1、關(guān)于細(xì)胞工程胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)第一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第七章 胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)干細(xì)胞是什么ES/EG細(xì)胞的培養(yǎng)及建系技術(shù)ES/EG細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化誘導(dǎo)分化細(xì)胞的永生化ES/EG細(xì)胞技術(shù)學(xué)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用ES/EG細(xì)胞技術(shù)學(xué)面臨的問(wèn)題和研究趨勢(shì)第二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 一、干細(xì)胞（stem cells）是什么 具有無(wú)限的或延長(zhǎng)的自我更新能力的細(xì)胞 能產(chǎn)生至少一種類型的高度分化的細(xì)胞第三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 從具有的分化潛能上講：-專能干細(xì)胞-多能干細(xì)胞-全能干細(xì)胞第四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 從組織發(fā)生即來(lái)源上講： -

2、胚胎性干細(xì)胞 -成體干細(xì)胞/組織干細(xì)胞第五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月胚胎性干細(xì)胞是一類來(lái)自早期胚胎、原始生殖細(xì)胞等源于胚胎的干細(xì)胞，基本特征是有穩(wěn)定地在體外自我更新、穩(wěn)定地維持正常核型和發(fā)育全能或多能性、能夠分化為屬于三胚層范疇的各種類型分化細(xì)胞，甚至參與個(gè)體發(fā)育。-來(lái)自早期胚胎：胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells, ES）-來(lái)自胚胎生殖嵴中的原始生殖細(xì)胞：胚胎生殖細(xì)胞（embryonic germ cells, EG）-來(lái)自畸胎瘤組織：胚胎性癌細(xì)胞（embryonal carcinoma cells, EC）第六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月19

3、81年，Evens和Martin分別成功的分離和體外培養(yǎng)了小鼠 的胚胎干細(xì)胞；1995年，Thomson等人分離建立了第一株靈長(zhǎng)類動(dòng)物的胚胎 干細(xì)胞；1998年，Thomson等建立了第一株人類胚胎干細(xì)胞；1998年，Shamblott等建立了第一株人類生殖干細(xì)胞；2002年3月，美國(guó)麻省理工學(xué)院科學(xué)家宣布，他們首次利用 人體胚胎干細(xì)胞培育出毛細(xì)血管，證明了胚胎干細(xì)胞技術(shù)在 治療心血管疾病等領(lǐng)域的應(yīng)用潛力；目前已有報(bào)導(dǎo)，ES細(xì)胞在離體適當(dāng)條件下分化為心肌細(xì)胞， 胰島細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞，肝細(xì)胞等。第七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月成體干細(xì)胞（adult stem cells, AS）

4、，也叫作組織干細(xì)胞（tissue stem cells） 是指一群分布在成體組織中處于尚未分化的、具有自我更新并負(fù)有構(gòu)建和補(bǔ)充某種組織的各種類型細(xì)胞潛能的干細(xì)胞。如骨髓的造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞；神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)干細(xì)胞；肝干細(xì)胞；骨骼肌干細(xì)胞等。-造血干細(xì)胞可分化為血液系統(tǒng)的各種細(xì)胞；小腸和皮膚中的干細(xì)胞具有分化、補(bǔ)充和更新小腸和皮膚組織的能力。-骨髓干細(xì)胞除了形成各種血細(xì)胞和衍生于間質(zhì)細(xì)胞的各類細(xì)胞外，還可被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、骨和肝細(xì)胞等不同分化細(xì)胞。第八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 二、ES/EG細(xì)胞的培養(yǎng)建系技術(shù) 分離

5、囊胚的內(nèi)細(xì)胞群與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，ES細(xì)胞非分化增殖分離胚胎生殖腺細(xì)胞胚胎干細(xì)胞的鑒定定向誘導(dǎo)分化功能細(xì)胞第十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、ES/EG細(xì)胞的來(lái)源(1)發(fā)育良好的囊胚，從中分離ICM，進(jìn)一步分離培養(yǎng)ES細(xì)胞(2)從胚胎生殖腺中分離出EG細(xì)胞 從畸胎瘤中分離出EC細(xì)胞治療性克隆即體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移（SCNT）途徑分離培養(yǎng)ES細(xì)胞 第十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、ES/EG細(xì)胞的分化抑制培養(yǎng) 目前常用的細(xì)胞分化抑

