1、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私釬eulgen反應(yīng)的原理，掌握有關(guān)的操作方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】DNA是由許多單核苷酸聚合成的多核苷酸，每個(gè)單核苷酸又由磷酸、脫氧核糖和堿基構(gòu)成。DNA經(jīng)1N鹽酸水解，其上的嘌吟堿和脫氧核糖之間的雙鍵打開(kāi)，使脫氧核糖的第一碳原子上形成游離的醛基，這些醛基與Schiff試劑反應(yīng)。Schiff試劑是由堿性品紅和偏重亞硫酸鈉相作用，形成無(wú)色的品紅液，當(dāng)無(wú)色品紅與醛基結(jié)合形成紫紅色的化合物。因此凡有DNA的地方，都能顯示紫紅色。紫紅色的產(chǎn)生，是由于反應(yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)含有醌基，醌基是一個(gè)發(fā)色基團(tuán)，所以具有顏色。材料不經(jīng)過(guò)水解或預(yù)先用熱的三氯醋酸或DNA酶處理，得到的反應(yīng)是陰性的，從而證明了Feu

2、lgen反應(yīng)的專一性。O00_dna片段圖4-1Feuigen反應(yīng)紅紫色化合物【實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑】（一）儀器、用具顯微鏡、恒溫水浴箱、溫度計(jì)、解剖針、酒精燈、試管、燒杯、載玻片、蓋玻片、吸水紙。（二）材料洋蔥鱗莖或根尖（三）試劑11N鹽酸的配制取82.5ml比重1.19的濃鹽酸加蒸餾水至1000ml。2.Schiff試劑的配制及保存稱取0.5g堿性品紅加入到100ml煮沸的蒸餾水中（用三角燒瓶），時(shí)時(shí)振蕩，繼續(xù)煮5分鐘（勿使之沸騰），使之充分溶解。然后冷卻至50C時(shí)用濾紙過(guò)濾，濾液中加入10ml1NHCl，冷卻至25C時(shí)，加入0.5gNa2S2O5（偏重亞硫酸鈉或鉀），充分振蕩后，塞緊瓶塞

3、，在室溫暗處?kù)o置至少24小時(shí)（有時(shí)需23天），使其顏色退至淡黃色，然后加入0.5g活性炭，用力振蕩1分鐘，最后用粗濾紙過(guò)濾于棕色瓶中，封嚴(yán)瓶塞，外包黑紙。濾液應(yīng)為無(wú)色也無(wú)沉淀，貯于4C冰箱中備用。如有白色沉淀，就不能再使用，如顏色變紅，可加入少許偏重亞硫酸鈉或鉀，使之再轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色時(shí)，仍可再用。3亞硫酸水取200ml自來(lái)水，加10ml10%偏重亞硫酸鈉（或偏重亞硫酸鉀）水溶液和10ml1NHCl三者于使用前混勻。【方法與步驟】1-將洋蔥根尖或鱗莖內(nèi)表皮放在1NHC1中，加熱到60C水解810min。2蒸餾水水洗。3-Schiff試劑遮光染色30min。4用新鮮配制的亞硫酸水溶液洗3次，每次1mi

4、n。5-水洗5min。6將根尖放在載玻片上，鑷子搗碎，蓋上蓋玻片，壓片（洋蔥表皮可省去壓片這一步）。7.顯微鏡檢查。結(jié)果：細(xì)胞中凡有DNA的部位應(yīng)呈現(xiàn)紫紅色的陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)照片：方法一先將材料放在5%三氯醋酸中90C水浴15min,主要把DNA抽提掉，然后按步驟17制片觀察。方法二材料不經(jīng)1NHCl水解，直接放在Schiff試劑中染色，然后按步驟47制片觀察?！咀鳂I(yè)】1、簡(jiǎn)述Feulgen反應(yīng)的原理和實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。2、繪圖示洋蔥根尖細(xì)胞或鱗莖表皮細(xì)胞DNA的分布部位。實(shí)驗(yàn)23細(xì)胞電泳【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私饧?xì)胞電泳的意義和原理，掌握紅細(xì)胞的電泳速度測(cè)定方法【實(shí)驗(yàn)原理】在外界附加電場(chǎng)作用下產(chǎn)生多相系統(tǒng)相

