1、分享醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)九陰真經(jīng)以下內(nèi)容需要威望達(dá)到2才可以瀏覽，如何獲得威望？請(qǐng)見(jiàn)【站務(wù)公告】板置頂貼：如何獲取我的第一分威望值第一章第八章 基因genes：基因是負(fù)責(zé)編碼RNA或一條多肽鏈DNA片段，包括編碼序列、編碼序列外的側(cè)翼序列及插入序列。是決定遺傳性狀的功能單位。結(jié)構(gòu)基因structure genes：基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列稱為結(jié)構(gòu)基因。基因組genome：一個(gè)細(xì)胞或病毒的全部遺傳信軸息。（細(xì)胞或生物體的一套軸完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總耀和。）真核生物基因組是指耀一套完整單倍體DNA（染耀色體DNA）和線粒體DN耀A的全部序列，包括編碼序耀列和非編碼序列。GT-A耀G法則：真

2、核生物基因的外汛顯子與內(nèi)含子接頭處都有一汛段高度保守的一致性序列，汛即：內(nèi)含子5端大多數(shù)是汛以GT開(kāi)始，3端大多是汛以AG結(jié)束。端粒：以線性汛染色體形式存在的真核基因許組DNA末端都有一種特殊許的結(jié)構(gòu)叫端粒。該結(jié)構(gòu)是一許段DNA序列和蛋白質(zhì)形成許的一種復(fù)合體，僅在真核細(xì)許胞染色體末端存在。端粒D許NA由重復(fù)序列組成，人類(lèi)許端粒一端是TTAGGG另噓一端是AATCCC.操縱映子：是指數(shù)個(gè)功能上相關(guān)的映結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成映信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控映區(qū)（包括啟動(dòng)子和操縱基因映）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)映所構(gòu)成的基因表達(dá)單位。所映轉(zhuǎn)錄的RNA為多順?lè)醋?。再操縱元件：是一段能夠被不再同基因表達(dá)調(diào)控蛋

3、白質(zhì)識(shí)別再和結(jié)合的DNA序列，是決再定基因表達(dá)效率的關(guān)鍵元件再。順式作用元件：是指那些翼與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、翼能夠被基因調(diào)控蛋白特異性翼識(shí)別和結(jié)合的特異DNA序翼列。包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)翼子元件、增強(qiáng)子、反應(yīng)元件翼和poly(A)加尾信號(hào)翼。反式作用因子：是指真核翼細(xì)胞內(nèi)含有的大量可以通過(guò)政直接或間接結(jié)合順式作用元政件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋政白質(zhì)因子。啟動(dòng)子：是能夠政被RNA聚合酶特異性識(shí)別政并與其結(jié)合并開(kāi)始轉(zhuǎn)錄的核政苷酸序列。（TATAbo茵x、CAATbox、GC茵box）增強(qiáng)子enhan茵cer：是一段短的DNA茵序列，其中含有多個(gè)作用元茵件，可以特異性地與轉(zhuǎn)錄因脂子結(jié)合，增強(qiáng)基因的

4、轉(zhuǎn)錄活脂性。它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄脂基因的上游或下游，也可相脂距靶基因較遠(yuǎn)。多順?lè)醋觤脂RNA(polycist脂ronic mRNA)即勇每一個(gè)mRNA分子帶有幾勇鐘蛋白質(zhì)的遺傳信息（來(lái)自勇幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因），利用共同勇的啟動(dòng)子及終止信號(hào)，組成勇“操縱子”的基因表達(dá)調(diào)控勇單元。病毒基因組的特點(diǎn)：園一、：種類(lèi)單一；病毒的核園酸通常是DNA分子或者是園RNA分子。二：RNA病噓毒基因組有單、雙鏈和正、噓負(fù)鏈之分。根據(jù)是否可以作噓為mRNA模板，指導(dǎo)蛋白噓質(zhì)合成，分成正鏈RNA病噓毒和負(fù)鏈RNA病毒兩大類(lèi)噓。1、單股正鏈RNA病毒隅基因組可以作為mRNA行隅使模板功能：病毒顆粒中的隅RNA進(jìn)入宿主細(xì)胞后

5、，可隅直接作為mRNA，翻譯出隅所編碼的蛋白質(zhì)，包括衣殼隅蛋白和病毒的RNA聚合酶妖。然后再病毒RNA聚合酶妖的作用下以病毒基因組RN妖A為模板合成出負(fù)鏈，在以妖負(fù)鏈為模板復(fù)制病毒RNA妖，并以復(fù)制的病毒RNA和倦衣殼蛋白自我裝配成為成熟倦的病毒顆粒。這些病毒稱為倦單股正鏈RNA病毒。2單倦股負(fù)鏈RNA病毒需要先合倦成與其互補(bǔ)的MRNA：先倦以病毒基因組RNA為模板濺轉(zhuǎn)錄生成互補(bǔ)RNA，再以濺這個(gè)互補(bǔ)RNA作為mRN濺A翻譯出遺傳密碼所決定的濺蛋白質(zhì)。3、雙鏈RNA病濺毒基因組含有正、負(fù)兩條R跟NA鏈。4、部分RNA病跟毒基因組可以被反轉(zhuǎn)錄為D跟NA：有一類(lèi)特殊的單股正跟鏈RNA病毒，即逆轉(zhuǎn)錄

6、病跟毒，在這些病毒顆粒中帶有跟依賴RNA的DNA聚合酶落，即逆轉(zhuǎn)錄酶，能使RNA簍反向轉(zhuǎn)錄生成DNA。逆轉(zhuǎn)適錄病毒基因組一般包括三個(gè)適基本的結(jié)構(gòu)基因，即：ga適g,pol,env，分別適編碼核心蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶和適膜蛋白。三、DNA病毒基適因組有環(huán)狀DNA分子和線適性DNA分子。四、其他：稍形式多樣、大小不一、基因稍重疊；、動(dòng)物/細(xì)菌病毒與稍真核/原核基因相似：內(nèi)含稍子；具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因稍；基因編碼區(qū)無(wú)間隔：通過(guò)稍宿主及病毒本身酶切；無(wú)帽稍狀結(jié)構(gòu)；結(jié)構(gòu)基因沒(méi)有翻譯稍起始序列。原核基因組的特惋點(diǎn)：一、原核生物基因組通惋常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA惋分子組成；二、操縱子結(jié)構(gòu)惋是原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特

7、惋點(diǎn)之一：原核生物的絕大多惋數(shù)結(jié)構(gòu)基因按功能相關(guān)性成惋簇地串聯(lián)排列與染色體上，惋構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的確調(diào)控區(qū)（包括啟動(dòng)子和操縱確基因）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止確信號(hào)構(gòu)成一個(gè)基因表達(dá)單位確，即操縱子結(jié)構(gòu)。一個(gè)操縱確子只含一個(gè)啟動(dòng)序列和數(shù)個(gè)確可轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)基因。在同一確個(gè)啟動(dòng)序列控制下，操縱子確可轉(zhuǎn)錄出多順?lè)醋觤RNA確。三、基因密度非常高，基確因組序列中編碼區(qū)所占的比慫例較大?？杀磉_(dá)基因約50慫%，大于真核生物小于病毒慫。重復(fù)序列很少。四、在原慫核生物基因組中的非編碼區(qū)慫內(nèi)主要是一些調(diào)控序列。五慫、基因一般是連續(xù)的，無(wú)內(nèi)慫含子；六、細(xì)菌基因組中的慫可移動(dòng)成分能產(chǎn)生轉(zhuǎn)座現(xiàn)象慫。轉(zhuǎn)座因子的類(lèi)別和遺傳效渦