6、制物主要有三種:- 飼養(yǎng)層細(xì)胞(feeder layer)- 特殊細(xì)胞的條件培養(yǎng)液(conditioned medium),如BRL(Buffalo rat liver )細(xì)胞條件培養(yǎng)液- 分化抑制因子(differentiation inhibitory factor, DIF ),如白血病抑制因子(leukemia inhitory factor,LIF)第十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)法：常用的飼養(yǎng)層細(xì)胞有下列兩種：（1）MEF細(xì)胞(mouse embryonic fibroblast)，取自各種品系小鼠的12dpc胚胎。經(jīng)剪碎和胰蛋白酶消化，常規(guī)分散細(xì)胞培

7、養(yǎng)為單層散布的成纖維細(xì)胞。（2）STO細(xì)胞，來(lái)自SIM小鼠(S)胚胎的對(duì)硫代鳥嘌呤(T)和烏本苷(O)有抗性的成纖維細(xì)胞系，能分泌干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(stem cell factor,SCF)以及白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)。第十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法：飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備在一定程度上使ES/EG細(xì)胞培養(yǎng)顯得較繁雜。近來(lái)以添加LIF生長(zhǎng)因子或某些特定細(xì)胞的條件培養(yǎng)液至含F(xiàn)CS的正常培養(yǎng)液，借此替代飼養(yǎng)層細(xì)胞：（1）直接在ES細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液中加入重組LIF（2）Buffalo大鼠肝細(xì)胞條件培養(yǎng)液(BRL-CM)（3）2

8、3周幼年大鼠心肌細(xì)胞條件培養(yǎng)液(RH-CM)第十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、ES/EG細(xì)胞系的特性和鑒定（1）形態(tài)學(xué)特征（2）發(fā)育全能性和分化潛能鑒定（3）嵌合體動(dòng)物第十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）形態(tài)學(xué)特征 體外培養(yǎng)小鼠ES/EG細(xì)胞在抑制分化培養(yǎng)中呈現(xiàn)一個(gè)或幾個(gè)核仁、且核質(zhì)比高的圓形或卵圓形細(xì)胞，彼此均呈單層或多層緊密堆積而形成島狀或巢狀群體生長(zhǎng)形態(tài)，組成克隆的細(xì)胞彼此界限不清楚，粘連性強(qiáng)。 人ES與EG細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征有所不同，與小鼠ES/EG也有所不同。單層培養(yǎng)時(shí)，人體ES細(xì)胞呈扁平狀群落，且細(xì)胞界限清楚。第十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于20

9、22年6月（2）發(fā)育全能性和分化潛能鑒定 小鼠和包括人在內(nèi)的靈長(zhǎng)類動(dòng)物全能或多能性胚胎性干細(xì)胞，具有特有的表達(dá)標(biāo)志以及在體內(nèi)外的分化特點(diǎn)。第二十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月干細(xì)胞標(biāo)記鼠類EC鼠類ES鼠類EG人類EC人類ES人類EGSSEA-1 + + + - - +SSEA-3 - - - + + +SSEA-4 - - - + + +TRA-1-60 - - - + + +TRA-1-80 - - - + + +AKP + + + + + +Oct-4 + + + + ？ + 小鼠與人類多能干細(xì)胞標(biāo)記蛋白表達(dá)譜 第二十一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月SSEAs (s

10、tage-specific embryonic antigen): 時(shí)期專一性胚胎抗原TRA-1-60、TRA-1-81: 腫瘤排斥抗原AKP：堿性磷酸酶在小鼠及靈長(zhǎng)類的ES細(xì)胞中活性較高，在已分化細(xì)胞中活性明顯降低； Oct-4: 是生殖系專一性轉(zhuǎn)錄因子。作為和胚胎發(fā)育全能/多能性相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，Oct-4通過(guò)多種調(diào)控機(jī)制激活或抑制不同靶基因的轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞的全能/多能性及未分化狀態(tài)的調(diào)控和維持中發(fā)揮重要作用。端粒酶(telomerase):一類核糖核蛋白，與維持真核細(xì)胞染色體末端的端粒長(zhǎng)度和控制細(xì)胞壽命有關(guān)。人ES細(xì)胞的端粒酶活性高，而分化細(xì)胞一般難以檢測(cè)到；胚胎干細(xì)胞的特異性表達(dá)標(biāo)志：第二

