1、關(guān)于常用化學(xué)藥品檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)儀器的使用第一張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月高效液相色譜儀一、結(jié)構(gòu)示意圖.二、部件介紹一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成?，F(xiàn)在的儀器還一般配置有在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱等。制備型HPLC儀還配備有自動(dòng)餾分收集裝置。第二張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月泵恒壓泵、恒流泵。恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復(fù)泵和隔膜往復(fù)泵。目前應(yīng)用的基本上是柱塞往復(fù)泵。（單元泵、四元泵、高壓二元泵）柱塞往復(fù)泵使用時(shí)的注意事項(xiàng)：1 防止固體微粒進(jìn)入泵體造成磨損。2 流動(dòng)相不應(yīng)含有對(duì)泵體造成腐蝕的化學(xué)物質(zhì)。3 泵空轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞，防止流

2、動(dòng)相跑空。4 壓力過(guò)高會(huì)使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。5 防止流動(dòng)相中析出鹽晶，應(yīng)開(kāi)啟柱塞沖洗功能。第三張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月進(jìn)樣器主要部件為定量環(huán)及六通閥。使用時(shí)應(yīng)注意：1 樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45m濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損2 進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50% 3 每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥，現(xiàn)在大部分進(jìn)樣器能自動(dòng)實(shí)現(xiàn)此功能。部分自動(dòng)進(jìn)樣器還能實(shí)現(xiàn)柱前衍生化等操作。（Agilent）第四張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜柱色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好、分析速度快等。使用色譜柱時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)：1 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震

3、動(dòng)。 2 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然? 一般不能反沖，否則會(huì)迅速降低柱效。4 使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。5 流動(dòng)相應(yīng)先脫氣，避免氣泡進(jìn)入柱體。 6 測(cè)試基質(zhì)復(fù)雜的樣品時(shí)，應(yīng)用保護(hù)柱。7 定期用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除駐留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。8 保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇后塞緊。 第五張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月高效液相色譜的主要類型及其分離原理類型（按固定相分子聚集狀態(tài)和分離機(jī)制分）： 分配色譜(液-液色譜)；吸附色譜(液-固色譜)；離子交換色譜；空間排阻色譜；親和色譜等。一、液-液色譜（一）反相鍵合相色譜 化學(xué)鍵合

4、相：利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面 特點(diǎn)： 不易流失 熱穩(wěn)定性好 化學(xué)性能好 載樣量大 適于梯度洗脫第六張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 1分離機(jī)制：分配 + 吸附疏溶劑理論 流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力越強(qiáng)，作用時(shí)間 ， k，組分tR流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力越弱，作用時(shí)間， k，組分tR2固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，簡(jiǎn)稱ODS ） 3流動(dòng)相：極性大的甲醇-水或乙腈-水 流動(dòng)相極性 固定相極性 （RP） 底劑+ 有機(jī)調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑） 例：水（緩沖鹽溶液） + 甲醇，乙腈，THF第七張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4流動(dòng)相極

5、性與k的關(guān)系： 流動(dòng)相極性，洗脫能力，k，組分tR5出柱順序：極性大的組分先出柱 極性小的組分后出柱6適用：非極性中等極性組分（二）正相鍵合相色譜1分離機(jī)制：溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、 誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力（有分配和吸附兩種說(shuō)法）2固定相：極性大的氰基、氨基、二氨基、芳硝基等鍵合相3流動(dòng)相：極性?。ㄍ琇SC） 底劑 + 有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇第八張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4流動(dòng)相極性與k的關(guān)系： 流動(dòng)相極性，洗脫能力，組分tR，k5出柱順序：結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱極性大的組分后出柱6適用： 氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小）

6、，分離物質(zhì)也相似 氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、酚、羧酸、核苷酸、糖類、氨基酸等（也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分離甾酮、還原糖）第九張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二.液-固色譜法（或液-固吸附色譜法）1.特點(diǎn)：流動(dòng)相為液體，固定相為吸附相。2.分離機(jī)制： Xm + nSa = Xa + nSm K = XaSmn / XmSan3.結(jié)論： 顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對(duì)它的吸附力強(qiáng)，保留值就大。4.作用：a.適用分離相對(duì)分子質(zhì)量中等油性試樣。 b.對(duì)具有不同官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高的選擇性。 缺點(diǎn)：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象。 第十張，PPT

