1、寧波市刑事科學(xué)技術(shù)研究所作業(yè)指導(dǎo)書文件編號NBIFS-320-027頁 號第 PAGE 3 頁 共 NUMPAGES 3 頁版 次第1版 第0次修改標題ABI-9700 型擴增儀的驗證批 準 人葉成立發(fā)布日期2009年5月1日PAGE 11 適用范圍該方法適用于9700型擴增儀的有效性驗證。本方法介紹的有效性驗證方法，是通過將特定擴增儀（以下稱待驗證儀器）與已進行檢定的同類擴增儀（以下稱已檢儀器）進行比對來實現(xiàn)的。2 原理通過設(shè)定，9700型擴增儀能夠進行不同的“溫度-時間”循環(huán)模式，結(jié)合特定的分子生物學(xué)試劑，可以完成不同的PCR（Polymerase Chain Reaction）反應(yīng)以及以

2、PCR為基礎(chǔ)的STR檢驗。3 器材和試劑3.1.1 臺式離心機3.1.2 擴增儀3.1.3 超凈工作臺3.1.4 遺傳分析儀3.1.5 加樣器3.2 試劑3.2.1 Identifiler 試劑盒3.2.2 GeneScan-500 LIZ3.2.3 Hi-Di Formamide3.2.4 超純水4 操作步驟4.1 擴增反應(yīng)4.1.1 取出凍藏的擴增試劑置于室溫解凍，輕彈混勻，離心。4.1.2 按照下表比例混合反應(yīng)液。反應(yīng)體系反應(yīng)體系需要量緩沖液42.0 l引物22.0 lTaq Gold酶2.0 l（1u）9947A(0.1ng/ul)22.0 l超純水22.0 l4.1.3 將混合好的各

3、種成份振蕩、離心。4.1.4 向每個反應(yīng)管內(nèi)分裝混合液10.0 ul，共分裝10個反應(yīng)管。4.1.5 將反應(yīng)管分別放入兩臺擴增儀（待驗證儀器和已檢儀器）中，按預(yù)先設(shè)定的程序運行：95 11min 1 cycle 94 1min 59 1min 28cycles 72 1min 60 60min 1 cycle 25 kept forever4.1.6 擴增完畢后立即檢測或?qū)a(chǎn)物置于4保存。4.2 電泳檢測按照“NBIFS-320-023熒光STR復(fù)合擴增產(chǎn)物檢測方法”中的步驟進行檢測。4.3 分析結(jié)果4.3.1 按照“NBIFS-320-030 DNA檢驗結(jié)果的分析”中的步驟進行分析。4.3.2 比較待驗證儀器和已檢儀器的檢驗結(jié)果圖譜，如對應(yīng)產(chǎn)物的RFU 值偏差10%，則待驗證儀器通過驗證；如對應(yīng)產(chǎn)物的RFU值偏差10%，則待驗證儀器未通過驗證。5 注意事項5.1放入待驗證儀器和已檢儀器中的反應(yīng)管必須分別放在擴增儀加熱塊的四角及中間部分，孔位可以隨機選定，兩臺儀器中的孔位必須一一對應(yīng)。6相關(guān)文件6.1法庭科學(xué)DNA實驗室規(guī)范 GA/T382-20026.2法庭科學(xué)DNA實驗室檢驗規(guī)范 GA/T383-20027相關(guān)記錄7