11、十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 ES/EG細(xì)胞在體外被刺激分化為各種類型細(xì)胞是其最基本的 屬性; ES/EG細(xì)胞接種于同一品系的小鼠或免疫缺陷小鼠腹股溝、 眼窩、腹腔等可以形成由內(nèi)胚層、中胚層和外胚層細(xì)胞構(gòu)成 的畸胎瘤。胚胎干細(xì)胞的體內(nèi)、外分化特點(diǎn)：第二十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 組織和器官的細(xì)胞由含有兩個(gè)或兩個(gè)以上基因型構(gòu)建而成的完整個(gè)體稱為嵌合體動(dòng)物（chimaera）。把ES/EG細(xì)胞注入胚泡或與桑椹胚聚集，使其與正常胚胎結(jié)合在一起，并參與宿主胚胎發(fā)育，可形成嵌合體動(dòng)物的各種組織和器官，包含生殖系 嵌合體動(dòng)物可通過(guò)毛色、皮膚顏色等外觀指標(biāo)進(jìn)行判定或是取

12、器官組織進(jìn)行同功酶檢測(cè)(3)嵌合體動(dòng)物第二十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 三、ES/EG細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化第二十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、基本原理 細(xì)胞誘導(dǎo)分化是一個(gè)細(xì)胞與其微環(huán)境相互間復(fù)雜而又精密協(xié)調(diào)的分子細(xì)胞學(xué)過(guò)程，是胚胎正常發(fā)育過(guò)程中重要而基本的現(xiàn)象； ES細(xì)胞是體外研究誘導(dǎo)分化的較理想模型，在體外被誘導(dǎo)分化的途徑可能與在體胚胎細(xì)胞的不完全相同； 在體胚胎的細(xì)胞分化過(guò)程中，誘導(dǎo)作用的結(jié)果不只是決定于各種誘導(dǎo)物質(zhì)的性質(zhì)和專一性，同時(shí)也決定于被誘導(dǎo)細(xì)胞的反應(yīng)能力(competence)。后者受遺傳、發(fā)育潛能等內(nèi)在因素的限制；第二十六張，PPT共五十九頁(yè)，

13、創(chuàng)作于2022年6月 ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)中，所用誘導(dǎo)物質(zhì)繁多，誘導(dǎo)模式 不盡相同，按其作用機(jī)理大致分為兩類：- 使被誘導(dǎo)細(xì)胞可逆性輕度損傷，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞分化 無(wú)機(jī)物、有機(jī)酸、醇、亞甲基鹽、硫氫化物等- 誘導(dǎo)物通過(guò)其與被誘導(dǎo)細(xì)胞表面的受體結(jié)合而誘導(dǎo)細(xì)胞分化 類固醇激素、維甲酸衍生物、多肽生長(zhǎng)因子等 同一種誘導(dǎo)物可以誘導(dǎo)出不同類型細(xì)胞或變化多端的構(gòu)造，不僅涉及誘導(dǎo)劑的濃度差別、誘導(dǎo)作用模式和微環(huán)境的未知因素等，而且可能與被誘導(dǎo)細(xì)胞本身的發(fā)育潛能和對(duì)誘導(dǎo)劑的反應(yīng)性等差別有關(guān)。第二十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化途徑可分為：- 譜系分化（lineage dif

14、ferentiation），有利于認(rèn)識(shí)組織 譜系細(xì)胞分化機(jī)理和全過(guò)程。 ES細(xì)胞 譜系祖細(xì)胞 譜系定型細(xì)胞 終末分化細(xì)胞- 定向分化（committed differeniation），需設(shè)法控制導(dǎo)向 產(chǎn)生單一類型的分化細(xì)胞。 對(duì)ES細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞專一的轉(zhuǎn)錄因子、標(biāo)志基因、細(xì)胞分化因子 結(jié)合報(bào)告基因和誘導(dǎo)條件選擇等手段，探索定向誘導(dǎo)分化途徑第二十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化的基本方法單層ES細(xì)胞培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化：較難分化為單一類型的細(xì)胞ES細(xì)胞擬胚體形成和誘導(dǎo)分

15、化：相對(duì)誘導(dǎo)分化細(xì)胞類型較 單一,具體方法有： （1） 軟瓊脂培養(yǎng) （2） 懸滴培養(yǎng) 第三十一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月制備ES單細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)皿蓋上接種20ul/滴，直徑10cm的培養(yǎng)皿蓋蓋上帶有懸浮細(xì)胞小滴的蓋子培養(yǎng)皿內(nèi)加PBS培養(yǎng)皿邊緣用膜封 置37，5CO 2培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d后，轉(zhuǎn)移擬胚體至含細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)皿或微孔板進(jìn)一步培養(yǎng)然后,移放入鋪有0.1%白明膠的培養(yǎng)皿或微孔板內(nèi)在培養(yǎng)液中再培養(yǎng)可被誘導(dǎo)分化為不同類型細(xì)胞 ES細(xì)胞體外懸滴培養(yǎng)第三十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化舉例 造血細(xì)胞 內(nèi)皮細(xì)胞與血管 神經(jīng)細(xì)胞 脂肪細(xì)胞 心肌和