7、共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三.離子交換色譜法 1.分離機(jī)制；離子與離子之間的電荷吸引力 2.適用范圍；凡能在溶劑中電離的物質(zhì)一般均可用該法進(jìn)行分離。 3.交換：KX = - NR4+X-Cl- / - NR4+Cl-X- DX =- NR4+X-/X-= KX- NR4+Cl-/Cl- 4.結(jié)論：a.分配系數(shù)D愈大，表示溶質(zhì)的離子與離子交換劑的相互作用愈強(qiáng)。 b.親合力高的，在柱中保留值就愈大。 5.應(yīng)用：a.分離離子或可離解的化合物。 b.主要用于分析有機(jī)酸、氨基酸、核酸、多肽等。第十一張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月離子對(duì)色譜法 1.特點(diǎn)：分離效能高，分析速度快，操作簡(jiǎn)便. 2

8、.分離機(jī)制：又稱偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測(cè)組分離子與離子對(duì)試劑離子形成中性的離子對(duì)化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。 3.分離過(guò)程： X+水相 + Y水相 X+Y水相 KXY= X+Y 有機(jī)相 / X+ 水相 Y 水相 DX = X+Y 有機(jī)相 / X+水相 = KXY Y 水相 4. a.可用C18、C8等常用色譜柱； b.庚烷磺酸鈉等離子對(duì)試劑價(jià)格貴. 5.應(yīng)用：解決了以往難分離混合物的分離問(wèn)題.主要用于分析離子強(qiáng)度大的酸堿物質(zhì)。（三聚氰胺） 第十二張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月離子對(duì)色譜分離過(guò)程示意圖 第十三張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作

9、于2022年6月四、離子色譜法 1.固定相:離子交換樹(shù)脂，常用苯 乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨 架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、 磺酸基（稱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂）或季 銨基（陰離子交換樹(shù)脂）。 流動(dòng)相:電解質(zhì)溶液 檢測(cè)器:電導(dǎo)檢測(cè)器，安培 主配件：抑制柱 2. 流程圖：fig3-2 3.分類 a.雙柱型：化學(xué)抑制型離子色譜法； b.單柱型：非抑制型，用低電導(dǎo)的洗脫液；第十四張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4.分離機(jī)制 （陰離子為例） 被分離組分在色譜柱上分離原理是樹(shù)脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測(cè)組分的離子進(jìn)行可逆交換，根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離。5.

10、應(yīng)用： 從無(wú)機(jī)和有機(jī)陰離子到金屬陽(yáng)離子，從有機(jī)陽(yáng)離子到糖類、氨基酸、多肽、核酸等均可用該法分析。離子色譜中發(fā)生的基本過(guò)程就是離子交換，因此，離子色譜本質(zhì)上就是離子交換色譜。在離子色譜的基本組成中，重要的和與其他高效液相色譜不同的就是抑制器和電導(dǎo)檢測(cè)器，離子色譜用的泵是PEEK材料襯里的不銹鋼泵。第十五張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月藥典品種應(yīng)用離子色譜法：陽(yáng)離子交換柱山梨醇及制劑甘油果糖氯化鈉注射液甘露醇及制劑利巴韋林及制劑鹽酸二甲雙胍及制劑蘋果酸及制劑富馬酸及制劑陰離子交換柱肝素鈉及制劑帕米磷酸二鈉及制劑氯膦酸二鈉及制劑硫酸軟骨素鈉及制劑色譜柱類型品種個(gè)數(shù)陽(yáng)離子交換柱23個(gè)陰離子交換

11、柱14個(gè)第十六張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月五、空間排阻色譜法 1.固定相：凝膠 2.機(jī)制：類似于分子篩作用，分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流體力學(xué)體積和分子大小有關(guān). 3.分離示意圖，fig3-3 a.排斥極限A點(diǎn); b.全滲透極限B點(diǎn) 相對(duì)分子質(zhì)量介于上述兩個(gè)極限之間的化合物，將按相對(duì)分子質(zhì)量降低的次序被洗脫. 4.常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。 第十七張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月常壓凝膠色譜頭孢尼西鈉頭孢唑肟鈉阿莫西林注射用頭孢尼西鈉注射用頭孢唑肟鈉阿莫西林膠囊頭孢他啶頭孢唑林鈉青霉素V鉀注射用頭孢他定注射用頭孢唑林鈉青霉素V鉀膠囊頭孢