8、應(yīng)：細(xì)菌基因組中的可移動(dòng)渦成分能產(chǎn)生轉(zhuǎn)座現(xiàn)象。1、渦原核生物轉(zhuǎn)座因子可以分為渦：插入序列、轉(zhuǎn)座子、Mu渦噬菌體。2、轉(zhuǎn)座因子的幾渦個(gè)遺傳效應(yīng)。轉(zhuǎn)座因子的碌轉(zhuǎn)座不是本身的移動(dòng)，而是碌由轉(zhuǎn)座因子復(fù)制出一個(gè)新的碌拷貝轉(zhuǎn)移到基因組中的新位碌置上去。新的轉(zhuǎn)座因子轉(zhuǎn)碌到靶點(diǎn)后，靶點(diǎn)序列會(huì)倍增碌為兩個(gè)靶點(diǎn)序列，并分別排碌列在轉(zhuǎn)座因子的兩側(cè)，形成碌同向重復(fù)序列。在轉(zhuǎn)座過(guò)碌程中能夠形成共同體。轉(zhuǎn)涼座因子轉(zhuǎn)座后能促使染色體涼畸變。轉(zhuǎn)座因子可以從原涼來(lái)的位置上切除，這個(gè)過(guò)程涼成為切離。轉(zhuǎn)座可引起插涼入突變。給受體基因組增涼添了新的標(biāo)志基因。真核基題因組的特點(diǎn)：真核生物基題因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組題，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)

9、龐大，題具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；基因題組由染色體DNA和染色體題外DNA組成。真核基因題為單順?lè)醋?，而?xì)菌和病毒題的結(jié)構(gòu)基因多為多順?lè)醋?；題基因組中非編碼區(qū)多于編獵碼區(qū)；真核基因多為不連獵續(xù)的斷裂基因，由外顯子和獵內(nèi)含子鑲嵌而成；存在大獵量的重復(fù)序列；功能相關(guān)獵的基因構(gòu)成各種基因家族；獵還存在一些假基因存在可獵移動(dòng)的遺傳因素；體細(xì)胞獵為雙倍體，而精子和卵子為獵單倍體。轉(zhuǎn)座子（tran情sposon,Tn）這是情一類(lèi)長(zhǎng)度在200020情000bp之間較大的轉(zhuǎn)座情因子，如Tn1681 T情n420.它們除了帶有與情轉(zhuǎn)座有關(guān)的基因以外，還帶情有其他基因，如Tn903楞Tn5帶有卡那霉素抗藥楞基因等。質(zhì)粒p

10、lasmi楞d:是存在于細(xì)菌染色楞體外的、具有自主復(fù)制能力楞的環(huán)狀雙鏈DNA分子。衛(wèi)妹星DNA：是出現(xiàn)在非編碼妹區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。其特點(diǎn)妹是具有固定的重復(fù)單位，該妹重復(fù)單位首尾相連形成重復(fù)妹序列片段，通常存在于間隔妹DNA和內(nèi)含子中。串聯(lián)重轄復(fù)序列是形成衛(wèi)星DNA的轄基礎(chǔ)。分類(lèi)：大衛(wèi)星DNA轄、小衛(wèi)星DNA、微衛(wèi)星D轄NA?；匚慕Y(jié)構(gòu)：在DNA轄鏈上，兩個(gè)拷貝反向串聯(lián)在轄一起，中間沒(méi)有間隔序列。盆RFLP：即限制性片段長(zhǎng)盆度多態(tài)性，個(gè)體之間DNA盆的核苷酸序列存在差異，稱盆為DNA多態(tài)性。由于堿基盆組成的變化而改變了限制性盆內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，從而導(dǎo)傘致相應(yīng)的限制性片段的長(zhǎng)度傘和數(shù)量發(fā)生變化，稱為

11、RF傘LP。多基因家族mult傘igene family傘：核苷酸序列或編碼產(chǎn)物的傘結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的尿基因，其編碼產(chǎn)物常具有相尿似的功能。假基因pseu尿dogene與某些有功能尿的基因結(jié)構(gòu)相似，但不能表尿達(dá)基因產(chǎn)物的基因。引起D線NA損傷的因素及機(jī)制：線1、紫外線引起DNA損傷線：形成胸腺嘧啶二聚體線引起DNA之間的交聯(lián)、D聯(lián)NA與蛋白質(zhì)的交聯(lián)、甚至聯(lián)DNA鏈的斷裂。2、電力聯(lián)輻射引起DNA損傷：可薯導(dǎo)致堿基變化：由.OH自薯由基引起，包括DNA鏈上唁的堿基氧化修飾、過(guò)氧化物唁的形成、堿基環(huán)的破壞和脫唁落等可導(dǎo)致脫氧核糖的變唁化：脫氧核糖分解，最后可唁引起DNA鏈斷裂。可導(dǎo)唁致DNA

12、斷裂：使脫氧核糖唁破壞或磷酸二酯鍵斷開(kāi)。氈引起DNA鏈交聯(lián)：包括D氈NA-DNA鏈間鏈內(nèi)交聯(lián)氈和DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)。3氈、烷化劑引起DNA損傷：氈烷化劑導(dǎo)致堿基烷基化州烷化劑導(dǎo)致堿基脫落烷化州劑導(dǎo)致DNA斷鏈烷化劑州導(dǎo)致DNA鏈交聯(lián)4、堿基州類(lèi)似物、修飾劑引起堿基對(duì)州的改變5、其他因素：丫啶州類(lèi)化合物引起堿基插入和堿職基缺失；氧自由基。6、D職NA也會(huì)產(chǎn)生自發(fā)性損傷：職DNA復(fù)制時(shí)產(chǎn)生堿基錯(cuò)職配；DNA修復(fù)使產(chǎn)生堿職基錯(cuò)配；堿基自發(fā)改變導(dǎo)漁致DNA損傷：互變異構(gòu)位漁導(dǎo)致DNA突變；脫氨基作漁用導(dǎo)致DNA突變；堿基丟漁失導(dǎo)致DNA突變。DNA漁損傷（突變）可分為：鏈內(nèi)瑤共價(jià)交聯(lián)、鏈間共價(jià)交聯(lián)、瑤

13、DNA鏈斷裂、堿基突變（瑤轉(zhuǎn)換和顛換）、插入或缺失瑤、DNA重組等。DNA損瑤傷修復(fù)機(jī)制：1、某些DN再A損傷可以直接修復(fù)：DN再A斷裂口可以直接修復(fù)；二再聚體可被光復(fù)活酶直接修復(fù)再；烷基化堿基可以直接修復(fù)再。2、切除修復(fù)是細(xì)胞內(nèi)最再普遍的修復(fù)方式：過(guò)程識(shí)再別：DNA特異內(nèi)切酶或糖再苷酶識(shí)別DNA損傷位點(diǎn)；峙切除：在損傷位點(diǎn)的5峙上游切斷DNA鏈，沿5峙-3方向逐步切除DNA峙損傷部分合成：DNA聚峙合酶在缺口處催化DNA合峙成并沿5-3方向延伸峙連接：在DNA連接酶的芝作用下，新合成的DNA片芝段與原來(lái)的DNA鏈連接。芝切除修復(fù)可分為單個(gè)核苷酸芝切除修復(fù)和核苷酸片段切除芝修復(fù)。3、重組修復(fù)是

14、DN芝A損傷較多時(shí)的修復(fù)方式4芝、SOS修復(fù)是DNA損傷酗嚴(yán)重時(shí)的應(yīng)急性修復(fù)方式。酗5、細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制是酗真核生物誘導(dǎo)修復(fù)的主要機(jī)酗制基因表達(dá)：是指生物基因酗組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳酗信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系酗列過(guò)程，合成特定的蛋白質(zhì)酗，進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)隱功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過(guò)程隱。因子依賴性和非依賴性隱兩種機(jī)制介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的終止：隱1、不依賴因子的終止子隱有兩個(gè)重要特征：一個(gè)反隱向重復(fù)序列，使RNA末端沾形成一個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)在信息沾鏈上有一連串的T，因而R沾NA末端發(fā)夾結(jié)構(gòu)之后緊接沾著出現(xiàn)一串U，RNA/D沾NA雜交分子的rU-dA沾堿基對(duì)結(jié)合力較弱，當(dāng)發(fā)夾沾結(jié)構(gòu)形成時(shí)，RNA聚合酶沾停止