5、位移效應(yīng)，稱為電動(dòng)現(xiàn)象，屬于此種電動(dòng)現(xiàn)象的包括電泳和電滲透。在電場(chǎng)作用下，液體介質(zhì)中的懸浮質(zhì)點(diǎn)與介質(zhì)間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)，稱為電泳。將細(xì)胞制成懸浮溶液，使其單個(gè)游離的細(xì)胞分散于等滲的介質(zhì)中，在電場(chǎng)作用下，細(xì)胞在電泳室內(nèi)發(fā)生運(yùn)動(dòng)。這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞電泳。細(xì)胞表面具有一定的電荷（通常為負(fù)電荷），其表面吸附了一層極薄的水膜，它與介質(zhì)間存在著電位差，此電位差稱為Z電位。每種細(xì)胞在恒定的條件下（如溫度、電壓、電流、介質(zhì)濃度、pH值等）其電泳速度和Z電位十分穩(wěn)定，但在各種有害因子、病理狀態(tài)的影響下，可降低其表面電荷，所以細(xì)胞電泳速度和Z電位值也發(fā)生改變（降低）。因此，利用細(xì)胞電泳研究生命結(jié)構(gòu)的表面性質(zhì)、鑒定細(xì)胞或單

6、細(xì)胞有機(jī)體的機(jī)能和病理狀態(tài)具有重要的意義，這是一種十分有用的方法?！緦?shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑】（一）儀器、用具LIANG-100型細(xì)胞電泳儀1臺(tái)、光學(xué)顯微鏡1臺(tái)、千分表1只、計(jì)算器1只、網(wǎng)格目微尺1個(gè)、臺(tái)微尺1個(gè)、細(xì)胞電泳架1個(gè)、電泳毛細(xì)管1支、采血量管1支樣品管1支、lml吸管1支、5m1注射器1支、50m1燒杯1個(gè)、解剖刀、剪刀、鑷子各一把。（二）材料兔子或羅非魚血（三）試劑氯化鈉、蔗糖、肝素、瓊脂。【方法與步驟】一、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)l細(xì)胞介質(zhì)的制備根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，可選配以下各種介質(zhì)：（1）生理鹽水肝素液：在生理鹽水中（0.9%NaC1液），按每m1加入45U（國(guó)際單位）的肝素，混勻后備用。（2）8蔗糖

7、肝素液：在8的蔗糖液中，加上述（1）含量的肝素，混勻后備用。（3）50血清液：用生理鹽水將離心后提取的血清配成50%的介質(zhì)。因血清中含有抗凝物質(zhì)，在配制此液時(shí)不需再加入肝素。樣品的制備根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象（如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、巨噬細(xì)胞、癌細(xì)胞或植物的原生質(zhì)體、葉綠體等），選擇所需介質(zhì)1ml,再用采血量管或微型移液管吸取濃縮細(xì)胞10mm3，加入上述介質(zhì)中，并混勻。如做紅細(xì)胞電泳，可直接用采血量管吸取全血10mm3,加入所選擇的介質(zhì)中混勻后即可使用。鹽橋的制備稱取9gNaC1加蒸餾水至100ml（即9%的NaCl液），溶解后再加入1.5克瓊脂粉加熱溶化，在加熱時(shí)不斷用玻璃棒攪動(dòng)，直至全部溶化為止，此

