1、細菌生理生化反應(yīng)目的要求 學習并掌握細菌分類鑒定中常用的 生理生化反應(yīng)。實驗原理 細菌的代謝與呼吸，主要取決于酶的催化作用，各種細菌具有不同的酶系統(tǒng)。不同的細菌分解大分子碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪的能力不同，所能發(fā)酵的類型和終產(chǎn)物也不一樣。細菌代謝類型的多樣性，具體表現(xiàn)在生化反應(yīng)多樣性，因此在細菌分類鑒定中，常利用其生理生化反應(yīng)作為重要依據(jù)。糖發(fā)酵試驗 在腸道細菌的鑒定上尤為重要細菌可發(fā)酵的基質(zhì) 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖） 醇（甘露醇） 糖苷（甘油）發(fā)酵后產(chǎn)生的有機酸 乳酸、醋酸、丙酸等發(fā)酵后產(chǎn)生的氣體 甲烷、氫、二氧化碳等葡萄糖發(fā)酵試驗乳糖發(fā)酵試驗 指示劑：溴甲酚紫（變色范圍pH5.2-6.8,

2、 pH6.8紫色）安裝倒立的徳漢氏氏小管（內(nèi)充滿液體）pH5.2, 溶液由清亮紫色變?yōu)闇啙狳S色 乳酸、醋酸、丙酸葡萄糖/乳糖甲烷、氫、二氧化碳徳漢氏小管內(nèi)有氣泡，產(chǎn)氣漂浮乙酰甲基甲醇試驗（V.P.試驗）甲基紅試驗（M.R.試驗）細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖，所產(chǎn)生的丙酮酸，可被進一步代謝。細菌體內(nèi)丙酮酸代謝途徑的不同，可通過V.P. 和M.R. 這一對實驗進行鑒別。 V.P.反應(yīng)陽性途徑：吲哚產(chǎn)生試驗判斷細菌是否（含色氨酸酶）能利用色氨酸。實驗材料1. 大腸桿菌 （Escherichia coli）2. 產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes )3. 普通變形桿菌(Prot

3、eus vulgaris)實驗方法與步驟（一）液體培養(yǎng)基的制備與滅菌 1）蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨 4.0 gNaCl 2.0 gH2O 400 mL 調(diào)pH 7.6，分出2管，然后加0.5ml 1.6 % 溴甲酚紫乙醇溶液,溶液呈淺紫色；分裝到裝有倒立的德漢氏小管的試管中（6管）2）10%葡萄糖溶液，10%乳糖溶液各20ml 112度，30分鐘滅菌 3支德漢氏管中加葡萄糖溶液各1ml 3支德漢氏管中加乳糖溶液各1ml 3）葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基：葡萄糖0.5 g蛋白胨0.5 gK2HPO40.2 gH2O100 mL分裝2管（二）接種培養(yǎng)試驗名稱被接菌種1（管數(shù)）被接菌種2（管數(shù)）對照（管數(shù)）1葡萄糖發(fā)酵 大腸桿菌普通變形桿菌 不接種2乳糖發(fā)酵大腸桿菌普通變形桿菌 不接種3 VP試驗大腸桿菌 產(chǎn)氣腸桿菌4吲哚試驗大腸桿菌 產(chǎn)氣腸桿菌（三）反應(yīng)結(jié)果鑒定 葡萄糖/乳糖發(fā)酵試驗 直接觀察。VP試驗：去塞，加40KOH 10滴，再加等量5%奈酚，用力振蕩，37培養(yǎng)30min，