1、伴放線放線桿菌脂多糖對組織特異性單核 / 巨噬細(xì)胞膜表面受體及活性氧、一氧化氮表達(dá)的影響目的研究新西蘭兔四個(gè)部位來源（血液、肺、肝、腹腔）的單核/ 巨噬細(xì)胞對伴放線放線桿菌（Aa）吞噬作用異質(zhì)性，比較在 Aa脂多糖刺激下，正常和高 脂血癥新西蘭兔四個(gè)部位來源的單核/ 巨噬細(xì)胞膜表面受體CD14、 TLR2、 TLR4、SR-A和MHC也表達(dá)的變化以及外源性IL-10對它們的影響，并檢測氧化應(yīng)激反 應(yīng)產(chǎn)物ROSBNO的釋放情況，為研究牙周病與全身系統(tǒng)性疾病的關(guān)聯(lián)提供理論 依據(jù)。方法建立新西蘭兔高脂血癥模型和同一個(gè)體不同組織來源（血液、肺、腹腔、肝臟）單核/ 吞噬細(xì)胞的分離、鑒定、純化及培養(yǎng)研究模

2、型。1.3 只健康新西蘭兔，以流式細(xì)胞術(shù)檢測不同時(shí)間點(diǎn)下單核/ 巨噬細(xì)胞（血液、肺、腹腔、肝臟）吞噬FITC標(biāo)記的Aa吞噬指數(shù)。2.將6只健康和6只高脂 血癥新西蘭兔單核/吞噬細(xì)胞（血液、肺、腹腔、肝臟）分為5組： RPMI1640+單核/巨噬細(xì)胞、1仙g/ml E.coli-LPS 十單核/巨噬細(xì)胞、1 g/ml Aa-LPS+單核/ 巨噬細(xì)胞、100ng/mlIL-10+ 單核/ 巨噬細(xì)胞、100ng/ml IL-10 + 1 g/ml Aa-LPS 單核 / 巨噬細(xì)胞， 通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測膜表面受體CD14、 TLR2、TLR4 SR-A和MHC-I基因表達(dá)的變化。3.用硝

3、酸還原酶法檢測和 DCFH-D發(fā)光檢測單核/巨噬細(xì)胞RO辭口 NO的釋放 情況。 結(jié)果 1. 兔四個(gè)部位單核/ 巨噬細(xì)胞吞噬能力具有差異性： 1.5h 內(nèi)， 隨著孵育時(shí)間增加，AMff口 PM寸Aa吞噬能力逐漸升高，Mo和KC的吞噬能力在1h達(dá)到 高峰；Mo AM PMffi KCS噬功能存在明顯差異，孵育 0.5h吞噬指數(shù)AM PM Mo KG 1.0h 時(shí) AM PM Mo KG 1.5h 時(shí) AM PM KO Mq2.Realtime PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：正常新西蘭兔 Mo AM PM KC受1小g/mlAa-LPS刺激24h后，與空白組相比較 TLR2 SRAF口 MHC寸基因表達(dá)量均

4、上調(diào)(P0.05),除了 Mo的 CD14下調(diào)，KC的 TLR4受抑制(P0.05),其余表 達(dá)均上調(diào)(P0.05)。1g/ml Aa-LPS刺激高脂新西蘭兔 24h后，Mo AM PM KC的CD14 SRAK MHC寸基因表達(dá)都升高(P0.05)。正常和高脂組，外源性100ng/ml IL-10作用于被Aa-LPS活化的單核/巨 噬細(xì)胞后，膜受體CD14 TLR2 TLR4 MHC也基因表達(dá)受到了抑制(P0.05), SRA調(diào)(P0.05) 。3.正常兔和高脂兔組，1仙g/ml Aa-LPS刺激下Mo AM PM KC與空白組比較，都釋放大量 ROS(P0.05) , AM PMffi K

5、C組的NO釋放 量上調(diào) (P0.05) 。IL-10抑制了 Aa-LPS活化的巨噬細(xì)胞上升的RO辱口 NOdC平(P0.05)。結(jié)論 1. 兔不同部位單核/ 巨噬細(xì)胞的功能和表型具有異質(zhì)性，對 Aa 的吞噬能力不同，可能是造成牙周病對不同部位影響不同的重要原因。.正常和高脂血癥狀態(tài)下單核/巨噬細(xì)胞CD14 TLR2 MHC衛(wèi)、SR-A及TLR4 的基因的表達(dá)均存在著部位差異。正常兔1 Ng/ml Aa-LPS刺激下Mo和KC主要為防御性免疫反應(yīng)，特異性免疫反應(yīng)和炎癥效應(yīng)尚未啟動，AM和PM則進(jìn)入炎癥反應(yīng)階段。高脂兔KC處于防御性免疫反應(yīng)，Mo AMff口 PM進(jìn)入炎癥階段。IL-10可以通 過升高SR-A并下降CD14 MHC-I