zhì)間的電荷差別。然后再進(jìn)行聚丙 烯酰胺凝膠電泳，使尿液中各

21、種蛋白質(zhì)完全依據(jù)分子量大小分成不同區(qū)帶。1972年P(guān)esce 采用SDS成功地鑒別了腎小球與腎小管性蛋白尿，且證明此法分離蛋白尿比Sephadex 凝膠過(guò)濾法分辨率更高。1974年Balunt等證實(shí)了 SDS按分子量大小區(qū)分尿蛋白對(duì)于 區(qū)別生理性、腎小球性、腎小管性及混合性蛋白尿比其他幾種方法都好。目前國(guó)內(nèi)多數(shù)腎臟 病實(shí)驗(yàn)室也將蛋白尿的SDS測(cè)定作為常規(guī)方法用于臨床，但是無(wú)論如何SDS具有其局限性，它操作繁瑣，需要預(yù)濃縮尿液。Le Bricon T等報(bào)道，預(yù)濃縮超過(guò)25倍可導(dǎo) 致染色背景過(guò)深，且可能伴有低分子蛋白質(zhì)的丟失。費(fèi)時(shí)，往往須45天才能報(bào)告結(jié)果，不 適于臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛開(kāi)展。瓊脂糖凝膠高

22、分辨率電泳根據(jù)蛋白質(zhì)帶電荷量來(lái)區(qū)分，白蛋白帶負(fù)電荷最多，因此泳動(dòng)在最靠陽(yáng)極，以后依次為al球蛋白、a2球蛋白、。球蛋白、Y球蛋白。各種球蛋 白含有以下成分：al球蛋白：al微球蛋白（alMG）、al酸性糖蛋白（al-AG）、al抗胰蛋白酶（al-AT） a2球蛋白：a2巨球蛋白（a2M）、結(jié)合珠蛋白（Hpt）、輕鏈 P球蛋白：轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）、P2微球蛋白（B2MG）、輕鏈Y 球蛋白：IgG、IgA、IgM當(dāng)白蛋白多，同時(shí)可見(jiàn)少量的al球蛋白和P球蛋白時(shí)，應(yīng)考慮腎小球性蛋白尿。當(dāng) 白蛋白少，a球蛋白和P球蛋白多，并有彌散的輕鏈時(shí)，應(yīng)考慮腎小管性蛋白尿。如二者均 增加，為非選擇性蛋白尿。該方法不

23、能按分子量大小準(zhǔn)確判定，再加上尿中含有很多可變 因素，可導(dǎo)致某些條帶未必能準(zhǔn)確處在上述相應(yīng)位置上，可能出現(xiàn)漂移，因成本較低，故 此為普查型尿蛋白電泳。如需確診，應(yīng)采用下述兩種確診性方法。美國(guó)Helena全自動(dòng)電泳 系統(tǒng)和法國(guó)Sebia全自動(dòng)電泳系統(tǒng)都有該方法的產(chǎn)品，采用考馬斯亮藍(lán)染色。十二烷基硫酸鈉一瓊脂糖凝膠電泳（SDS-AGE）利用瓊脂糖凝膠的選擇性及多孔 性，又根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量來(lái)予以分離。以尿蛋白中成分最多的A1b為界，比A1b分子量 小的輕鏈雙聚體、a 1微球蛋白、游離輕鏈、RBP、溶菌酶、p 2微球蛋白和比A1b分子量 大的轉(zhuǎn)鐵蛋白、IgG、IgA、結(jié)合珠蛋白、a 2巨球蛋白、Ig

24、M分別在A1b的兩測(cè)。SDS-AGE 可在無(wú)損傷情況下，協(xié)助臨床判斷腎臟損傷的部位。尿蛋白電泳后呈現(xiàn)出中、高分子量蛋白 區(qū)帶主要反映腎小球病變，呈現(xiàn)出低分子量蛋白區(qū)帶可見(jiàn)于腎小管病變或溢出性蛋白尿（如 本周氏蛋白），混合性蛋白尿可見(jiàn)到各種分子量區(qū)帶，顯示腎小球和腎小管均受累及。對(duì)臨 床癥狀不典型的患者及微量蛋白尿患者的診斷及各種腎臟疾病治療過(guò)程中病情的動(dòng)態(tài)分析， 也具有很大價(jià)值。SDS-AGE的一個(gè)重大進(jìn)步即操作簡(jiǎn)便，不需預(yù)先濃縮尿液，且只要3小 時(shí)即可報(bào)告，法國(guó)Sebia全自動(dòng)電泳系統(tǒng)，酸性結(jié)晶紫染色。2.3.7 尿蛋白免疫固定電泳采用免疫固定電泳電泳的原理，在瓊脂糖電泳后，以同一尿樣的第一

25、條區(qū)帶為對(duì)照， 分別對(duì)另4條區(qū)帶加入抗不同分子量marker的單抗（白蛋白/轉(zhuǎn)鐵蛋白、IgG/IgA、IgM/ a 2巨球蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白/。2微球蛋白），如白蛋白/轉(zhuǎn)鐵蛋白區(qū)帶陽(yáng)性，則為腎小球 性蛋白尿；如僅有視黃醇結(jié)合蛋白/0 2微球蛋白小分子量蛋白區(qū)帶陽(yáng)性，為腎小管性蛋白 尿；如中分子（白蛋白/轉(zhuǎn)鐵蛋白）和小分子（視黃醇結(jié)合蛋白/0 2微球蛋白）量蛋白都陽(yáng) 性，則為混合性蛋白尿；如出現(xiàn)大分子量蛋白（IgG/IgA）則為非選擇性蛋白尿，如IgM/ a 2巨球蛋白區(qū)帶陽(yáng)性，則說(shuō)明腎小球損傷極為嚴(yán)重。該方法特異性和靈敏度都很高，但成 本較貴，美國(guó)Helena全自動(dòng)電泳系統(tǒng)，非濃縮尿，氨基黑