8、時(shí)將已洗凈涼干的塑料管插入溶液內(nèi)，使管腔內(nèi)全部被溶液充滿，不得留有氣栓。塑料管可切成1.31.4cm長(zhǎng)，如無(wú)專用管，亦可用空?qǐng)A珠筆芯代替，先用堿水煮沸，除去油污，再用清水洗凈晾干，使用效果良好。網(wǎng)格目鏡測(cè)微尺的校正在顯微鏡載物臺(tái)上放置物鏡測(cè)微尺（又名臺(tái)微尺），轉(zhuǎn)動(dòng)顯微鏡鏡筒的目鏡并移動(dòng)物鏡測(cè)微尺，調(diào)整目鏡測(cè)微尺網(wǎng)格的縱線與物鏡測(cè)微尺刻度線平行并重合，將網(wǎng)格的一條細(xì)線與物鏡測(cè)微尺的一條細(xì)線重合在一起。然后確定被一定數(shù)量的目鏡測(cè)微尺網(wǎng)格刻度數(shù)所包含的物鏡測(cè)微尺的刻度數(shù)，根據(jù)下式進(jìn)行計(jì)算：naX=式中mX：網(wǎng)格的實(shí)際刻度值（mm或pm）；a：物鏡測(cè)微尺的刻度值（通常為0.01mm）；n：物鏡測(cè)微尺的

9、刻度數(shù)；m：網(wǎng)格刻度數(shù)。、，亠-7-.注意：（1）對(duì)網(wǎng)格目鏡測(cè)微尺刻度值的校正，應(yīng)選擇在顯微鏡視野中部進(jìn)行，因偏邊緣具有相差，使測(cè)量不準(zhǔn)確。（2）進(jìn)行校正的放大倍數(shù)應(yīng)足以保證能夠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，普通48pm的細(xì)胞可選擇放大400450倍的物鏡進(jìn)行校正。毛細(xì)管電泳室靜止層（即測(cè)量層）的計(jì)算毛細(xì)管電泳室是長(zhǎng)6cm的管腔，呈正方形（有的為等邊三角形）以玻璃制成毛細(xì)管，電泳室的制作工藝比較復(fù)雜，在其中相對(duì)應(yīng)的內(nèi)壁中線處，各刻有一條與內(nèi)壁長(zhǎng)軸一致的平分線，此線是在電泳測(cè)量時(shí)，觀察一定深度的細(xì)胞移動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)流體力學(xué)原理，液體在管腔內(nèi)流動(dòng)，因?yàn)楣鼙趯?duì)流體有吸附作用和摩擦力，其管腔內(nèi)不同深度的質(zhì)點(diǎn)的運(yùn)動(dòng)速度

10、是不一致的，管腔的中心處最快，緊貼管壁處最慢。在做電泳速度測(cè)量時(shí)，因?yàn)槊?xì)管內(nèi)不同深度點(diǎn)的運(yùn)動(dòng)速度差別極大，所以在其它因素（如溫度、黏度、電壓、電流強(qiáng)度、細(xì)胞濃度、pH值等）相對(duì)穩(wěn)定的條件下，必須選擇固定的深度進(jìn)行測(cè)量，否則，因深度的變化而測(cè)定的電泳速度，將不能表示出正確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但是，當(dāng)電流通過(guò)電泳毛細(xì)管小室時(shí)，除了發(fā)生細(xì)胞和介質(zhì)間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)之外，同時(shí)發(fā)生介質(zhì)連同介質(zhì)中離子與毛細(xì)管壁的相對(duì)運(yùn)動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為電滲透。這時(shí)陰離子連同介質(zhì)在管腔的中部向正極方向移動(dòng)，陽(yáng)離子連同介質(zhì)在管腔的邊緣向負(fù)極方向移動(dòng)。因此，由于電滲的存在，所測(cè)得的數(shù)值是電泳和電滲的總和。電滲能夠直接影響測(cè)定細(xì)胞的真實(shí)電泳速