12、曲松鈉頭孢替唑鈉青霉素鈉注射用頭孢曲松鈉注射用頭孢替唑鈉注射用青霉素鈉頭孢呋辛鈉頭孢噻吩鈉青霉素鉀注射用頭孢呋辛鈉注射用頭孢噻吩鈉注射用青霉素鉀頭孢拉定頭孢噻肟鈉苯唑西林鈉頭孢哌酮鈉注射用頭孢噻肟鈉注射用苯唑西林鈉注射用頭孢哌酮鈉阿洛西林鈉美洛西林鈉氯唑西林鈉注射用阿洛西林鈉注射用美洛西林鈉注射用氯唑西林鈉普魯卡因青霉素磺芐西林鈉注射用普魯卡因青霉素注射用磺芐西林鈉2010版藥典二部采用常壓凝膠色譜的品種第十八張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月門冬酰胺酶（埃希）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度門冬酰胺酶（歐文）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用

13、門冬酰胺酶（埃希）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（歐文）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)注射用抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)烏司他丁親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)烏司他丁溶液親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)胰島素親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)中性胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)精蛋白鋅胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)2010版藥典二部采用高效凝膠色譜的品種第十九張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月右旋糖酐20親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右

14、旋糖酐20氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量100010000），有關(guān)物質(zhì)注射用頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠

15、（分子量100010000），有關(guān)物質(zhì)2010版藥典二部采用高效凝膠色譜的品種第二十張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月19世紀(jì)70年代中期，HPLC儀開(kāi)始出現(xiàn)，主要填料：10 m 的無(wú)定型硅膠顆粒。70年代后期，發(fā)展了反相液相色譜。80年代，HPLC 被廣泛應(yīng)用于化合物的分離，主要填料：粒徑為5 10 m 球形硅膠。90年代早期，粒徑為 5 m 的高純硅膠，即所謂的 B 型硅膠被發(fā)展，并成為這個(gè)行業(yè)填料的標(biāo)準(zhǔn)，這種 B 型硅膠含有微量的金屬。90年代后期，為了滿足快速分離的需求，發(fā)展了 3 m 或 3.5 m 的球形硅膠，其作用和性能逐漸的獲得了人們的認(rèn)同和接受。手性色譜柱的開(kāi)發(fā)。21世

16、紀(jì)早期，為適應(yīng)超快速的分離要求，粒徑小于 2 m 的填料被開(kāi)發(fā)出來(lái)，發(fā)展出了整體柱、無(wú)機(jī)和有機(jī)雜化硅膠。目前，市場(chǎng)上流行的分析用的 HPLC 硅膠基質(zhì)填料主要為 B 型硅膠。填料發(fā)展史第二十一張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月無(wú)定形硅膠和鍵合相硅膠示意圖：填料發(fā)展史第二十二張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：液相色譜常用檢測(cè)器光學(xué)檢測(cè)器：紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射（通用型檢測(cè)器）電化學(xué)檢測(cè)器：極譜、庫(kù)侖、安培電學(xué)檢測(cè)器：電導(dǎo)、介電常數(shù)質(zhì)譜檢測(cè)器選擇性檢測(cè)器：靈敏度較高第二十三張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月檢測(cè)器類型品種個(gè)數(shù)紫外檢測(cè)器1333個(gè)蒸發(fā)光散射檢

17、測(cè)器28個(gè)示差檢測(cè)器10個(gè)電導(dǎo)檢測(cè)器5個(gè)2010版藥典二部采用檢測(cè)器情況第二十四張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器優(yōu)點(diǎn)：適用于沒(méi)有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待測(cè)物，使用UV時(shí)靈敏度更低；無(wú)需衍生化而直接測(cè)定，避免了衍生帶來(lái)的誤差。可以應(yīng)用有強(qiáng)紫外吸收的試劑，如氯仿、丙酮等。適用于組分復(fù)雜樣品的分析，可以進(jìn)行梯度洗脫，基線平穩(wěn)。通用型檢測(cè)器，只要待測(cè)物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用。對(duì)不同物質(zhì)，ELSD相應(yīng)因子的變化比其它檢測(cè)器要小得多。對(duì)環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作。沒(méi)有溶劑前緣峰，適用于保留時(shí)間短的物質(zhì)的檢測(cè)。與LC-MS的色譜條件一致，可直接進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換。

