1、 T/CBJ8101-2019谷物釀造料酒第1號(hào)修改單原標(biāo)準(zhǔn)：6.5 -苯乙醇（高效液相色譜法）6.5.1 原理經(jīng)處理后的料酒樣品，注入到高效液相色譜柱里，根據(jù)色譜柱對(duì)不同組分的吸附能力差異，經(jīng)流動(dòng)相沖洗，由于不同組分在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的組分先后流出色譜柱，經(jīng)紫外檢測(cè)器檢測(cè)，依據(jù)色譜圖中各組分保留值與標(biāo)準(zhǔn)樣品作對(duì)照定性，根據(jù)峰面積，按外標(biāo)法定量。6.5.2 試劑除另有說明外，其余所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682 所規(guī)定的一級(jí)水。6.5.2.1 -苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度不小于99%。6.5.2.2 甲醇：色譜純。6.5.2.3 三氯乙酸。6.5.2.4 乙醇。6.

2、5.3 儀器6.5.3.1 高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器。6.5.3.2 分析天平（精度0.1 mg）。6.5.3.3 渦旋混勻器。6.5.3.4 微孔濾膜：0.22 m。6.5.4 分析步驟6.5.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確稱取-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，用含有10%vol乙醇的水溶液配制成濃度為10g/L的標(biāo)準(zhǔn)品母液，準(zhǔn)確吸取母液進(jìn)行稀釋，使標(biāo)準(zhǔn)液中-苯乙醇濃度分別為：10mg/L、25 mg/L、40mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L。6.5.4.2 樣品的處理：取2 mL樣品于離心機(jī)中，12000 r/min離心2 min，取1 mL上清液與1 mL的10%三氯乙酸溶

3、液混合，渦旋混勻1 min，于4 下靜置4 h，12000 r/min離心10 min，取上清液過0.22 m濾膜后可直接進(jìn)行高效液相色譜的測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算樣品中的-苯乙醇的含量。6.5.5 參考色譜條件6.5.5.1 色譜柱：反相C18色譜柱或等效色譜柱。 6.5.5.2 流動(dòng)相：超純水和甲醇1:1混合后等梯度洗脫。6.5.5.3 流速：1.0 mL/min。6.5.5.4 進(jìn)樣量：5L/次10 L/次。6.5.5.5 檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。6.5.5.6 柱溫：30 。6.5.6 定性根據(jù)-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間，與待測(cè)樣品中的組分進(jìn)行對(duì)比定性。6.5.7 外標(biāo)法定量以

4、-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；將處理后的樣品注入到色譜柱里，測(cè)定樣品中-苯乙醇的峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算料酒中的-苯乙醇濃度。6.5.8 結(jié)果計(jì)算6.5.8.1 樣品中-苯乙醇的濃度，以每升試樣中含有-苯乙醇的毫克數(shù)（mg/L）表示，按式（1）計(jì)算：Xi= ci x F(1)式中：Xi樣品中-苯乙醇的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；ci從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求得的-苯乙醇的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；F樣品稀釋倍數(shù)。6.5.8.2 平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后一位。6.5.9 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值差不超過算術(shù)平均值的

5、5%。修改為：6.8 -苯乙醇（氣相色譜法）6.8.1 原理試樣被氣化后，隨同載氣進(jìn)入色譜柱。利用被測(cè)各組分在氣、液兩相中具有不同的分配系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的組分先后流出色譜柱，進(jìn)入氫火焰檢測(cè)器中被檢測(cè)，依據(jù)色譜圖各組分的保留值與標(biāo)樣作對(duì)照定性；利用峰面積，按內(nèi)標(biāo)法定量。6.8.2 試劑6.8.2.1 乙醇溶液（15%vol): 吸取15mL乙醇（色譜純），加水稀釋至 100mL,搖勻。 6.8.2.2 -苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液 (2%vol):吸取 -苯乙醇（色譜純） 2mL,用乙醇溶液(6.8.2.1)定容至100mL。6.8.2.3 2-乙基正丁酸內(nèi)標(biāo)溶液 (2%vo

6、l)：吸取 2-乙基正 丁酸（色譜純） 2mL,用乙醇溶液 ( 6.8.2.1)定容至100mL。6.8.3 儀器6.8.3.1 氣相色譜儀 ：配有氫火焰離子化檢測(cè)器 ( FID) 。6.8.3.2 微量注射器：2L 。6.8.3.3 毛細(xì)管色譜柱：PEG 20M,柱長(zhǎng) 25m30m,內(nèi)徑0.32mm,或同等分析效果的其他色譜柱。6.8.4 色譜條件載氣：高純氮。汽化室溫度：230。檢測(cè)器溫度：250。柱溫( PEG20M毛細(xì) 管色譜柱)：在50恒溫2min后，以 5/min的升溫速度至 200，繼續(xù)恒溫10 min。載氣、氫氣、空氣的流速：隨儀器而異，應(yīng)通過試驗(yàn)選擇最佳操作流速，使-苯乙醇、

7、內(nèi)標(biāo)峰與酒樣中其他組分峰獲得完全分離。6.8.5 標(biāo)樣 值的測(cè)定吸取-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(6.8.2.2)1mL,移入100mL容量瓶中，加入的內(nèi)標(biāo)溶液(6.8.2.3)1mL,用乙醇溶液(6.8.2.1)定容。此溶液中-苯乙醇和內(nèi)標(biāo)的濃度均為0.02%vol。開啟儀器，待色譜儀基線穩(wěn)定后，用微量注射器進(jìn)樣（進(jìn)樣量隨儀器的靈敏度而定）。記錄-苯乙醇峰和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間及其峰面積。-苯乙醇的相對(duì)校正因子值按式(11)計(jì)算：=.(11)式中： -苯乙醇的相對(duì)校正因子；A1測(cè)定標(biāo)樣值時(shí)，內(nèi)標(biāo)的峰面積；A2測(cè)定標(biāo)樣值時(shí)，-苯乙醇的峰面積；d -苯乙醇的相對(duì)密度；2d內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)密度。1 6.8.6 試樣的測(cè)定取試樣約8mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液( 6.8.2.3)0.1mL,用試樣定容?；靹蚝?，在與測(cè)定值相同的條件下進(jìn)樣。依據(jù)保留時(shí)間確定 -苯乙醇和內(nèi)標(biāo)色譜峰的位置 ，并測(cè)定其面積 ，計(jì)算出試樣中-苯乙醇的含量。6.8.7 計(jì)算試樣中-苯乙醇的含量按式(12)計(jì)算：X = .(12)式中：X試樣中-苯乙醇的含量，單位為毫克每升(