11、率。因?yàn)樵跍y(cè)量時(shí)電泳小室兩端是封閉的，根據(jù)流體力學(xué)原理，室中液體的總流量等于零，由于毛細(xì)管腔中間的介質(zhì)與邊周介質(zhì)間存在著向相反方向運(yùn)動(dòng)著的電滲現(xiàn)象，所以在彼此向相反方向運(yùn)動(dòng)著的介質(zhì)的交界處其移動(dòng)速度等于零，我們把這一層深度稱為“靜止層”或“測(cè)量深度”。在這一層進(jìn)行細(xì)胞電泳測(cè)量，受電滲的影響最小，能夠較準(zhǔn)確地反映出電泳的速度。對(duì)于不同大小和形狀的毛細(xì)管電泳室管腔的橫截面其“靜止層”深度是不一致的，國(guó)產(chǎn)的外方內(nèi)方毛細(xì)管，內(nèi)徑為800lOOOpm,其靜止層深度，經(jīng)測(cè)定為內(nèi)徑深度的0.10.15處。在實(shí)際測(cè)量中，要不斷的改變電流方向，測(cè)定往返運(yùn)動(dòng)著的不同細(xì)胞，如果電流方向不變，只測(cè)定向某方向移動(dòng)的細(xì)胞

12、。則由于電滲的作用，使質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)速度加快，以至造成“環(huán)流”，此時(shí)將不能進(jìn)行電泳速率的測(cè)定。靜止層（測(cè)量層）的測(cè)定：首先測(cè)出在劃有刻度線的毛細(xì)管所對(duì)應(yīng)二壁間的距離d（即毛細(xì)管內(nèi)徑）。在靠近觀察壁劃線的0.1d0.15d深度處，即為靜止層或測(cè)量層。其測(cè)量方法有兩種：一種是用顯微鏡的低倍物鏡（X10）,先把細(xì)調(diào)焦旋扭的指示箭頭對(duì)準(zhǔn)刻度盤的“O”處，然后慢慢調(diào)整粗調(diào)焦旋鈕把焦面對(duì)準(zhǔn)靠觀察面一側(cè)壁的劃線處，這時(shí)再旋轉(zhuǎn)細(xì)調(diào)，使焦面逐漸向管腔內(nèi)部延伸，直到調(diào)到對(duì)面壁劃線的焦面時(shí)（視劃線清楚為止），記下細(xì)調(diào)旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)和最后不滿一整圈的刻度數(shù)，則可算出從第一條劃線焦面至第二條劃線焦面間物鏡鏡頭前伸的距離，即為電泳

13、毛細(xì)管管腔的直徑d。再用微調(diào)調(diào)焦旋鈕（即與上反方向）使焦平面落在讀數(shù)值為0.1d0.15d處即為測(cè)量層的位置。另一種方法是用千分表進(jìn)行測(cè)量。此法較第一種測(cè)量數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確。（1）用低倍物鏡和粗調(diào)焦旋鈕尋找電泳毛細(xì)管的前內(nèi)壁黑線。（2）把千分表的前端與顯微鏡的移動(dòng)臺(tái)接觸后，調(diào)千分表的指針至零。（3）利用微調(diào)焦旋鈕找到后內(nèi)壁黑線，讀下千分表指針的讀數(shù)，該讀數(shù)就是毛細(xì)管的內(nèi)徑（如顯示值為600，則這支毛細(xì)管的內(nèi)徑就是600pm）。（4）用微調(diào)調(diào)焦旋鈕（即與上反方向）使焦平面落在讀下千分表數(shù)值的0.10.15比例處，即為測(cè)量層的位置。6樣品的灌注（1）用吸頭與洗耳球連接裝置盛上蒸餾水沖洗電泳毛細(xì)管（要小

