1、HIV、TP、HCV的檢驗(yàn)及意義HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢測(cè)樣本 HIV抗體 酶免-血清/血漿，尿液 快速檢測(cè)-血清/血漿/全血，唾液CD4：抗凝全血病載、基因型、耐藥：血漿 樣本保存抗體檢測(cè)：短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于28， 一周以上應(yīng)存放于-20以下。 篩查陰性樣品，建議至少保存12個(gè)月； 篩查陽(yáng)性樣品，無(wú)論確證結(jié)果如何，均應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年 核酸檢測(cè)：血漿4天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于4，3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于-20以下，3個(gè)月以上應(yīng)置于-70以下。CD4：室溫（1825）保存和運(yùn)輸。要求48小時(shí)內(nèi)染色，染色后6小時(shí)內(nèi)分析；如采血后24小時(shí)內(nèi)染色，可在染色后24小時(shí)內(nèi)分析。 HIV抗體檢測(cè)

2、 篩查試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn) 快速檢測(cè)（RT） 確證試驗(yàn) 免疫印跡試驗(yàn)（WB） 條帶免疫試驗(yàn) 放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA） 免疫熒光試驗(yàn)（IFA） 初篩和復(fù)檢流程 樣品初篩試驗(yàn)篩查試劑陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)確證試驗(yàn)報(bào)告陰性圖1 HIV抗體篩查檢測(cè)流程確證流程 質(zhì)量控制 試劑盒內(nèi)部對(duì)照 ：按照試劑盒要求設(shè)置使用室內(nèi)質(zhì)控品：外購(gòu)、陽(yáng)性對(duì)照/樣本稀釋ELISA檢測(cè) 20次內(nèi)即刻法質(zhì)控 20次后， Levey-Jennings質(zhì)控圖 更換試劑廠家必須重新制作質(zhì)控圖，

3、同種試劑不同批號(hào)可繼續(xù)使用（注明批號(hào)） 發(fā)現(xiàn)失控、位移及時(shí)查找原因，必要時(shí)重新開(kāi)始質(zhì)控快速檢測(cè) 更換批號(hào)進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)證 注意反應(yīng)時(shí)間、溫度、數(shù)量控制設(shè)備檢定、維護(hù)強(qiáng)檢設(shè)備 酶標(biāo)儀、移液器、高壓鍋、溫度計(jì)（可自行比對(duì)）自行維護(hù) 生物安全柜、洗板機(jī)、洗眼器、水平（梅毒）旋轉(zhuǎn)儀溫度控制 冰箱、溫箱/水浴箱內(nèi)放置經(jīng)檢定（比對(duì)）的溫度計(jì)高壓滅菌放置指示卡洗眼器定期進(jìn)行維護(hù)SOP文件（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運(yùn)輸；（2）檢測(cè)方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)；（5）質(zhì)量控制要求及程序；（6）結(jié)果解釋與報(bào)告；（7）保密程序；（8）實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；（9）不確定

4、樣品追蹤和處理；（10）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒。 實(shí)驗(yàn)室記錄檢測(cè)登記表試驗(yàn)原始記錄（ ELISA、快速、RPR/TURST ）報(bào)告單/化驗(yàn)單 復(fù)檢化驗(yàn)單篩查陽(yáng)性填寫，信息收集完整儀器使用、維護(hù)保養(yǎng)記錄質(zhì)控資料消毒記錄廢棄物處理登記冰箱溫度記錄人員健康檔案（體檢、疫苗接種記錄，化驗(yàn)單、體檢報(bào)告） 實(shí)驗(yàn)室生物安全 實(shí)驗(yàn)室：級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2） 建立安全制度：S-SOP、意外事故處理預(yù)案、信息安全及保密制度培訓(xùn)和管理：全員培訓(xùn)、標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)原則個(gè)人防護(hù)：防護(hù)用品與設(shè)施、健康監(jiān)護(hù)安全操作：樣品采集與管理、儀器設(shè)備使用、利器使用消費(fèi)與污物處理 梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)梅毒螺旋體-梅毒的病原體

5、分類：螺旋體目（Spirochaetales）螺旋體科（Spirochaetaceae）密螺旋體屬（Treponema）蒼白螺旋體種（Treponema pallidum）分幾個(gè)亞種梅毒螺旋體（TP）小而纖細(xì)的螺旋狀微生物長(zhǎng)520m，粗細(xì)4年雖已無(wú)性傳播，但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒,病期越長(zhǎng)，傳染性越小; 常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法病原學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測(cè)。方法：（1）暗視顯微鏡檢查 （2）鍍銀