15、移動(dòng)，RNA鏈從DN沾A上脫落。2、有一些基吵因的RNA轉(zhuǎn)錄終止階段依吵賴因子。當(dāng)RNA聚合酶吵移動(dòng)至終止子部位時(shí)，因吵子與其結(jié)合，并發(fā)揮ATP吵酶和解鏈酶活性，使RNA疆與DNA分離，轉(zhuǎn)錄過(guò)程終檔止。原核生物的tRNA轉(zhuǎn)檔錄后的加工：1、剪切作用檔將多順?lè)醋映跫?jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物分檔離并切除多余序列；2、有檔些tRNA分子在3端需堤要修復(fù)或添加CCA序列；搞3、通過(guò)某些堿基的化學(xué)修搞飾在tRNA分子中形成希搞有堿基。蛋白質(zhì)編碼區(qū)（開(kāi)搞放閱讀框ORF）:在mR搞NA的核苷酸序列中，有一搞段序列是一個(gè)特定蛋白質(zhì)多搞肽鏈的序列信息，這一段核渾苷酸序列從起始密碼子開(kāi)始渾、倒終止密碼子結(jié)束，稱為渾蛋白質(zhì)編碼區(qū)或

16、開(kāi)放閱讀框渾，此段核苷酸序列決定蛋白渾質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。SD序列：渾mRNA起始密碼子AUG渾上游813個(gè)堿基處存在稱的一段特定的核苷酸序列，稱該序列稱為SD序列，是m稱RNA的起始密碼子之所以稱能與小亞基定位結(jié)合的關(guān)鍵稱。SD序列與小亞基中16稱SrRNA3端的序列互稱補(bǔ)，當(dāng)mRNA與小亞基結(jié)漢合時(shí)，SD序列與16Sr漢RNA3端的互補(bǔ)序列配漢對(duì)結(jié)合，使起始密碼子定位漢于翻譯起始部位。真核生物漢mRNA的加工：1、甲基揪化鳥(niǎo)苷酸以5端磷酸基團(tuán)揪連接mRNA5端形成帽揪子結(jié)構(gòu)。2、多聚腺苷酸的揪加入形成mRNA的3尾揪。3、mRNA前體經(jīng)剪接揪過(guò)程除去內(nèi)含子序列。4、錦mRNA分子中的少數(shù)堿基錦可

17、被甲基化。5、RNA編錦輯：是通過(guò)對(duì)mRNA的加錦工使遺傳信息在mRNA水錦平上發(fā)生改變。時(shí)間特異性錦：在多細(xì)胞生物從受精卵到檔組織、器官形成的各個(gè)不同檔發(fā)育階段，相應(yīng)基因嚴(yán)格按檔照一定時(shí)間順序開(kāi)啟或關(guān)閉檔，這就是基因表達(dá)的時(shí)間特檔異性?？臻g特異性：在個(gè)體檔生長(zhǎng)全過(guò)程，某種基因產(chǎn)物檔在個(gè)體按不同組織空間順序檔出現(xiàn)。分子伴侶（伴侶蛋白贛）：是一類(lèi)序列上沒(méi)有相關(guān)贛性但有共同功能的保守性蛋贛白，他們?cè)诩?xì)胞內(nèi)能協(xié)助其贛他多肽結(jié)構(gòu)完成正確的折疊贛、組裝、轉(zhuǎn)運(yùn)和降解。管家贛基因：在生物體生命的全過(guò)港程都是必須的，且在一個(gè)生港物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持港續(xù)表達(dá)的基因。原核生物轉(zhuǎn)港錄水平調(diào)控：原核生物基因港多以

18、操縱子的形式存在。操港縱子由調(diào)控區(qū)與信息區(qū)組成港，上游是調(diào)控區(qū)，包括啟動(dòng)魂子與操縱元件兩部分。啟動(dòng)魂子是同RNA聚合酶結(jié)合并魂啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的特異性DNA序魂列，操縱元件是特異的阻遏魂物結(jié)合區(qū)。1、啟動(dòng)子決定魂轉(zhuǎn)錄方向、模板鏈、轉(zhuǎn)錄效魂率。2、不同的因子可以魂競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合RNA聚合酶，打坷開(kāi)特定的一套基因。3、阻坷遏蛋白在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)基因表坷達(dá)具有負(fù)調(diào)控作用。4、正坷調(diào)控蛋白結(jié)合于特異DNA坷序列后促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。5坷、到位蛋白通過(guò)DNA重組坷倒位而調(diào)節(jié)基因表達(dá)、6、多RNA聚合酶抑制物可與R津NA結(jié)合并抑制轉(zhuǎn)錄。7、篡衰減子可以在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中控篡制轉(zhuǎn)錄水平。嚴(yán)謹(jǐn)反應(yīng)：細(xì)篡菌在缺乏氨基酸的環(huán)境中，篡RNA聚

19、合酶活性降低，R篡NA合成減少或停止。衰減技子attenuator：技細(xì)菌中的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋技白質(zhì)翻譯合成是偶聯(lián)在一起技的。這一特點(diǎn)使細(xì)菌的一些技操縱子中的特殊序列可以在技轉(zhuǎn)錄過(guò)程中控制轉(zhuǎn)錄水平。技這些特殊結(jié)構(gòu)稱為衰減子。技衰減子又稱為弱化子，位于技一些操縱子中第一個(gè)結(jié)構(gòu)基技因之前，是一段能減弱轉(zhuǎn)錄款作用的順序。乳糖操縱子的款作用機(jī)制 1、乳糖操縱子款（lac operon）款的組成：大腸桿菌乳糖操縱會(huì)子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基會(huì)因，分別編碼半乳糖苷酶、會(huì)透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶會(huì)，此外還有一個(gè)操縱元件O會(huì)，一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)會(huì)基因I（是調(diào)節(jié)基因，編碼會(huì)產(chǎn)生阻遏蛋白）。2、阻遏乎蛋白的負(fù)性

20、調(diào)節(jié)：沒(méi)有乳糖乎存在時(shí)，I基因編碼的阻遏乎蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乎抑制RNA聚合酶與啟動(dòng)子乎結(jié)合，乳糖操縱子處于阻遏乎狀態(tài)，不能合成分解乳糖的乎三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳乎糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白產(chǎn)變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列產(chǎn)，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開(kāi)放合產(chǎn)成分解乳糖的三種酶。所以產(chǎn)，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)產(chǎn)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。3、產(chǎn)CAP的正性調(diào)節(jié)：lac產(chǎn)啟動(dòng)子是弱啟動(dòng)子，在啟動(dòng)燈子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，燈當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳燈源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘紵粼吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度燈升高，與CAP結(jié)合，使C燈AP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合燈于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近燈的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活R賓NA聚合酶活

21、性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)賓基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于賓操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)賓錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)賓控，加速合成分解乳糖的三賓種酶。4、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖賓操縱子中的I基因編碼的阻賓遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的搬正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)搬、互相制約。CAP：是大搬腸桿菌分解代謝物基因活化搬蛋白，這種蛋白可將葡萄糖搬饑餓信號(hào)傳遞個(gè)許多操縱子搬，使細(xì)菌在缺乏葡萄糖時(shí)可父以利用其他能源。CAP結(jié)父合DNA是由cAMP控制父的。cAMP結(jié)合于CAP父，誘導(dǎo)CAP發(fā)生構(gòu)象改變父，使之能夠結(jié)合于特定的D父NA序列，激活臨近基因的父轉(zhuǎn)錄。cAMP水平降低時(shí)昏，cAMP與CAP解離，昏CAP轉(zhuǎn)回到無(wú)活性的構(gòu)象昏，并與DNA解

22、離，這將關(guān)昏閉葡萄糖以外的其他的與糖昏代謝相關(guān)的操縱子。由于C昏AP的作用依賴于cAMP昏，因此，CAP又稱為cA睛MP受體蛋白。原核生物翻睛譯水平的調(diào)控：一、SD序睛列是影響翻譯的重要因素：睛1、SD序列的順序及位置睛影響翻譯起始效率。2、m暇RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)可以屏蔽S瘤D序列。二、mRNA的穩(wěn)瘤定性（降解速度）是翻譯調(diào)瘤控的另一重要機(jī)制。mRN瘤A的5端與核糖體結(jié)合，瘤可明顯提高其穩(wěn)定性。三、瘤翻譯產(chǎn)物也可以對(duì)相應(yīng)的m瘤RNA的翻譯進(jìn)行調(diào)控：1淺、核糖體蛋白控制其mRN淺A的翻譯。2、翻譯終止因淺子RF2調(diào)節(jié)自身的翻譯。淺四、小分子RNA可以抑制淺特定mRNA的翻譯?；驕\重排：指某些基因片