14、心，以免損壞毛細(xì)管）。（2）將毛細(xì)管斜插入裝有被測(cè)樣品的小燒杯中，由于毛細(xì)作用，則整個(gè)管腔內(nèi)充滿了被測(cè)液體。（3）先在電極兩端裝上鹽橋.然后把裝好樣品的毛細(xì)管平放在顯微鏡插板的測(cè)量槽中。裝電極時(shí)，插板要一端傾斜一些，電極先從低端裝入，然后把插板平穩(wěn)地插入恒溫裝置內(nèi)。（4）用魚頭夾連接電壓電極（注意，切勿兩夾碰撞或接觸，以免損壞儀表）。（5）尋找測(cè)量層區(qū)域內(nèi)的清晰的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量。二、細(xì)胞電泳速度的測(cè)定的操作步驟連接電壓輸出引線和加熱接口引線。2打開(kāi)電源開(kāi)頭（在機(jī)的右側(cè)），預(yù)置溫度選25C（撥盤置于“250”，不能撥在“025”）。選擇電泳電壓40V,按A鍵D2顯示電壓（電壓調(diào)節(jié)開(kāi)關(guān)在機(jī)的左側(cè)），

15、A鍵放開(kāi)D2顯示電泳室內(nèi)的溫度。4按D鍵測(cè)量紅細(xì)胞電泳（10個(gè)有效紅細(xì)胞按C鍵測(cè)量血小板電泳（100個(gè)有效血小板）按B鍵測(cè)量淋巴細(xì)胞電泳（100個(gè)有效細(xì)胞）5.按L和R上的移位鍵（MOVE），將不在網(wǎng)格線上的細(xì)胞移到線上。6按L和R下方的計(jì)時(shí)鍵（TIME），觀察在線上清晰細(xì)胞向左移動(dòng)2小格，再向右移動(dòng)2小格。D1顯示左計(jì)和右計(jì)的時(shí)間，兩時(shí)間相等計(jì)時(shí)器自動(dòng)接受，D2減去1,顯示還要測(cè)9個(gè)細(xì)胞，如為無(wú)效就自動(dòng)剔除。7.測(cè)滿10個(gè)有效細(xì)胞后，D2回復(fù)到溫度顯示。D1的時(shí)間為總時(shí)間被自動(dòng)封住，再按計(jì)時(shí)鍵也無(wú)反應(yīng)。按D鍵后顯示電泳時(shí)間，按C鍵顯示電泳率。8重新測(cè)定按復(fù)位E或R鍵。三、電泳速度的計(jì)算根據(jù)所

16、測(cè)得目鏡測(cè)微尺上網(wǎng)格的實(shí)際刻度值，實(shí)驗(yàn)測(cè)定的10個(gè)細(xì)胞共走了40個(gè)方格，為所測(cè)電泳距離的總和S，D1顯示的時(shí)問(wèn)為所測(cè)時(shí)間的總和t,電泳速度以下式表示：V=AS/tV為電泳速度，即細(xì)胞在總時(shí)間（t）內(nèi)移動(dòng)的距離（S）,S可用“m或mm表示。【注意事項(xiàng)】（1）電路接通后要迅速進(jìn)行測(cè)量，以防時(shí)間拖長(zhǎng)，細(xì)胞沉降。（2）用魚頭夾連接電壓電極時(shí)，注意切勿兩夾碰撞或接觸，以免損壞儀器。（3）上機(jī)測(cè)量時(shí)，電泳毛細(xì)管兩端應(yīng)調(diào)至水平位置。（4）電極夾銀電極鹽橋毛細(xì)電泳室間都要接觸緊密，鹽橋及毛細(xì)管電泳室的腔內(nèi)不得造成氣栓，以免產(chǎn)生斷路。（5）每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)清洗電極和毛細(xì)電泳室，干燥后放入小盒內(nèi)。實(shí)驗(yàn)26環(huán)境因