16、其他肌肉細(xì)胞 軟骨細(xì)胞 胰島細(xì)胞第三十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月小鼠ES細(xì)胞擬胚體在體外可以分化為類似于早期胚胎卵黃囊血島樣的結(jié)構(gòu)并分化產(chǎn)生各種造血系統(tǒng)的細(xì)胞：用胰蛋白酶消化小鼠ES細(xì)胞擬胚體成單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)干細(xì)胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)和條件培養(yǎng)液處理，誘導(dǎo)其定向分化為造血干細(xì)胞； 用原代骨髓基質(zhì)細(xì)胞作飼養(yǎng)層和SCF及IL-6細(xì)胞因子處理 可進(jìn)一步使ES細(xì)胞來(lái)源的造血干細(xì)胞分化為B淋巴細(xì)胞系。造血細(xì)胞第三十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月內(nèi)皮細(xì)胞與血管小鼠ES細(xì)胞擬胚體在體外可以分化為類似于早期胚胎卵黃囊血島樣的結(jié)構(gòu)，其中也有內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)：利用經(jīng)轉(zhuǎn)化

17、生長(zhǎng)因子1(TGF-1)基因轉(zhuǎn)染的小鼠ES細(xì)胞在含RA培養(yǎng)液中經(jīng)懸滴培養(yǎng)形成擬胚體； 再繼續(xù)貼壁培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)擬胚體周圍呈輻射狀長(zhǎng)出許多血管樣結(jié)構(gòu)。將外源重組TGF-1添加至培養(yǎng)液，同樣也能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞組成的血管樣結(jié)構(gòu)。第三十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月心肌和其它肌肉細(xì)胞 懸浮或懸滴培養(yǎng)的小鼠ES細(xì)胞擬胚體在RA誘導(dǎo)條件下貼壁生長(zhǎng)數(shù)天，常出現(xiàn)某些分化細(xì)胞集落具有節(jié)律性自發(fā)收縮的現(xiàn)象，顯然是肌細(xì)胞：DMSO誘導(dǎo)ES細(xì)胞擬胚體可以形成心肌、平滑肌和骨骼肌等多種類型肌細(xì)胞，用肌肉專一性的調(diào)節(jié)因子MyoD基因轉(zhuǎn)染ES細(xì)胞并結(jié)合DMSO誘導(dǎo)處理，額外表達(dá)MyoD基因的ES細(xì)胞主要分化為骨骼肌

18、且常融合成肌管。第三十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月ES細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化是至今仍未解決、正在探索中的問(wèn)題。根據(jù)國(guó)外少數(shù)報(bào)道和國(guó)內(nèi)的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)ES細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞專一的轉(zhuǎn)錄因子、標(biāo)志基因或是有關(guān)細(xì)胞分化因子等遺傳操作，并結(jié)合誘導(dǎo)條件選擇等手段，是一條可能的探索ES細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的途徑。第三十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 四、ES/EG細(xì)胞誘導(dǎo)分化細(xì)胞的永生化 尋找建立ES/EG細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的分化細(xì)胞永生化途徑是目前ES/EG細(xì)胞研究領(lǐng)域待解決的問(wèn)題。第三十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 五、ES/EG培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化的意義哺乳類發(fā)育的體外模型人體的基因和細(xì)胞

19、治療組織工程的種子細(xì)胞來(lái)源第三十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月哺乳動(dòng)物早期胚胎一般體積很小，又在宮內(nèi)發(fā)育，在體內(nèi)研究胚胎發(fā)育和各類細(xì)胞分化及其機(jī)理幾乎不可能；ES細(xì)胞具有完整的發(fā)育潛能性，而且對(duì)所有調(diào)節(jié)正常發(fā)育的信號(hào)具有應(yīng)答能力。雖然ES細(xì)胞體外分化途徑和機(jī)制與在體胚胎不完全相同，但在分子水平有共同或相似之處，是研究特定類型細(xì)胞分化、某些前體細(xì)胞起源和細(xì)胞譜系演變較理想的實(shí)驗(yàn)體系；許多國(guó)家在法律上禁止以克隆或復(fù)制人為目的的前提下，已允許將人ES細(xì)胞類似于小鼠ES細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)一樣，用于研究人類胚胎發(fā)育、分化和調(diào)節(jié)信號(hào)等事件。哺乳類發(fā)育