18、第二十五張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器影響ELSD響應(yīng)的因素載氣流速、霧化器設(shè)計(jì)與溫度、流動(dòng)相的組成和流速等影響霧化過(guò)程。被分析物的濃度和體積質(zhì)量決定了進(jìn)入光散射池的氣溶膠中的顆粒的直徑。被分析物的折射指數(shù)、光源發(fā)出的光的強(qiáng)度和波長(zhǎng)、光電倍增管的位置等影響散射光強(qiáng)度。光電倍增管的靈敏度和入射光的強(qiáng)度決定了檢測(cè)的效率，反映為實(shí)驗(yàn)者所觀測(cè)的峰面積。第二十六張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2010版藥典二部應(yīng)用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的品種妥布霉素硫酸慶大霉素妥布霉素滴眼液硫酸慶大霉素注射液硫酸妥布霉素注射液硫酸奈替米星硫酸小諾霉素硫酸奈替米星注射液硫酸小諾霉

19、素口服溶液硫酸依替米星硫酸小諾霉素片硫酸依替米星注射液硫酸小諾霉素注射液注射用硫酸依替米星硫酸巴龍霉素硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射用硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射液硫酸鏈霉素硫酸卡那霉素滴眼液注射用硫酸鏈霉素注射用硫酸卡那霉素大豆磷脂硫酸西索米星膽固醇硫酸西索米星注射液蛋黃卵磷脂第二十七張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器圖 硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：65，分流模式） 總雜質(zhì)：5.26%第二十八張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器圖 硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：110，不分流模式）總雜質(zhì)：4.18%第二

20、十九張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月蒸發(fā)光散射檢測(cè)器應(yīng)用要點(diǎn)：謹(jǐn)慎使用，充分優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。企業(yè)質(zhì)控人員和藥檢所人員均需要。漂移管溫度的優(yōu)化：溫度對(duì)響應(yīng)值的影響無(wú)明顯的規(guī)律性。最優(yōu)溫度為在流動(dòng)相基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度。霧化氣流速的優(yōu)化：流速越大，響應(yīng)值越低。最優(yōu)氣體流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生最大檢測(cè)響應(yīng)值的最低氣體流速。第三十張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：示差折光檢測(cè)器原理：連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率來(lái)測(cè)定試樣中各組分濃度。優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測(cè)器缺點(diǎn)：1）對(duì)溫度變化敏感 2）對(duì)溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測(cè) 3）屬于中等靈敏度的檢測(cè)器山

21、梨醇山梨醇注射液甘露醇甘露醇注射液乳果糖口服溶液葡甲胺麥芽糖乳糖倍他環(huán)糊精羥丙基倍他環(huán)糊精第三十一張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜法的應(yīng)用：電導(dǎo)檢測(cè)器原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來(lái)測(cè)定電離物質(zhì)含量。優(yōu)點(diǎn)：對(duì)流動(dòng)相流速和壓力的改變不敏感，可用于梯度洗脫。缺點(diǎn)：對(duì)溫度變化敏感（每升高1度，電導(dǎo)率增加2%-2.5%)。廣泛應(yīng)用于離子色譜。主要用于檢測(cè)水溶性無(wú)機(jī)和有機(jī)離子。帕米膦酸二鈉注射液注射用帕米膦酸二鈉鹽酸頭孢吡肟注射用鹽酸頭孢吡肟氯膦酸二鈉氯膦酸二鈉注射液氯膦酸二鈉膠囊第三十二張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月幾種檢測(cè)器主要特性比較表檢測(cè)器檢測(cè)信號(hào)選擇性流

22、速影響檢出限g/ml梯度洗脫UV吸光度有無(wú)10-10適宜FD熒光強(qiáng)度有無(wú)10-13適宜AD電流有有10-13不宜ELSD散射光強(qiáng)度無(wú)10-9適宜RID折光率無(wú)無(wú)10-7不宜第三十三張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月液相色譜法流動(dòng)相1.重要性：GC載氣僅三四種，要提高柱效選擇性，主要改變固定相的性質(zhì)； LC則不同，當(dāng)固定相選定時(shí)，流動(dòng)相的種類，配比能顯著地影響分離效果，因此流動(dòng)相的選擇很重要。2.選擇流動(dòng)相應(yīng)注意的因素3.溶劑的選擇： a. 依據(jù)：溶劑的極性是重要依據(jù)。 b. 溶劑極性順序，水最大，正已烷最小。 c. 采用多元組合溶劑系統(tǒng)作為流動(dòng)相（底液和洗脫液） d. 根據(jù)不同的方法選擇