17、素及輻射誘變?nèi)旧w改組的觀察【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)會(huì)鑒別外界條件誘變?nèi)旧w改組的各種類型，為進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)和誘變育種提供細(xì)胞學(xué)方面的依據(jù)。【實(shí)驗(yàn)原理】目前，由于大量新的化合物的合成，原子能的應(yīng)用，各種各樣工業(yè)廢物的排放等都存在污染環(huán)境的可能。欲了解這些因素對(duì)機(jī)體潛在的遺傳危害，就需要一套高度靈敏，技術(shù)簡(jiǎn)單易行的系統(tǒng)來(lái)監(jiān)測(cè)環(huán)境的變化。而生物監(jiān)測(cè)技術(shù)是目前進(jìn)行環(huán)境污染，化學(xué)誘變物質(zhì)以及輻射對(duì)機(jī)體損傷程度監(jiān)測(cè)的一個(gè)主要指標(biāo)。同時(shí)，它也為進(jìn)行輻射防護(hù)、新藥試驗(yàn)、食品添加劑的安全評(píng)價(jià)，以及染色體遺傳疾病和癌癥前期診斷等各個(gè)方面提供了很好的手段。用于進(jìn)行環(huán)境因素、誘變物質(zhì)、輻射損傷的生物檢測(cè)方法包括染色體畸變類型的

18、檢測(cè)和微核的檢測(cè)等。常用于測(cè)試的材料有鴨跖草、水蔥花、韭菜花等的花穗，以及蠶豆根尖和小白鼠等。一般來(lái)說(shuō)，處于分裂過(guò)程的細(xì)胞，對(duì)環(huán)境因素最敏感，尤其是處于減數(shù)分裂時(shí)期的花粉母細(xì)胞。誘變物質(zhì)、環(huán)境污染及輻射對(duì)人類和其它高等生物的遺傳損傷，在細(xì)胞水平表現(xiàn)為染色體畸變，遺傳損傷不僅表現(xiàn)在體細(xì)胞，而且也通過(guò)生殖細(xì)胞擴(kuò)散和積累?！緦?shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑】（一）儀器、用具顯微鏡、解剖針、酒精燈、載玻片、蓋玻片、吸水紙等（二）材料水蔥花、韭菜花或紫露草花穗（三）試劑無(wú)水乙醇、冰醋酸、改良苯酚品紅染色液【方法與步驟】（一）污水對(duì)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期染色體的作用取材選取處于減數(shù)分裂期的花穗若干，剪下58cm的花序。

19、部分插在自來(lái)水中作對(duì)照，另一部分插在污水中，處理1224h，再移到自來(lái)水中恢復(fù)培養(yǎng)24h。固定用卡諾氏固定液固定12h，經(jīng)95%、85%乙醇各30min,70%乙醇4C保存。制片剝?nèi)』ㄋ?，用鑷子輕輕搗碎，用改良苯酚品紅染色510min，去掉殘?jiān)w上蓋玻片。鏡檢用低倍鏡找到分裂期細(xì)胞，再轉(zhuǎn)用高倍鏡，可看到經(jīng)污水處理過(guò)的細(xì)胞中，染色體畸變的類型和微核的數(shù)目，分別要比對(duì)照組高。微核出現(xiàn)的多少，可作為監(jiān)測(cè)環(huán)境污染程度的指標(biāo)。（二）Y-射線對(duì)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期染色體的作用1取材將未開(kāi)放的水蔥花、韭菜花或紫露草花穗（外面仍有膜狀總苞包著）若干進(jìn)行Y射線（劑量為0.258c/kg）輻照處理，處理后在水中