6、染色法 （3）核酸檢測(cè)（血液標(biāo)本？）注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒(méi)有獲得成功，僅能通過(guò)接種兔睪丸等部位進(jìn)行有限增殖。 病原學(xué)檢查的臨床意義螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對(duì)于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見(jiàn)到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （非特異性梅毒抗體）(2) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）兩類方法。問(wèn)題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測(cè)方法？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對(duì)螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異

7、性抗體）。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長(zhǎng)期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。問(wèn)題： 臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么需要做定性和定量?jī)煞N檢測(cè)方法？ 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn) (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST） （3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn) (VDRL)等?；境煞质切牧字?卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見(jiàn)上述方法的敏感性和特異性都基本相似非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速？轉(zhuǎn)幅？ 2、定性試驗(yàn)加

8、樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果？滴/mL，1滴=？ul非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅 2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果60滴/mL，1滴=17ul100r/min約18mm非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水

9、（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開(kāi)加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512定量試驗(yàn)結(jié)果判斷血清稀釋度結(jié)果？1:21:41:81:16+-？+-？+-？問(wèn)題：定量試驗(yàn)原倍血清滴度是多少？問(wèn)題：定量試驗(yàn)血清稀釋需要使用試管嗎？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開(kāi)加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。1:11:21:41:81:161:321:641

10、:2561:1281:512定量試驗(yàn)結(jié)果判斷血清稀釋度結(jié)果1:11:21:41:81:16+-1:1+-1:2+-1:8TRUST 1:16非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷RPR 1:2561:11:21:41:81:161:11:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:321:641:1281:2561:512非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽(yáng)性。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清

11、試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。梅毒病期敏感性(%)特異性(%)一期86（77-99）-二期100隱性98(95-100)（一般滴度1:8，但不排除95%補(bǔ)充試驗(yàn)陽(yáng)性）。 b.所有篩查試驗(yàn)陽(yáng)性標(biāo)本，均進(jìn)行RIBA；或先作HCV RNA檢測(cè)，陰性標(biāo)本再測(cè)RIBA補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)： 免疫印跡試驗(yàn) HCV RNA檢測(cè)HCV抗體的檢測(cè)方法篩查試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 膠體金快速試驗(yàn) 化學(xué)發(fā)光試驗(yàn) 免疫熒光試驗(yàn)臨床診斷相關(guān)的監(jiān)測(cè)策略和結(jié)果報(bào)告 1.篩查試驗(yàn) 初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)，不能出具陽(yáng)性報(bào)告，必須進(jìn)入復(fù)檢程序

12、，用原有試劑雙孔或原有試劑加另一種不同原理（或廠家）試劑進(jìn)行復(fù)檢篩查試劑樣品陰性反應(yīng)初篩試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)均陰性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陽(yáng)性反應(yīng)補(bǔ)充試驗(yàn)原有試劑雙孔或原有試劑加另一種不同原理（或廠家）試劑報(bào)告陰性HCV臨床診斷篩查檢測(cè)流程樣品初篩試驗(yàn)篩查試劑陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)確證試驗(yàn)報(bào)告陰性HIV抗體篩查檢測(cè)流程復(fù)檢陽(yáng)性反應(yīng)樣品陽(yáng)性反應(yīng)免疫印跡試驗(yàn)陰性反應(yīng)報(bào)告陰性HCV補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（1）、（3）不確定核酸檢測(cè)陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)報(bào)告不確定報(bào)告陽(yáng)性2.復(fù)檢呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)。臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)

13、檢測(cè)流程（2） 僅限于檢測(cè)方法/試劑給出了特定的閾值（與免疫印跡法比較，其陽(yáng)性預(yù)測(cè)值不低于95%）時(shí)使用。一般采用S/CO比值。說(shuō)明書(shū)中會(huì)給出此值。檢測(cè)結(jié)果的解釋（1）檢測(cè)結(jié)果的解釋（2）Se %Sp %PPV %NPV %漏檢率%誤診率%不做補(bǔ)充試驗(yàn)85.6988.5792.4579.4914.0411.43做補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)96.4910093.2293.943.510補(bǔ)充試驗(yàn)策略檢測(cè)指標(biāo)的價(jià)值為了出具真實(shí)可靠的臨床診斷報(bào)告，補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)還是非常有必要進(jìn)行的。關(guān)于HCV抗原HCV抗原檢測(cè)是近幾年快速發(fā)展起來(lái)的一種新的檢測(cè)HCV指標(biāo)，與HCV RNA檢測(cè)相平行。 定量檢測(cè)可用于療效評(píng)價(jià)與預(yù)后判斷HCV感染窗口期免疫功能受損或缺陷的群體未發(fā)生HCV血清陽(yáng)轉(zhuǎn)（如HIV感染者、長(zhǎng)期透析的腎病患者