23、段改變挖原來(lái)存在順序，通過(guò)調(diào)整有挖關(guān)基因片段的銜接順序，再挖重排成為一個(gè)完整的轉(zhuǎn)錄單挖位。真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的挖調(diào)控：主要是通過(guò)反式作用挖因子、順式作用元件和RN挖A聚合酶的相互作用來(lái)完成繕的，主要是反式作用因子結(jié)繕合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄繕起始復(fù)合物的形成過(guò)程。一繕、轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成是繕轉(zhuǎn)錄的可調(diào)控環(huán)節(jié)：真核生繕物RNA聚合酶識(shí)別的是由腺通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成腺的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，腺只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子腺結(jié)合到DNA上，形成有功腺能的啟動(dòng)子，才能被RNA腺聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。轉(zhuǎn)錄破起始復(fù)合物的形成過(guò)程為：破TFD結(jié)合TATA盒破；RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)破合TFD-DNA復(fù)合物破形

24、成一個(gè)閉合的復(fù)合物；破其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合破酶結(jié)合形成一個(gè)開(kāi)放復(fù)合物隆，開(kāi)放轉(zhuǎn)錄。二、反式作用隆因子是真核細(xì)胞內(nèi)重要的基隆因表達(dá)調(diào)控蛋白。反式作用隆因子（trans-act隆ing factor）：隆真核細(xì)胞內(nèi)含有的大量可以隆通過(guò)直接或間接結(jié)合順式作撾用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性撾的蛋白質(zhì)因子。在結(jié)構(gòu)上含撾有與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。撾 在轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程中，反式撾作用因子的作用是：促進(jìn)或撾抑制TFD與TATA盒亮結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA聚亮合酶與TFD-DNA復(fù)亮合物的結(jié)合；促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)亮錄起始復(fù)合物的形成。反式亮作用因子三個(gè)基本特征一亮般具有三個(gè)功能域：DNA確識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和確結(jié)合其他蛋白

25、結(jié)合域；能確識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的確順式作用元件；對(duì)基因的確表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用確，激活和阻遏基因的表達(dá)。確反式作用因子結(jié)構(gòu)域具有多拋種結(jié)構(gòu)模式： 1、DNA拋結(jié)合域有不同的結(jié)構(gòu)模式：拋鋅指結(jié)構(gòu)借助半胱氨酸和拋組氨酸與鋅離子結(jié)合；同敏源結(jié)構(gòu)域具有螺旋回折敏螺旋結(jié)構(gòu)：許多反式作用因敏子結(jié)合DNA的結(jié)構(gòu)域中具敏有一段相同的保守序列，是敏60個(gè)左右氨基酸組成的螺敏旋回折螺旋結(jié)構(gòu)的區(qū)域敏，稱為同源結(jié)構(gòu)域（hom敏eodomain,HD）敏,簡(jiǎn)稱同源域。亮氨酸拉搔鏈結(jié)構(gòu)使兩個(gè)單體結(jié)合并形搔成DNA結(jié)合域。螺旋-搔環(huán)螺旋結(jié)構(gòu)易于形成二聚搔體堿性-螺旋含較多的福堿性氨基酸。2、轉(zhuǎn)錄活化福結(jié)構(gòu)域是反式作

26、用因子的轉(zhuǎn)福錄激活區(qū)。其模型有：酸福性-螺旋結(jié)構(gòu)。帶有負(fù)電福荷的-螺旋區(qū)。富含谷福氨酰胺結(jié)構(gòu)域存在于多種轉(zhuǎn)福錄因子中。富含脯氨酸結(jié)廠構(gòu)域常與DNA結(jié)合結(jié)廠構(gòu)域相連。三、轉(zhuǎn)錄起始是廠由多種激活的反式作用因子廠進(jìn)行復(fù)合調(diào)控反式作用因漢子的活性調(diào)節(jié)：表達(dá)式調(diào)漢節(jié)反式作用因子合成出漢來(lái)就具有活性；共價(jià)修飾漢磷酸化和去磷酸化，糖漢基化；配體結(jié)合許多漢激素受體是反式作用因子；漢蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用漢蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物漢的解離與形成。反式作用漢因子與順式作用元件的結(jié)合漢：反式作用因子被激活后，燦即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子燦元件和增強(qiáng)子中的保守性序燦列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用燦。反式作用因子的作用方燦式成環(huán)、

27、扭曲、滑動(dòng)、燦Oozing。反式作用燦因子的組合式調(diào)控作用：每燦一種反式作用因子結(jié)合順式燦作用元件后雖然可以發(fā)揮促燦進(jìn)或抑制作用，但反式作用燦因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一擯因子完成的而是幾種因子組擯合發(fā)揮特定的作用。真核生擯物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制擯mRNA的加工和運(yùn)輸可形擯成轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控：5船端加帽和3端多聚腺苷船酸化的調(diào)控意義：5端加船帽和3端多聚腺苷酸化是船保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重船要因素，它至少保證mRN船A在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中不被降解。夾mRNA選擇性剪接對(duì)基夾因表達(dá)調(diào)控的作用mRN夾A運(yùn)輸?shù)目刂普{(diào)節(jié)進(jìn)入細(xì)胞夾質(zhì)的mRNA量。第九章夾細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo) 信息分出子：攜帶生物信息，在細(xì)胞出之間進(jìn)行傳遞

28、的小分子化學(xué)出物質(zhì)受體：靶細(xì)胞中能夠被出體內(nèi)一些生物活性物質(zhì)如激出素、細(xì)胞因子所識(shí)別，并與伙之結(jié)合將信號(hào)傳至細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)伙生生物效應(yīng)的物質(zhì)，也即細(xì)伙胞接受細(xì)胞外信號(hào)的接收裝伙置，直接參與細(xì)胞的信息傳伙遞。受體的化學(xué)性質(zhì)主要為伙蛋白質(zhì)。受體的作用：1、伙識(shí)別外源性信息分子，與受伙體相對(duì)應(yīng)，信息分子亦可以伙稱為配體；2、將配體的信矩號(hào)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，使之稱為細(xì)胞矩內(nèi)分子可以識(shí)別的信號(hào)，并矩傳遞到其他分子，引起細(xì)胞矩的應(yīng)答。受體與信息分子的矩結(jié)合特點(diǎn)：高度親和力、高矩度特異性、可逆行、可飽和矩性、放大效應(yīng)。受體的分類(lèi)肚：1、細(xì)胞表面受體：水溶肚性、表面信號(hào)分子：離子通肚道受體、G蛋白偶聯(lián)受體、肚單次跨膜受體。

29、2、細(xì)胞內(nèi)肚受體：脂溶性化學(xué)信號(hào)?？啥且晕挥诩?xì)胞質(zhì)也可以位于細(xì)辮胞核內(nèi)。蛋白激酶（pro辮tein kinase）辮：能夠?qū)?磷酸基團(tuán)從磷辮酸供體分子上轉(zhuǎn)移至底物蛋辮白的氨基酸受體上的一大類(lèi)辮酶。蛋白磷酸酶（prot雇ein phosphat雇ase）是具有催化已經(jīng)磷雇酸化的蛋白質(zhì)分子發(fā)生去磷雇酸化反應(yīng)的一類(lèi)酶分子，與雇蛋白激酶相對(duì)應(yīng)存在，共同雇構(gòu)成磷酸化與去磷酸化這一雇重要的蛋白質(zhì)活性的開(kāi)關(guān)系雇統(tǒng)。對(duì)蛋白激酶所引起的變雇化產(chǎn)生衰減信號(hào)接頭蛋白也銻稱調(diào)控結(jié)合元件(modu慫lar binding慫domain)即信慫號(hào)分子中存在著的一些特殊粟的結(jié)構(gòu)域，大約50-10粟0個(gè)氨基酸構(gòu)成，信號(hào)分子粟