20、恢復(fù)培養(yǎng)12h,然后于上午911時(shí)把穎花剝下，用卡諾氏固定液固定12h，經(jīng)95%、85%乙醇各30min,70%乙醇4C保存。2制片方法同前。3鏡檢觀察染色體的各種畸變現(xiàn)象。（三）CO2激光對(duì)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期染色體的作用取材取上述小花進(jìn)行CO2激光處理，功能密度為20W/cm2,處理12秒后放在水中恢復(fù)培養(yǎng)12小時(shí)，然后用卡諾氏固定液固定12h，70%乙醇4C保存。制片方法同前。鏡檢觀察染色體的各種畸變現(xiàn)象。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】經(jīng)污水、輻照處理的材料，可見(jiàn)到下列畸變類型：染色體團(tuán)聚：染色體膠連成團(tuán)塊，失去染色體的形態(tài)。在細(xì)胞分裂的前期、中期、后期、二分子期、四分子期及單核花粉期均可看到。落后染色體

21、：是由于分裂的細(xì)胞受到損傷（多半是由于紡錘體被破壞），而引起染色體不同步移動(dòng)或者不移動(dòng)造成的。多見(jiàn)于分裂中期和后期，這種現(xiàn)象有可能導(dǎo)致染色體數(shù)目的丟失。無(wú)著絲粒染色體斷片：見(jiàn)于分裂前、中、后期，這種現(xiàn)象多會(huì)造成染色體上某個(gè)基因的缺失。染色體環(huán)：整組染色體膠連成一個(gè)大環(huán)或出現(xiàn)小環(huán)。染色體橋：在細(xì)胞分裂的后期或末期，同源染色體或姊妹染色單體分開(kāi)時(shí)，部分有染色質(zhì)絲粘連，使到分開(kāi)不完全，從而造成染色體橋的出現(xiàn)。這種現(xiàn)象多造成染色體上某個(gè)基因的重復(fù)，有一至多橋。不均等分裂：細(xì)胞分裂結(jié)束時(shí)，產(chǎn)生的不是均等的四個(gè)子細(xì)胞（四分體）而可能是三分體、五分體、六分體、八分體等。微型小孢子：是由于多分體細(xì)胞的胼胝質(zhì)壁

22、破裂后產(chǎn)生的體積比正常小孢子要小的一些孢子。微核：由落后染色體形成的核狀小塊。見(jiàn)于末期、二分子期、四分子期及小孢子期微核是游離于主核外，大小是主核的1/3以下，它的折光率和細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣，已經(jīng)證實(shí)微核率的大小是和污染程度、用藥劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān)。所以微核計(jì)算已成為靈敏度高、技術(shù)簡(jiǎn)便的一種測(cè)試系統(tǒng)。它可用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變、新藥試驗(yàn)研究以及環(huán)境污染程度監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)?！咀鳂I(yè)】繪圖示各種染色體畸變現(xiàn)象并標(biāo)明所處的分裂時(shí)期計(jì)算微核率。實(shí)驗(yàn)35植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?了解和掌握植物組織培養(yǎng)的方法及其要點(diǎn)。2將胡蘿卜貯藏根培養(yǎng)成為愈傷組織。3將菊花花瓣培養(yǎng)成為完整小植

23、株?！緦?shí)驗(yàn)原理】植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是植物細(xì)胞具有全能性，所謂細(xì)胞全能性是指植物體任何一個(gè)細(xì)胞都攜帶著一套發(fā)育成完整植株的全部遺傳信息，在離體培養(yǎng)情況下，這些信息可以表達(dá)，產(chǎn)生出完整植株。要使細(xì)胞所具有的全能性表達(dá)出來(lái)，除了生長(zhǎng)以外，還要經(jīng)過(guò)脫分化和再分化等過(guò)程。分化了的植物根、莖、葉細(xì)胞，通過(guò)脫分化培養(yǎng)可以產(chǎn)生愈傷組織。愈傷組織是一種能迅速增殖的無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞團(tuán)。愈傷組織經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的分化培養(yǎng)，提供不同的營(yíng)養(yǎng)和激素成分，又可再生出完整的小植株。植物組織培養(yǎng)技術(shù)，不僅具有重大的理論意義，而且在生產(chǎn)實(shí)踐中已顯示了廣泛的應(yīng)用前景。實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑】（一）儀器、用具分析天平、超凈工作臺(tái)、