26、染色。自動(dòng)化尿蛋白電泳能很好地協(xié)助臨床判斷腎臟的主要損害。通過(guò)光電掃描定量分析， 還能作尿蛋白的選擇程度估計(jì)。其電泳圖譜及掃描圖形可作為資料永載，利于分析比較。 該技術(shù)尚備有完整的定性標(biāo)準(zhǔn)，半定量效果，易于量化，更為客觀，亦便于分析，對(duì)腎臟 疾病的診斷，鑒別診斷，指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后頗有價(jià)值。3腦脊液電泳3.1概述中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)可以產(chǎn)生很強(qiáng)的免疫應(yīng)答，這是某些自身免疫性神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生、 發(fā)展的病理學(xué)基礎(chǔ)。因此腦脊液（CSF）檢驗(yàn)，特別是其中蛋白成分及其含量的檢測(cè)，對(duì)某 些中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、療效觀察和預(yù)后判斷具有重要意義。生理情況下，血液和腦脊液間有血一腦屏障（BBB），對(duì)血液中各種物質(zhì)的

27、通過(guò)具有 選擇性，限制某些物質(zhì)的交換，以保持腦脊液自身的理化特性CSF中免疫球蛋白基本不受 血清免疫球蛋白濃度影響，而主要取決于鞘內(nèi)合成率。當(dāng)腦組織或腦膜有病變時(shí)，脈絡(luò)叢的 通透性增加，血一腦屏障發(fā)生破壞，或自病變組織產(chǎn)生病理性產(chǎn)物進(jìn)入腦脊液，使腦脊液組 份發(fā)生改變。最初的腦脊液常規(guī)只檢測(cè)細(xì)胞數(shù)和蛋白定性，隨后又展開(kāi)了腦脊液生化檢測(cè)糖，氯 化物和蛋白定量。于1948年由Kabat等用免疫化學(xué)方法定量測(cè)定腦脊液免疫球蛋白，發(fā)現(xiàn) 多發(fā)性硬化癥病人腦脊液中Y -球蛋白與總蛋白比值增高。但由于抗血清制備困難，阻礙了 技術(shù)發(fā)展隨著免疫檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，采用瓊脂糖擴(kuò)散靈敏度較差，尤其是含量低微的IgM 基本

28、不能檢出，一般電泳法又不易于檢出寡克隆IgG，免疫比濁法在理論上可達(dá)lug/ml的檢 出限度，但儀器昂貴及其抗血清質(zhì)量是關(guān)鍵。CSF中Y -球蛋白（主要是IgG）病理性增高主要有以下三種情況：中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性合成增加，并不依賴(lài)其血清內(nèi)Ig水平的變化。中樞神經(jīng)系統(tǒng)合 成的免疫球蛋白往往伴隨異質(zhì)性限制，就是這種異質(zhì)性限制構(gòu)成了 CSF電泳模型Y區(qū)帶所 見(jiàn)的寡克隆條帶。血中IgG增高，通過(guò)功能正常的血-腦屏障而致腦脊液丫 -球蛋白增高。 血中正常IgG通過(guò)通透性增高的血-腦屏障而致腦脊液丫 -球蛋白增高。 以上二者不是真正意義上的寡克隆條帶。CSF蛋白濃度升高與許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，一些研究發(fā)

29、現(xiàn)CSF蛋白模式中 的寡克隆區(qū)帶多數(shù)是免疫球蛋白IgG類(lèi)，很少是IgA或IgM。這種寡克隆區(qū)帶常見(jiàn)于多發(fā) 性硬化癥（MS）。90%的MS患者在病變進(jìn)程某一個(gè)時(shí)期可出現(xiàn)寡克隆區(qū)帶，有人測(cè)得，患 者CSF中每日新合成IgG含量明顯增高，與正常組（無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)疾?。┘皩?duì)照組（其它神 經(jīng)系統(tǒng)疾?。┫啾?，均有顯著性差異（PV0.001），支持MS病人中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)局部免疫 活性細(xì)胞分泌大量IgG的論點(diǎn)；但其它一些疾病如神經(jīng)性梅毒、亞急性腦白質(zhì)炎、血管炎、 腦膜炎、腦炎等中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染時(shí)也可能出現(xiàn)寡克隆區(qū)帶，因此，單靠檢測(cè)寡克隆區(qū)帶來(lái) 診斷MS準(zhǔn)確性不高。另有10%的MS病人CSF中無(wú)寡克隆區(qū)帶。許多學(xué)者認(rèn)為同時(shí)檢測(cè) CSF -IgG來(lái)診斷MS或許比單獨(dú)檢測(cè)寡克隆區(qū)帶好?？傊甅S和其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病， 經(jīng)常會(huì)有腦脊液IgG、IgM的升高，說(shuō)明這可能與抗感染和自身抗原的免疫反應(yīng)有關(guān)。在多 發(fā)性