1、第四章 藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證China Pharmaceutical University藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12) 第四章 藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證定量分析樣品前處理方法 定量分析方法特點(diǎn) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證123藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)一、定量分析樣品前處理方法 Pretreatment of sample used in quantitative analysis定量分析樣品前處理方法 概 述12藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)泛影酸碘番酸碘苯酯 概 述藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12) 概 述磺溴酞鈉三氯叔丁醇藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)酒石酸銻

2、鉀富馬酸亞鐵 概 述藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12) 概 述含金屬有機(jī)藥物卡巴胂金屬有機(jī)藥物藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)定量分析樣品前處理方法直接測(cè)定法含金屬或C-M不牢固的有機(jī)金屬經(jīng)水解后測(cè)定法鹵素聯(lián)脂肪碳鏈（溶于適當(dāng)溶劑再水解） 直接回流后測(cè)定 堿化回流后測(cè)定 硫酸水解后測(cè)定經(jīng)氧化還原后測(cè)定法鹵素聯(lián)芳環(huán)牢固（一般用于測(cè)碘） 堿性還原后測(cè)定法如泛影酸 酸性還原后測(cè)定法如碘番酸 利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法:藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法濕法破壞 HNO3-HClO4 HNO3-H2SO4 H2SO4-MSO4 金屬以高價(jià)態(tài)存

3、在干法破壞：無(wú)水碳酸鈉或氧化鎂，注意溫度氧瓶燃燒法藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)空心A.燃燒瓶 B.鉑絲網(wǎng) C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法 E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)氧瓶燃燒法 樣品 吸收液 測(cè)定方法含氟有機(jī)藥物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟藍(lán) 分光光度法含氯有機(jī)藥物 NaOH溶液 銀量法 汞量法 分光法含溴有機(jī)藥物 H2O2-NaOH液 或NaOH液- 銀量法 分光法 硫酸肼飽和液含碘有機(jī)藥物 NaOH

4、液- 銀量法 碘量法 硫酸肼飽和液 汞量法 分光法藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)碘苯酯含量測(cè)定 取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用NaOH T.S. 2ml與H2O 10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密塞，振搖放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約35min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI 2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代硫酸鈉液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO2藥物定量分析與分析方

5、法驗(yàn)證(12)二、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 指導(dǎo)原則 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則 藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則 緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則 微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 目的： 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求 效能指標(biāo)： 評(píng)價(jià)分析方法的尺度 效能指標(biāo)包括: 精密度, 準(zhǔn)確度, 檢測(cè)限,定量限,選擇性, 線性與范圍, 耐用性藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)(1)準(zhǔn)確度（accuracy）： 測(cè)量值與真實(shí)值接近的程度 表 示: 回收率 測(cè)定方法：回收試驗(yàn)

6、 加樣回收試驗(yàn)藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)(2)精密度（precision ）：定 義: 同一樣品多次測(cè)量值之間相互接近的程度表 示：標(biāo)準(zhǔn)偏差(s), 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 重復(fù)性: 同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度中間精密度: 同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度 重現(xiàn)性: 不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)(3)專屬性（specificity）: 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性)。藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)(4) 檢測(cè)限（limit of detection， LOD）： 藥物能被檢出

7、的最低濃度(g/ml) 測(cè) 定: 信噪比法(S:N=3:1)(5) 定量限（1imit of quantitation，LOQ）： 藥物能被定量測(cè)出的最低濃度(g/ml) 測(cè) 定: 信噪比法(S:N=10:1)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 -性能指標(biāo)藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)(6) 線性與范圍（linearity and range）： 待測(cè)物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍 線性關(guān)系：Y=a+bx （r=0.9999) 線性程度：相關(guān)系數(shù) (7) 耐用性（robustness）: 測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響程度 影響因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品

8、牌，柱溫等第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 -性能指標(biāo)藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容：項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定及溶出量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確度精密度重復(fù)性中間精密度 專屬性檢測(cè)限 定量限線性范圍耐用性 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度 如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充 視具體情況予以驗(yàn)證藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)第四節(jié) 生物樣品分析的基本步驟1. 藥物從蛋白結(jié)合或綴合物中釋出 蛋白變性：如應(yīng)用三氯醋酸、HClO4、有機(jī)溶劑(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀 鹽酸水解 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一種細(xì)菌性蛋白分解酶，可在pH 7.011.0使

9、肽鍵降解)藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)定量分析方法的驗(yàn)證 -生物樣品分析（一）特異性內(nèi)源性物質(zhì)不得干擾原藥、代謝物（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線r0.9900，至少5個(gè)濃度，不許外延（三）精密度和準(zhǔn)確度RSD15、20相對(duì)回收率85115（80120）藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)（四）最低定量限LOQ35倍t1/2，或1/101/20倍Cmax（五）樣品穩(wěn)定性室溫、凍融、冰凍長(zhǎng)期（六）提取回收率（絕對(duì)回收率）一般低于100，須穩(wěn)定（七）質(zhì)控樣品已知濃度樣品均勻放入待測(cè)生物樣品序列中，以確保定量測(cè)定的準(zhǔn)確度定量分析方法的驗(yàn)證 -生物樣品分析藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)樣品 固相凈化 及 反相高效液相色譜法測(cè)定血漿中茶堿伍朝筼等 藥學(xué)學(xué)報(bào),1989,24(10):769773藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)血漿樣品 凈化后空白血漿 凈化前空白血漿Column Zorbax C18 5m 2.5cm4.6mm 254nmPrecolumn YWG-ODS 9-11m 54.6mmMobile Phase:甲醇-醋酸鈉(0.05mol/L pH3.0)505012 8 4 0min茶堿咖啡因12 8 4 0min12 8 4 0min藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證(12)50