23、合適的底液和洗脫液 第三十四張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月具體操作時(shí)還應(yīng)注意的事項(xiàng) 流動(dòng)相濾過(guò)后，注意觀察有無(wú)肉眼能看到的微粒、纖維。有請(qǐng)重新濾過(guò)。 開(kāi)機(jī)后把要用到的管路進(jìn)行purge（脫氣）處理。 增加流速應(yīng)以0.1ml/min的增量逐步進(jìn)行，一般不超過(guò) 0.5ml/min，反之亦然。否則易使柱床下塌。 裝柱時(shí)注意流向，接口處不要留有空隙產(chǎn)生氣泡。 樣品液請(qǐng)注意濾過(guò)后進(jìn)樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。 測(cè)定完畢請(qǐng)用（甲醇：水=10:90）沖柱1小時(shí)，再用（甲醇：水=90:10）沖柱30分鐘，長(zhǎng)時(shí)間不用應(yīng)最后再?zèng)_15分鐘純甲醇。對(duì)于含碳量高、封尾充分的柱，特別注意應(yīng)先用含510%甲醇的水沖

24、洗，再用甲醇沖洗。第三十五張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月重溫一下學(xué)校里學(xué)過(guò)的色譜理論知識(shí)第三十六張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 色譜法中的主要參數(shù)和關(guān)系式分配系數(shù)Kp和容量因子K（1）分配系數(shù)Kp：定溫定壓下物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中的濃度比。 KPAs / Am （s固定相； m流動(dòng)相） （2）容量因子K：分配系數(shù)與兩相體積有關(guān)的參數(shù)，表示溶質(zhì)A在兩相中的質(zhì)量比。 K=mAs / mAm =KPVS/Vm 應(yīng)為110第三十七張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月.5 兩個(gè)組分能完全分開(kāi)第三十八張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）分離度色譜柱的總分離效能指標(biāo) 定義：

25、相鄰兩個(gè)峰的保留值之差與兩峰寬度平均值之比式中：分子反映了溶質(zhì)在兩相中分配行為對(duì)分離的影響，是色譜分離的熱力學(xué)因素。分母反映了動(dòng)態(tài)過(guò)程溶質(zhì)區(qū)帶的擴(kuò)寬對(duì)分離的影響，是 色譜分離的動(dòng)力學(xué)因素。從中得到：兩溶質(zhì)保留時(shí)間相差越大，色譜峰越窄，分 離越好。第三十九張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月a:柱效因子：塔板數(shù)決定，n 越大，柱效越高分離的越好。(色譜柱)分離度與柱效能、選擇性的關(guān)系 b：選擇因子： tR()與tR（1） 相差越大， r2,1越大，分的越好。(樣品)C：容量因子：k大一些對(duì)分析有利; 太大，tR長(zhǎng)；柱容量合適,分的才好。(流動(dòng)相) 一般k 第四十張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于20

26、22年6月色譜法的基本理論 一、塔板理論 色譜技術(shù)發(fā)展的初期，Martin等人把色譜分離過(guò)程比作分餾過(guò)程，并把分餾中的半經(jīng)驗(yàn)理論塔板理論用于色譜分析法。 塔板理論把色譜柱比作一個(gè)分餾塔，假設(shè)柱內(nèi)有n個(gè)塔板，每個(gè)塔板高度稱為理論塔板高度，用H表示，在每個(gè)塔板內(nèi)，試樣各組分在兩相中分配并達(dá)到平衡，最后，揮發(fā)度大的組分和揮發(fā)度小的組分彼此分離，揮發(fā)度大的最先從塔頂（即柱后）逸出。盡管這個(gè)理論并不完全符合色譜柱的分離過(guò)程，色譜分離和一般的分餾塔分離有著重大的差別，但是因?yàn)檫@個(gè)比喻形象簡(jiǎn)明，因此幾十年來(lái)一直沿用。一、塔板理論第四十一張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月塔板理論公式 H=L/n * n