24、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室、剪刀、鑷子、手術(shù)刀、電爐燒杯、試劑瓶、培養(yǎng)瓶、酒精燈、精密pH試紙（二）材料胡蘿卜塊根、菊花花瓣（三）試劑配制培養(yǎng)基的各種化學(xué)試劑藥品（見(jiàn)表8-1）,6-芐基氨基嘌吟（6-BA）、2,4-D、NAA、INNaOH、1NHC1、0.1%升汞、酒精、蔗糖、瓊脂方法與步驟】（一）胡蘿卜塊根的脫分化培養(yǎng)1母液的配制在配制培養(yǎng)基時(shí)，為了使用方便，避免每次配制稱量的麻煩，通常將各種成分配成比培養(yǎng)基需要量大10100X的母液（以MS為例，配制方法見(jiàn)下表）。表8-1MS培養(yǎng)基配方類型成分冷五冷主甘rH耐kr|JXL反注冷+宀配一升培養(yǎng)基的吸取量（ml）可丿1丄口介至丁工作濃度（mg

25、/L）HLmu液稱取量（mg）與丫儀忤積（ml）1丿人1口就（X）大kno3190019000量nh4no3165016500元MgSO47H2O3703700100010100素KHPO241701700CaCl2HO224404400微MnSO4HO4222.32230ZnSO7HO428.6860量HBO336.2620KI0.8383100010010元NaMO”2HO2420.2525CuSO5HO420.0252.5素CoCi6HO220.0252.5鐵Na-EDTA237.337.3100010010鹽rm.FeSO7HO4227.827.8有甘氨酸2.0100機(jī)鹽酸硫胺素0.4

26、20物鹽酸吡哆素0.52550010010質(zhì)煙酸0.525肌醇1005000配制母液時(shí)必須要注意，各種化學(xué)物質(zhì)必須一一充分溶解后才能混合，以避免藥物間出現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生沉淀。某些生長(zhǎng)素，如2,4-D、IAA、NAA等，應(yīng)先用少量95%乙醇溶解，最后才加水定溶。Kt、6-BA、2ip、ZT等細(xì)胞分裂素，應(yīng)先用少量1NHC1或NaOH溶解，最后才加水定容。配好的母液要標(biāo)記好配制日期以及藥物的濃度。2培養(yǎng)基的配制把母液按編號(hào)順序排列好，取大燒杯一個(gè)，先加入約300ml蒸餾水，按設(shè)計(jì)好的培養(yǎng)基分別吸取母液，最后定容到所需的量。調(diào)pH至5.8，每升培養(yǎng)基加入6.5g瓊脂粉和30g蔗糖煮溶。分裝到培養(yǎng)瓶中，

27、封好瓶口。基本培養(yǎng)基種類和附加成分是根據(jù)培養(yǎng)材料和目的來(lái)確定的。下列培養(yǎng)基及附加成分可作為組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中參考依據(jù)。MS培養(yǎng)基附加2,4-D2mg/L和6-BA0.2mg/L，適合胡蘿卜塊根愈傷組織的誘導(dǎo)；Miller或N6培養(yǎng)基附加2,4-D0.5mg/L,適合水稻花藥愈傷組織誘導(dǎo)；而附加NAA0.5-2mg/L和3mg/L6-BA則適合水稻花藥愈傷組織分化為單倍體植株。MS培養(yǎng)基附加NAA0.1mg/L和6-BA3mg/L適合菊花花瓣誘導(dǎo)分化。MS培養(yǎng)基附加NAA0.5mg/L適合多種花卉植物的根分化。3滅菌把分裝好的培養(yǎng)基及接種用具放入高壓消毒鍋進(jìn)行滅菌消毒。當(dāng)壓力升到0.5kg/cm2時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放氣5min后，再把放氣閥關(guān)上，當(dāng)壓力升到1.1kg/cm2或0.11MP