30、通過(guò)這些特殊結(jié)構(gòu)域相互識(shí)粟別和作用而有序銜接，形成粟不同的信號(hào)傳遞鏈。SH粟2結(jié)構(gòu)域 信號(hào)分子與含粟磷酸酪氨酸蛋白分子SH粟3結(jié)構(gòu)域 信號(hào)分子與含碌脯氨酸蛋白分子PH結(jié)構(gòu)碌域 磷脂分子PIP2、碌PIP3PTB結(jié)構(gòu)域碌同SH2 ：信號(hào)分子與碌含磷酸酪氨酸蛋白分子G蛋妹白的循環(huán)和活化：一、G蛋妹白的組成三聚體G蛋白熔由、三種亞基組成熔。亞基具有GTP水解酶熔活性，又有調(diào)節(jié)效應(yīng)蛋白作熔用，和亞基具有調(diào)節(jié)熔亞基作用，也有調(diào)節(jié)效應(yīng)蛋熔白的作用，而且亞基上有熔脂鏈，故具有固定作用。這熔三個(gè)亞基可以聚合在一起形熔成三聚體，也可以解熔離為和形式。當(dāng)G蛋舜白與GDP相結(jié)合時(shí)無(wú)活性舜，而與GTP結(jié)合時(shí)則活化舜成

31、激活狀態(tài)。二、G蛋舜白循環(huán)受體與信息分子結(jié)合慫后，受體構(gòu)象改變，并使與慫受體相偶聯(lián)的G蛋白構(gòu)象改慫變，使GTP置換了GDP慫。G蛋白激活后，離開(kāi)受體慫并解離成和亞基GT慫P，亞基水解GTP，并慫調(diào)節(jié)腺苷酸環(huán)化酶的活性，熟調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)cAMP等第二熟信使的濃度，從而把信息傳熟導(dǎo)給下游分子，同時(shí)，與熟亞基結(jié)合的GTP水解成G熟DP，然后亞基GDP復(fù)熟合物重新與亞基結(jié)合形曙成無(wú)活性的三聚體，完成一連次信息傳導(dǎo)。G蛋白這種有連活性和無(wú)活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)換稱連為G蛋白循環(huán)與轉(zhuǎn)錄因子偶連聯(lián)的受體：多位于胞內(nèi)連，與一些疏水性信息分子相添識(shí)別，如類(lèi)固醇激素、甲狀添腺素、前列腺素、維生素A添等。這種受體主要包括三個(gè)添區(qū)

32、域，羧基端為激素等信添息分子的結(jié)合區(qū)域，氨基添端為轉(zhuǎn)錄活化區(qū)，調(diào)控某些添基因的啟動(dòng)子或上游的調(diào)控添基因，中央部分為DNA添的結(jié)合區(qū)，富含堿性氨基酸朋，平時(shí)此區(qū)與抑制蛋白結(jié)合朋形成復(fù)合物。受體與信息分朋子結(jié)合時(shí)，發(fā)生構(gòu)象變化，朋抑制蛋白脫落，暴露出DN朋A的結(jié)合區(qū)，轉(zhuǎn)入胞核內(nèi)，朋與特定DNA部位結(jié)合，調(diào)朋控轉(zhuǎn)錄活性。cAMPP舜KA途徑-活化：信號(hào)舜分子與受體結(jié)合，引起受體舜構(gòu)象變化受體活化G蛋白舜（結(jié)合GTP，與解舜離）活化后的G蛋白激活允腺苷酸環(huán)化酶（AC）A允C催化ATP生成cAMP允cAMP活化PKA（依允賴cAMP的蛋白激酶）允PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化，允調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基允因的表

33、達(dá)cAMPPKA院途徑-失活：信息分子與受院體解離，受體失活G蛋白院失活（GTP被水解成GD院P，亞基重新聚合）院AC失活cAMP被磷誅酸二酯酶水解PKA失活誅胰島素受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)誅通路 （一）胰島素受體介誅導(dǎo)的IRS-1-Ras-腋MAPK信號(hào)通路：這一通腋路主要涉及胰島素受體的基腋因表達(dá)調(diào)控的信號(hào)傳導(dǎo)。步腋驟：1、受體二聚體的形成腋及其磷酸化。2、募集接頭腋蛋白Grb2。3、Grb腋2的SH3募集SOS.4腋、Ras的活化。5、MA義PK的級(jí)聯(lián)激活。6、轉(zhuǎn)錄義因子的磷酸化及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控義作用。（二）胰島素受體介義導(dǎo)的IRS-PI3K-P再KB信號(hào)通路：此通路與胰再島素對(duì)代謝的調(diào)節(jié)密切相關(guān)

34、再，與細(xì)胞存活密切相關(guān)。步再驟：1、PI3K的p85再亞單位通過(guò)SH2結(jié)構(gòu)域與再發(fā)生了洛氨酸磷酸化的IR再S-1結(jié)合，p110催化殉亞單位激活。2、活化的P殉I3K催化PIP2磷酸化殉（D-3）生成PIP3。殉3、PIP3與PKB的P殉H（pleckstrin殉-homology do殉main）功能區(qū)結(jié)合，P咒KB構(gòu)象變化并轉(zhuǎn)位到胞膜咒，同時(shí)PIP3依賴的蛋白咒激酶（PDK）也與PIP咒3結(jié)合，使二者相互靠近。咒4、PDK催化PKB發(fā)生咒磷酸化，激活PKB。5、咒PKB可磷酸化多種蛋白，幼介導(dǎo)代謝調(diào)節(jié)、細(xì)胞存活等幼效應(yīng)。第十章幼細(xì)胞增生和凋亡的分子機(jī)制幼 細(xì)胞周期中的四個(gè)che幼ckpoin

35、t:（1）庸G1晚期 限制點(diǎn)監(jiān)庸控G1期細(xì)胞大小及環(huán)境中詐是否有生長(zhǎng)因子（2）G1詐S 轉(zhuǎn)折 監(jiān)控DNA詐是否損傷（3）G2 M詐轉(zhuǎn)折 監(jiān)控DNA詐是否損傷、DNA是否已正詐確完整地復(fù)制。（4）有絲影分裂中期關(guān)卡監(jiān)控姐妹影染色單體是否已穩(wěn)定的附著影在紡錘體上。參與細(xì)胞周期影調(diào)控的蛋白質(zhì) 1、周期蛋佯白（cyclin) 2、佯周期蛋白依賴性激酶（Cd佯k）3、周期蛋白-周期蛋佯白依賴性激酶抑制因子（C佯KI）4、Rb蛋白及E2幼F-DP1轉(zhuǎn)錄因子5、調(diào)幼節(jié)CdK磷酸化和去磷酸化幼的蛋白激酶和磷酸酶6、泛枕素（ubiquitin）枕和使蛋白泛素化的酶（一）枕cyclin和Cdk復(fù)合液物驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期

36、進(jìn)程周期蛋液白B和Cdk1的復(fù)合物又液稱成熟促進(jìn)因子。酗Cdk是種蛋白激酗酶，單獨(dú)存在的Cdk無(wú)活酗性，與相應(yīng)的cyclin酗結(jié)合后變構(gòu)而激活，并受磷酗酸化和去磷酸化的調(diào)控在有酗無(wú)活性間轉(zhuǎn)換，有活性的C酗dk復(fù)合物能夠磷酸化底耀物蛋白，調(diào)控它們的活性，耀驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期，而Cdk耀復(fù)合物的活性又受CKI耀的抑制。（二）CKI抑制耀Cdk1及周期蛋白-Cd耀k復(fù)合物的活性CKI分類(lèi)耀：Ink 4 家族：p1袖5,p16,p18,p1袖9蛋白。主要抑制Cdk4袖或Cdk6，抑制cycl袖in D與Cdk4或Cd袖k6結(jié)合，也抑制其復(fù)合物袖利用ATP磷酸化底物的功袖能。Cip/Kip 家族姚：p21,p

37、27,p5姚7蛋白。是細(xì)胞接受到接觸姚抑制、DNA損傷、低氧或姚某些細(xì)胞因子信號(hào)后的產(chǎn)物姚，主要功能是與cycli姚n Cdk復(fù)合物結(jié)合，姚抑制它們的活性。（三）R窯b蛋白與E2F-DP1結(jié)絢合，使E2F-DP1不能絢引起基因的轉(zhuǎn)錄，起負(fù)調(diào)控絢的作用。（四）使Cdk磷絢酸化和去磷酸化的酶也調(diào)節(jié)絢Cdk活性（五）泛素-蛋絢白酶體介導(dǎo)蛋白質(zhì)降解也起絢調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用。周期絢蛋白：是一類(lèi)呈細(xì)胞周期特絢異性或時(shí)相性表達(dá)、累積與絢分解的蛋白質(zhì)，它與周期素絢依賴性激酶共同影響細(xì)胞周絢期的運(yùn)行。調(diào)控蛋白的協(xié)同予作用 （一）Cdk4/6徐和Cdk2的活化是限制點(diǎn)徐處調(diào)控的關(guān)鍵因素分別與c沾yclin D、E