27、 = 5.54 (tR /W h/2)2 =16 (tR/W )2 二、速率理論范第姆特方程 用塔板理論來(lái)說(shuō)明色譜柱內(nèi)各組分的分離過(guò)程并不完全合理，因?yàn)樯V柱內(nèi)并沒(méi)有塔板，當(dāng)同一試樣進(jìn)入同一色譜柱，當(dāng)流動(dòng)相速度變化時(shí)，得到不同的色譜圖。測(cè)得的 n（塔板數(shù)） 和 H（柱效） 也不同，充分說(shuō)明塔板理論不足以說(shuō)明色譜柱的分離過(guò)程。第四十二張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 1956年，荷蘭學(xué)者范第姆特（VanDeomter）提出一個(gè)描述色譜柱分離過(guò)程中復(fù)雜因素使色譜峰變寬而致柱效降低（即：使 H 增大）影響的方程。此方程經(jīng)簡(jiǎn)化后寫為:該式稱為速率方程（范氏方程）。 u為流動(dòng)相線速度cm.s-1

28、，線速度=柱長(zhǎng)/死時(shí)間速率理論范第姆特方程 （1）提出了影響的三項(xiàng)因素：A渦流擴(kuò)散項(xiàng)，B分子擴(kuò)散項(xiàng)， C傳質(zhì)阻力項(xiàng)。（2）在流動(dòng)相流速一定時(shí)，當(dāng)、最小時(shí)，小，n 才最高，柱效高。當(dāng)、最大時(shí)，大，n 才最小，柱效低。第四十三張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）渦流擴(kuò)散項(xiàng)A 在填充色譜柱中，當(dāng)組分隨流動(dòng)相向柱出口遷移時(shí)，流動(dòng)相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動(dòng)方向，使組分分子在前進(jìn)中形成紊亂的類似“渦流”的流動(dòng)，故稱渦流擴(kuò)散。 A2dpA與填充物的平均直徑dp的大小和填充不規(guī)則因子有關(guān)。減?。汗潭ㄏ囝w粒應(yīng)適當(dāng)細(xì)小、填充要均勻。第四十四張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 待測(cè)組分是

29、以“塞子”的形式被流動(dòng)相帶入色譜柱的，在“塞子”前后存在濃度梯度，由濃稀方向擴(kuò)散，產(chǎn)生了縱向擴(kuò)散，使色譜峰展寬。（2）分子擴(kuò)散項(xiàng)B/u（縱向擴(kuò)散項(xiàng)） 由于溶質(zhì)區(qū)帶前后存在著濃度差，因而產(chǎn)生縱向擴(kuò)散使區(qū)帶（色譜峰）擴(kuò)寬。由于分子在液體中的擴(kuò)散速率大約是在氣體中的 1/105，所以該項(xiàng)對(duì)液相色譜來(lái)說(shuō)很小，而對(duì)氣相色譜則很重要。擴(kuò)散的嚴(yán)重與否，關(guān)鍵是取決于流動(dòng)相的線速度。第四十五張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月減小縱向擴(kuò)散項(xiàng)u 采取措施（針對(duì)氣相色譜） 適當(dāng)提高流動(dòng)相流速u，減小保留時(shí)間 用相對(duì)分子質(zhì)量較大的氣體作流動(dòng)相。 B2Dg Dg 適當(dāng)降低柱溫c 。第四十六張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于

30、2022年6月（3）傳質(zhì)阻力項(xiàng)Cu 傳質(zhì)阻力系數(shù) C 包括兩部分， g +Cl兩項(xiàng)組成 Cg 流動(dòng)相傳質(zhì)阻力系數(shù) 組分從流動(dòng)相移動(dòng)到固定相表面進(jìn)行兩相之間的質(zhì)量交換時(shí)所受到的阻力，質(zhì)量交換慢，引起色譜峰變寬。g第四十七張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 Cl 固定相傳質(zhì)阻力系數(shù) 即組分從兩相界面移動(dòng)到固定相內(nèi)部，達(dá)分配平衡后，又返回到兩相界面，在這過(guò)程中所受到的阻力為固定相傳質(zhì)阻力。2組分在固定相中擴(kuò)散系數(shù)固定液膜厚度減小采取措施： 采用粒度小的填充物； Dl越大越好，增加柱溫是提高Dl的方法之一。 第四十八張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月液相色譜條件的試驗(yàn)評(píng)價(jià)基線柱效分離度峰的