38、先后結(jié)沾合，導(dǎo)致RB磷酸化釋放E沾2F-DP1，靶基因轉(zhuǎn)錄沾，細(xì)胞由G1S，然后c針yclin D、E經(jīng)SC針F復(fù)合物多泛素化而降解。針（二）Cdk1的活化是G針2M關(guān)卡處關(guān)鍵調(diào)控因素c針yclin B與Cdk1針結(jié)合，導(dǎo)致底物蛋白的磷酸針化，G2 M。（三）A針PC介導(dǎo)多泛素化蛋白降解針是細(xì)胞離開(kāi)M期進(jìn)入G1期針的關(guān)鍵調(diào)控因素 c針yclin A/B 繭Cdk1APC磷酸化繭連接姐妹染色體蛋白降解繭， M G1。（四）繭DNA損傷關(guān)卡致G1、G揪2期停滯1 、通過(guò)揪系列磷酸化導(dǎo)致G2停滯揪DNA損傷活化久ATM和ATR 根磷酸化Chk2和Chk1根cdc25C與逞14-3-3結(jié)合cdc逞25

39、C無(wú)法活化Cdk1逞G2停滯DNA修復(fù)。逞 2、P53致G1、逞G2停滯 細(xì)胞凋亡（佛apoptosis)：是佛機(jī)體細(xì)胞在正常生理或病理佛狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)的程佛序性死亡過(guò)程，它的發(fā)生受佛機(jī)體的嚴(yán)密調(diào)控。細(xì)胞凋亡佛的形態(tài)特點(diǎn)：染色體固縮、紛膜起泡、核膜消失、DNA抉斷裂凋亡小體形成。主要抉的細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抉（一）外源性死亡受體途徑構(gòu)的關(guān)鍵步驟是死亡誘導(dǎo)信號(hào)構(gòu)復(fù)合物的形成 有8種受構(gòu)體，都屬于TNFa家族成迷員。 Fas結(jié)合F迷as LFas 三聚體迷，激活死亡結(jié)構(gòu)域募集F迷ADD分子Fas-F迷asL-FADD死亡亮誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物（DISC亮），并激活死亡效應(yīng)域c亮aspase 8自我

40、激活憫激活caspase 3憫細(xì)胞凋亡。（二）內(nèi)源憫性線粒體途徑的關(guān)鍵步驟是憫細(xì)胞色素C從線粒體膜間隙塞釋放到細(xì)胞漿 進(jìn)入塞胞漿的細(xì)胞色素C與Apa塞f 1、ATP/dATP塞結(jié)合形成凋亡體（apo塞ptosome）Ap轄af 1通過(guò)胱天蛋白酶募轄集域（CARD）與cas轄pase 9前體的CAR轄D相互作用而募集casp轄ase 9前體cas轄pase 9自我激活激轄活caspase 3 棗細(xì)胞凋亡。（三）正、負(fù)調(diào)棗節(jié)和兩條凋亡途徑的串話第棗十七章 細(xì)胞增棗生和凋亡相關(guān)基因與疾病主原癌基因（proto-o主ncogene)是一類(lèi)廣主泛存在生物體中，高度保守主的基因，其產(chǎn)物具有調(diào)控細(xì)主胞增生的

41、重要功能，當(dāng)其受主某些因素的影響，能發(fā)生突主變（活化）成為癌基因，導(dǎo)淹致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。原癌基因淹的特點(diǎn)：1、廣泛存在于生淹物體；2、高度保守，功能淹相似；3、產(chǎn)物有重要功能淹；4、某些因素作用下，可迎發(fā)生突變，使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化迎。原癌基因的產(chǎn)物：是信號(hào)迎轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵迎分子。生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子迎受體、非受體洛氨酸蛋白激迎酶、G蛋白。原癌基因的活嚴(yán)化機(jī)制：1、點(diǎn)突變2、基嚴(yán)因擴(kuò)增3、基因重排4、染園色體易位5、插入誘變癌基園因的功能：1、轉(zhuǎn)化園（transformat吁ion)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化吁，持續(xù)增生。調(diào)控轉(zhuǎn)化的原吁癌基因產(chǎn)物主要是位于細(xì)胞吁及胞漿。2、永生化（im吁mortaliz

42、atio吁n) 細(xì)胞吁分化受阻，不衰老死亡。調(diào)吁控永生化的原癌基因產(chǎn)物主吁要是位于細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因章子。抑癌基因（tumor章suppressor章gene）：指存在于正常章細(xì)胞內(nèi)的一大類(lèi)可抑制細(xì)胞章生長(zhǎng)并具有潛在抑癌作用的章基因，當(dāng)這類(lèi)基因發(fā)生突變章、缺失或失活時(shí)，可引起細(xì)章胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)隅生。抑癌基因的作用：1、隅RB和P53調(diào)節(jié)細(xì)胞周期隅關(guān)卡2、調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制隅細(xì)胞增生3、促進(jìn)DNA修隅復(fù)維持基因組穩(wěn)定第十一章咒 基因分析的基咒本策略 Sanger雙脫咒氧鏈末端終止法原理：妖在DNA聚合酶催化下，以妖單鏈或雙鏈DNA為模板，妖采用DNA引物引導(dǎo)新鏈D妖NA的合成。DNA鏈中核

43、雍苷酸以3,5-磷酸二雍酯鍵連接，合成DNA所用雍的底物是2-脫雍氧核苷三磷酸。2,3雍ddNTP與普通dNTP雍不同，它們?cè)诿撗鹾颂堑?雍位置缺少一個(gè)羥基。在D乍NA聚合酶作用下通過(guò)三磷乍酸基團(tuán)摻入到延伸的DNA乍鏈中，但由于沒(méi)有3羥基乍，不能同后續(xù)的dNTP形乍成磷酸二酯鍵，因此，正在乍延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延乍伸。通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電摘泳就可以分辨出具有特定末手端不同長(zhǎng)度的DNA片段。手Maxam-Gilber手t化學(xué)裂解法原理：用化學(xué)手試劑處理具末端放射性標(biāo)記手的DNA片段，造成堿基的手特異性切割，產(chǎn)生一組具有確不同長(zhǎng)度的DNA鏈的反應(yīng)確混合物，經(jīng)電泳分離得出待確測(cè)DNA片段的核苷酸序

44、列確。基因拷貝數(shù)的分析Sou確thern Blot原理確：根據(jù)基因序列合成探針，頭利用同源互補(bǔ)序列可以退火頭形成異源雙鏈的原理，探測(cè)頭檢測(cè)對(duì)象中能與探針結(jié)合的頭DNA序列。Southe頭rn blot的基本步驟頭：DNA的酶切消化和基因頭探針的標(biāo)記；酶切消化：要頭保證基因的完整性。瓊探針標(biāo)記：探針序列的瓊確定和檢測(cè)信號(hào)的選擇。N瓊orthern blo瓊t定性分析mRNA。瓊技術(shù)的關(guān)鍵是在于添RNA的制備和（變性添）電泳。PCR技術(shù)的基本添原理：作為引物的一對(duì)寡核添苷酸與模板DNA同源序列添按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成述局部雙鏈，然后在TaqD頭NA聚合酶作用下引導(dǎo)新鏈頭DNA的合成，經(jīng)過(guò)25-頭

45、30個(gè)變性、退火和延伸的頭循環(huán)，獲得特異性的DNA頭片段擴(kuò)增產(chǎn)物。RT-PC士R技術(shù)：以RNA為模板體士外擴(kuò)增cDNA 的技術(shù)，士可用于定性和相對(duì)定量（半士定量）。基本步驟：提士取總RNA，然后將其中的離mRNA在體外逆轉(zhuǎn)錄成c離DNA，再以cDNA為模離板進(jìn)行特定基因的PCR擴(kuò)離增。轉(zhuǎn)錄后RNA剪接的分離析RNA酶保護(hù)試驗(yàn)（RP劣A）：是一種液相雜交技術(shù)劣，通過(guò)RNase A 和劣RNase T1專(zhuān)一性降劣解單鏈RNA，分析受到保劣護(hù)的雜交雙鏈RNA，以確劣定RNA的剪接情況、剪接鄰位點(diǎn)以及基因內(nèi)含子的可能餡位置等。蛋白質(zhì)的定性定量餡分析：指的是對(duì)特定基因產(chǎn)餡物蛋白質(zhì)的定性和定量及定餡位分析

46、。一、從總蛋白質(zhì)中餡鑒定特定的蛋白質(zhì)West倪ern blot技術(shù)：倪是一種免疫印跡技術(shù)，以偶倪連標(biāo)記物的抗體分子作為探倪針，檢測(cè)轉(zhuǎn)移到固相支持物倪上的蛋白質(zhì)分子?；静襟E倪：蛋白質(zhì)樣品的制備和SD倪S電泳分離，蛋瘤白質(zhì)轉(zhuǎn)膜，標(biāo)記的抗體與膜瘤上蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原抗體的結(jié)瘤合，檢測(cè)并分析標(biāo)記物信號(hào)瘤。（在樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水瘤平很低時(shí)，可通過(guò)免疫沉淀瘤收集蛋白質(zhì)。）二、在細(xì)胞瘤水平分析特定蛋白質(zhì)流式細(xì)梨胞術(shù)：用熒光標(biāo)記的抗體結(jié)梨合細(xì)胞表面或內(nèi)部的特定蛋梨白質(zhì)分子（抗原），經(jīng)過(guò)流梨式細(xì)胞儀分析熒光信號(hào)，從梨而根據(jù)細(xì)胞表達(dá)特定蛋白質(zhì)梨的情況對(duì)基因的表達(dá)活性作梨出判斷。三、細(xì)胞定位分析梨特定的蛋白質(zhì)免疫組織

47、化學(xué)哲（或免疫細(xì)胞化學(xué)）技術(shù)哲基本步驟：抗體的制備與標(biāo)哲記，標(biāo)本（組織或細(xì)胞）的哲制備，組化染色和結(jié)果的觀哲察。第十二章智基因功能分析的基本策略智特定基因功能研究的基本策智略：通過(guò)特定基因的導(dǎo)入和智特定基因的剔除或表達(dá)的抑智制，制備模式生物體或體外之培養(yǎng)的細(xì)胞模型，觀察和檢之測(cè)其表型（包括整體、細(xì)胞之、分子水平）的變化，從而之分析、鑒定特定基因的功能之。轉(zhuǎn)基因模型包括轉(zhuǎn)基因動(dòng)之物模型和轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞模型之。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（trans之genic animal諸):應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育的諸攜帶外源基因并能穩(wěn)定遺傳諸的動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備諸基本步驟：將目的基因（或諸基因組片段）導(dǎo)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物諸的受精卵（或

48、著床前胚胎細(xì)諸胞），然后將其植入受體動(dòng)薛物的輸卵管或子宮中，發(fā)育薛成攜帶有外源基因的個(gè)體，薛并通過(guò)分析其基因組中外源薛基因的整合狀況及其揭示外薛源基因功能的表型，在此基薛礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)常規(guī)的遺傳育種方薛法培育出轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基薛因動(dòng)物的應(yīng)用：1、確定特蠅定基因的功能 2、發(fā)現(xiàn)蠅新基因功能 3、發(fā)現(xiàn)新蠅基因（突變） 4、研究硬基因表達(dá)的時(shí)空性 5、硬建立動(dòng)物模型 6、產(chǎn)生硬需要的器官或組織基因敲除需（gene knocko需ut）：指通過(guò)DNA同源需重組定向地將外源基因替換需宿主細(xì)胞染色體DNA中特需定的基因，從而使特定的基需因在細(xì)胞內(nèi)或生物體內(nèi)失活需的過(guò)程1打靶載體的構(gòu)建：需同源序列要足夠長(zhǎng)，要含有

49、詐篩選用的標(biāo)志基因。2 胚詐胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng)3打靶詐載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞4同源詐重組胚胎干細(xì)胞的篩選5基詐因敲除胚胎干細(xì)胞注射入胚詐泡6胚泡植入假孕小鼠的子詐宮中7雜交育種獲得純合的掌基因敲除動(dòng)物基因敲除動(dòng)物酗（gene knocko酗ut animal）：采酗用同源重組定向剔除特定基酗因的技術(shù)，所制備的某特定酗基因喪失功能的動(dòng)物。基因酗敲除小鼠：應(yīng)用基因敲除技魚(yú)術(shù)，使兩條染色體上特定等魚(yú)位基因都喪失功能的小鼠。魚(yú)基因表達(dá)的抑制或沉默是通魚(yú)過(guò)在RNA水平的干涉來(lái)分魚(yú)析特定基因功能的方法。（魚(yú)1）反義RNA封閉目標(biāo)R益NA的功能（2）RN益A干涉（RNA inte益rference, RN益Ai

50、）益使特定基因沉默。反義益RNA（antisenc益e RNA)：能與mRN益A互補(bǔ)配對(duì)的RNA分子。益兩種方法：1、人工合成反昏義RNA導(dǎo)入細(xì)胞抑制昏mRNA 2、構(gòu)建載體昏導(dǎo)入細(xì)胞轉(zhuǎn)錄反義RN昏A抑制mRNARNA廠干涉是指由短雙鏈RNA誘廠導(dǎo)的同源mRNA的降解過(guò)廠程，可使基因表達(dá)受到抑制廠。原理：雙鏈RNA 激活廠Dicer（酶復(fù)合物勃，由核酸內(nèi)切酶和解旋酶組勃成），識(shí)別異常的雙鏈RN勃A并將其切割成短雙鏈RN勃A（siRNA，21-2勃3bp）， siRNA與疆Dicer結(jié)合形成RNA疆誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RISC疆），雙鏈RNA經(jīng)解旋酶作疆用，成為單鏈RNA，識(shí)別疆并結(jié)合靶RNA分子，

51、致核疆酸內(nèi)切酶的切割，失去編碼疆蛋白質(zhì)的功能。兩個(gè)步驟：疆1、長(zhǎng)雙鏈RNA成為小干寂涉性RNA （Si寂RNA); 2、RISC寂形成，識(shí)別SiRNA同源寂的mRNA ，并切割。選嫁擇目標(biāo)RNA干涉靶點(diǎn)的注嫁意點(diǎn)：1、避開(kāi)蛋白結(jié)合部嫁位，選擇AUG下游50-嫁100bp區(qū)的AA（N1嫁9）TT或AA（N21）嫁序列；2、GC比50%左匯右，長(zhǎng)30nt；3、與其耗它RNA序列無(wú)同源性。主耗要步驟：1、確定目標(biāo)RN揪A并選擇被干涉靶點(diǎn)；2、揪準(zhǔn)備針對(duì)目標(biāo)RNA的si揪RNA；3、用siRNA揪干涉目標(biāo)RNA;4、目標(biāo)揪RNA含量和蛋白質(zhì)水平的靛分析。第十三章基因靛工程 DNA 重組（DN靛A re

52、combinat創(chuàng)ion）：不同來(lái)源的DN創(chuàng)A分子通過(guò)共價(jià)連接（磷酸創(chuàng)二酯鍵）而組合成新的DN創(chuàng)A分子，這一過(guò)程稱為DN創(chuàng)A重組。重組DNA技術(shù)又創(chuàng)稱為分子克隆技術(shù)或基因工創(chuàng)程技術(shù)。分子克?。涸隗w外半對(duì)DNA分子按照既定目的半和方案進(jìn)行人工重組，將重半組分子導(dǎo)入宿主，使其在宿半主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該半DNA分子的大量拷貝?；煲蚬こ?genetic眷engineering)眷：有目的地通過(guò)分子克隆技眷術(shù)，利用克隆基因表達(dá)、制眷備特定的蛋白或多肽產(chǎn)物，眷或定向改造基因結(jié)構(gòu)所用的經(jīng)方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為基經(jīng)因工程?；蚬こ痰难芯?jī)?nèi)經(jīng)容：1.目的基因的獲取：經(jīng)從生物有機(jī)體的基因組中分經(jīng)離帶有目的基