31、對(duì)稱性（T、S、AS）結(jié)果的重復(fù)性（RSD）第四十九張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是在正式檢測(cè)之前進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，對(duì)目前實(shí)驗(yàn)條件所產(chǎn)生的分離效果及測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，確認(rèn)儀器狀態(tài)及實(shí)驗(yàn)條件達(dá)到一定要求后才可進(jìn)行有效的測(cè)定。 如系統(tǒng)適用性試驗(yàn)達(dá)不到要求，應(yīng)對(duì)條件進(jìn)行調(diào)整使最終符合要求。 藥典正文給出的條件，在不改變性質(zhì)的基礎(chǔ)上可按具體實(shí)驗(yàn)情況作出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整, 以符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。 代表性質(zhì)的有：色譜柱的填體，流動(dòng)相的成份，檢測(cè)波長(zhǎng)等。 常作出調(diào)整的有：流速，流動(dòng)相中水相與有機(jī)相的配比等。 第五十張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月測(cè)定精度的控制1.儀

32、器狀態(tài)良好, 通過(guò)檢定/校準(zhǔn) a.基線 b.流速穩(wěn)定性 c.最低檢測(cè)限 d.結(jié)果重現(xiàn)性2.色譜柱狀態(tài)良好3.流動(dòng)相的配制 試藥選用化學(xué)純以上, 最好是分析純, 水用重蒸餾水, 有機(jī)溶劑選用符合色譜要求的試劑，流動(dòng)相用前經(jīng)脫氣處理。4.合理設(shè)定參數(shù)；5.符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求；6.溶液配制按容量分析要求, 并注意溶液的穩(wěn)定性；7.用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)儀器最好配有定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣, 沒(méi)有配備的儀器最好選用內(nèi)標(biāo)法；8.適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r(shí)間； 9.其他 開(kāi)頭幾份結(jié)果一般不要；對(duì)供試品色譜圖不完全了解之前應(yīng)先走一份時(shí)間較長(zhǎng)的圖譜；進(jìn)行雙份平行試驗(yàn)。第五十一張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月滴定分析法 滴定分析

33、是化學(xué)分析中的一類重要的分析方法。此類分析方法是將一種已知濃度的液體即滴定溶液用滴定管加到被測(cè)物質(zhì)的溶液中，直到所加滴定液和被測(cè)組分按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止。優(yōu)點(diǎn)：精密度和準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)便，至今仍是組分單一原料藥含量測(cè)定的首選方法；快速經(jīng)濟(jì)、儀器簡(jiǎn)單。缺點(diǎn)：專屬性不足，對(duì)組分較多的制劑，需較繁瑣的前處理，可損失一定的精密度和準(zhǔn)確度。第五十二張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月滴定分析法 滴定分析應(yīng)符合以下條件：-a、反應(yīng)應(yīng)朝一個(gè)方向完全進(jìn)行（完全、99.9%）；-b、反應(yīng)嚴(yán)格按化學(xué)計(jì)量式進(jìn)行；-c、反應(yīng)迅速，必要時(shí)通過(guò)加熱或加催化劑等方法加速反應(yīng)；-d、共存物不得干擾測(cè)定，或能用適當(dāng)方法消除；-e、確定等當(dāng)點(diǎn)的方法簡(jiǎn)單靈敏；-f、標(biāo)化滴定液所用基準(zhǔn)物質(zhì)易得，且符合純度高、組分恒定且與化學(xué)式符合、性質(zhì)穩(wěn)定（標(biāo)化時(shí)無(wú)副反應(yīng)）等。第五十三張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月滴定分析法分類根據(jù)化學(xué)反應(yīng)不同 - 分酸堿滴定、沉淀滴定、絡(luò)合滴定、氧化還原滴定；按滴定方式 - 分直接滴定和剩余滴定（也稱回滴定、間接滴定）。第五十四張，PPT共六十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月滴定分析法操作注意事項(xiàng)滴定液消耗體積：若使用50ml滴定管，最好在3040ml范圍內(nèi)；用25ml滴定管，最好在2025ml范圍內(nèi)，減少讀數(shù)引起得相對(duì)誤差。如