53、因的DNA片經(jīng)段；2.重組：在體外將帶適有目的基因的DNA片段連適接到能自我復(fù)制并具有選擇適標(biāo)志的載體分子上，形成重適組分子；3.將重組分子導(dǎo)適入受體細(xì)胞（細(xì)菌）:K-適12。4.帶有重組子的細(xì)適菌擴(kuò)增，獲得大量的繁殖群扔體。5.篩選：從大量的細(xì)扔胞繁殖群體中篩選出帶有重扔組DNA分子的克隆。6.扔分析和表達(dá)：將選出的細(xì)胞扔克隆的目的基因進(jìn)行進(jìn)一步扔分析并實(shí)現(xiàn)功能蛋白的表達(dá)扔分子克隆常用的工具酶：一透、限制性核酸內(nèi)切酶：是細(xì)透菌產(chǎn)生的一類(lèi)能識(shí)別和切割淺雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿淺基順序的核酸水解酶。分類(lèi)淺：可分為、型三大淺類(lèi)。型酶作用特點(diǎn)：只有淺限制性活性，無(wú)甲基化活性淺；只需Mg+作為催化反淺

54、應(yīng)輔助因子，無(wú)須。淺識(shí)別順序一般為46個(gè)堿淺基，通常是回文結(jié)構(gòu)（反轉(zhuǎn)巷重復(fù)順序），即具有180巷的旋轉(zhuǎn)對(duì)稱。二、DNA巷連接酶（DNA Liga巷se）：T4 DNA L巷igase。催化兩個(gè)獨(dú)立巷雙鏈DNA片段5-磷酸巷基和3-羥基之間形成磷妄酸二酯鍵；修復(fù)雙鏈DNA妄中一條鏈上的缺口。三、D妄NA聚合酶（DNA Po妄lymerase）1、D妄NA polymeras妄e I（全酶，Korn妄berg polymer排ase）具有至少3種活性排：53聚合排酶活性；53手外切酶活性；3手5外切酶活性。應(yīng)用手：1、催化DNA缺口平移手（nick transl手ation）反應(yīng)，制備高手比活DN

55、A探針；2. 第銑二cDNA鏈合成3. 對(duì)銑雙鏈DNA3突出末端進(jìn)銑行末端標(biāo)記；4. San銑ger測(cè)序 2、銑大腸桿菌DNA聚合酶k銑lenow片段：53蛇聚合酶；3蛇5外切酶；缺失53蛇外切酶活性應(yīng)用：全體酶第2-4。四、逆轉(zhuǎn)錄酶體（reverse t蓑ranscriptase蓑）依賴于RNA的DNA聚蓑合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄蓑RNA成為DNA的酶，產(chǎn)乍物DNA又稱cDNA（c乍omplementary乍DNA）。用于mRNA乍為模板合成cDNA，是構(gòu)乍建cDNA文庫(kù)和RT-P乍CR技術(shù)中的關(guān)鍵工具酶。怨五、末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移怨酶（TdT）:將dNTP怨加到DNA3羥基。作用怨：3端標(biāo)

56、記DNA探針怨在載體和待克隆片段上形瘍成同聚物尾，以利DNA重瘍組。六、堿性磷酸酶（AP瘍）：催化去除DNA、袖RNA、NTP及dNTP遜的5磷酸基團(tuán)。1. 在遜用32P標(biāo)記5末端前，遜去除DNA或RNA的5遜磷酸基；2. 在連接反應(yīng)遜中，去除載體DNA片段5鹽磷酸基，防止自身環(huán)化。鹽載體(Vector)能在鹽連接酶作用下和外源DNA鹽片段連接并運(yùn)送DNA分子硯進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子硯 良好的載體應(yīng)具備以下條硯件：1. 必須有自身的復(fù)喻制子；2. 載體分子上必喻須有限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)喻,即多克隆位點(diǎn)（mult喻icloning sit喻e,MCS），以供外源D喻NA插入3. 載體應(yīng)具有執(zhí)可

57、供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū)執(zhí)別陽(yáng)性重組子和陰性重組子執(zhí)； 4. 載體分子必須具執(zhí)有足夠的容量5. 可通過(guò)執(zhí)特定的方法導(dǎo)入宿主(氯化執(zhí)鈣，磷酸鈣，電擊，等)。許6. 對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)配許備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)許子，前導(dǎo)順序，增強(qiáng)子，加許尾信號(hào)等調(diào)控DNA元件。許一、質(zhì)粒載體：小片段DN許A克隆，測(cè)序。特點(diǎn)1、分震子量相對(duì)較小，能在細(xì)菌內(nèi)訓(xùn)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)訓(xùn)。2、具有一個(gè)以上的遺傳訓(xùn)標(biāo)記，便于對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行訓(xùn)選擇，如抗生素的抗性基因訓(xùn)、-半乳糖苷酶基因（l訓(xùn)ac Z）等。3、具有多訓(xùn)個(gè)限制性內(nèi)切酶的單一切點(diǎn)訓(xùn)，便于外源基因的插入。如訓(xùn)果在這個(gè)位點(diǎn)有外源基因的虛插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因虛的失活

58、，而便于篩選。 二虛、l噬菌體載體：構(gòu)建基因虛文庫(kù)（shotgun 基虛因組文庫(kù)、cDNA文庫(kù)）虛及表達(dá)文庫(kù)。DNA摘可以作為載體，通過(guò)替換自摘身序列的方式攜帶外源DN摘A，這種載體稱為替換型載摘體 三、粘性質(zhì)粒適合克隆迷較大的DNA片段：由質(zhì)粒迷和噬菌體的cos粘性末迷端構(gòu)建而成。粘粒載體大小迷為4-6kb，插入片段則迷可大至29-50kb應(yīng)迷用于大分子量DNA克隆。憫特點(diǎn)：含有質(zhì)粒的抗藥性憫標(biāo)記如Ampr基因。帶憫有噬菌體的粘性末端（c憫os區(qū)）具有一個(gè)或多個(gè)憫限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)。憫粘性質(zhì)粒本身不大非重憫組體粘粒很小，不能在體外憫包裝，因而重組體的本底很契低，有利于篩選。四、M契13噬

59、菌體載體：制備單契鏈DNA, 人工誘變 五契、病毒載體可將外源DNA離帶入哺乳動(dòng)物細(xì)胞 六、B離AC：大片段DNA 克離隆，0.1-0.4 MB離。構(gòu)建物理圖譜 基因工程裸的操作程序：一、制備目的裸基因和相關(guān)載體：1、從基裸因組文庫(kù)分離篩選基因。2綠、通過(guò)cDNA文庫(kù)分離篩體選基因。3、人工合成基因體：根據(jù)核苷酸序列。4、P體CR擴(kuò)增目的基因: 已知體基因序列或同源序列。載體體：噬菌體和粘性質(zhì)粒適用體于構(gòu)建基因組文庫(kù)，PUC體系列質(zhì)粒適合構(gòu)建CDNA撓文庫(kù)和克隆一些較小的DN撓A片段，M13噬菌體則適撓用于克隆一些待測(cè)序的DN撓A片段。二、將目的基因和撓有關(guān)載體進(jìn)行連接：1、粘撓性末端最適合D

60、NA片段連撓接；2、人工接頭用于處理?yè)喜灰走B接的DNA片段；3顯、加入同聚物尾是處理不易顯連接的DNA片段的另一有顯效方法；4、平端DNA片顯段可以在T4DNA連接酶顯的作用下，與某些限制性內(nèi)顯切酶產(chǎn)生的平端載體相連接顯。三、將重組的DNA導(dǎo)入破受體細(xì)胞：1、轉(zhuǎn)化是直接破將DNA導(dǎo)入細(xì)菌的方法破；2、感染是利用噬菌體將破外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞的破方法；3、轉(zhuǎn)染是將外源D破NA導(dǎo)入真核細(xì)胞的方法。破四、DNA重組體的篩選和寧鑒定：1、采用遺傳學(xué)方法寧可以篩選特定的重組DNA泌：利用抗性標(biāo)記可篩選帶泌有載體的細(xì)菌克隆利用不泌同標(biāo)記可篩選出帶有重組體泌的細(xì)菌克隆。a、插入滅活泌法利用特定抗性基因的失