20、的體外模型第四十一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 人體的基因和細(xì)胞治療 這里的基因治療是指用遺傳改造過(guò)的人體細(xì)胞直接移植或輸入病人體內(nèi)，達(dá)到控制和治愈疾病為目的的治療手段，又稱細(xì)胞治療。第四十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月目前常說(shuō)的基因治療技術(shù)雖然能把編碼正常序列的基因?qū)?突變細(xì)胞而使突變基因的功能得到糾正，但導(dǎo)入基因的整合 和表達(dá)難以精確控制，特別是基因插入后對(duì)其他基因產(chǎn)生的 效應(yīng)尚無(wú)法預(yù)知。更大問(wèn)題是，許多被用作基因操作的細(xì)胞 在體外不易穩(wěn)定地被轉(zhuǎn)染和增殖傳代；ES細(xì)胞是基因治療的較理想的靶細(xì)胞，經(jīng)遺傳操作后一般仍 能穩(wěn)定地在體外增殖傳代，克服了目前基因治療中需

21、要大量 靶細(xì)胞來(lái)源的主要問(wèn)題。第四十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月定向誘導(dǎo)分化，選擇治療因子基因表達(dá) 人ES細(xì)胞 基因操作（克服免疫學(xué)障礙） 多種MHC組合 的ES細(xì)胞庫(kù) 組織譜系干細(xì)胞（如造血干細(xì)胞） 功能性分化細(xì)胞（如神經(jīng)細(xì)胞）移植移植 不同類型疾病的宿主 基因組被改造 的ES細(xì)胞異源性基因表達(dá) 基因修飾 基因敲除、敲入定向誘導(dǎo)分化選擇 組織譜系干細(xì)胞或功能性分化細(xì)胞移植圖2-2-1 用于基因和細(xì)胞治療的人ES細(xì)胞工程示意圖基本策略1第四十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基本策略2欲接受細(xì)胞治療患者的 體細(xì)胞核導(dǎo)入去核卵細(xì)胞體外發(fā)育 胚泡期專用ES細(xì)胞 特化細(xì)胞分

22、離培養(yǎng)體外誘導(dǎo)分化 回輸?shù)谒氖鍙?，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞治療的臨床應(yīng)用前景神經(jīng)系統(tǒng)疾病骨和軟骨疾病血液病肝病第四十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月神經(jīng)系統(tǒng)疾病 根據(jù)小鼠ES/EG細(xì)胞研究資料，由于各種類型神經(jīng)細(xì)胞因某種原因死亡而成熟神經(jīng)細(xì)胞又不能分裂、補(bǔ)充和替代死亡細(xì)胞引起的神經(jīng)系統(tǒng)疾病如Parkinsons疾病，Alzheimers病、多發(fā)性硬化癥等，有望通過(guò)人ES/EG細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞治療。 新近，產(chǎn)生多巴胺的神經(jīng)細(xì)胞已能從小鼠ES細(xì)胞衍生而來(lái)，為細(xì)胞治療Parkinsons病的ES細(xì)胞來(lái)源問(wèn)題提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第四十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月骨

23、和軟骨疾病ES/EG細(xì)胞可能在體外被誘導(dǎo)為骨和軟骨，這些細(xì)胞被導(dǎo)入骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)軟骨損傷區(qū)域，或因骨折、手術(shù)而引起的較大骨隙中，這類從ES細(xì)胞衍生的骨和軟骨細(xì)胞在被移植部位自我修復(fù)的優(yōu)點(diǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)現(xiàn)行的組織移植。第四十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月血液病ES和造血干細(xì)胞研究有助于產(chǎn)生供細(xì)胞移植用的、不含有 鐮刀狀血球突變的血細(xì)胞。第四十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月肝病利用肝干細(xì)胞移植治療肝病取得了重要進(jìn)展。第五十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 組織工程的種子細(xì)胞來(lái)源 人體ES細(xì)胞技術(shù)學(xué)的發(fā)生和發(fā)展，有望解決目前組織或器官修復(fù)中的難題。第五十一張，PP

24、T共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 設(shè)想是選擇與人體細(xì)胞兼容性較好的生物材料，按缺損組織或器官的要求設(shè)計(jì)制成模型或支架放在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中，使ES細(xì)胞或其定向誘導(dǎo)分化細(xì)胞沿著模型或支架不斷地生長(zhǎng)擴(kuò)增，構(gòu)建成新的組織或器官。但ES細(xì)胞定向分化和構(gòu)成組織和器官中細(xì)胞類型的復(fù)雜性等諸多問(wèn)題尚待解決； 目前工作是著重于從成年或幼年器官和組織的碎片中分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增某一類型的組織干細(xì)胞，經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)擴(kuò)增有可能作為組織工程的種子細(xì)胞來(lái)源。例如，從骨髓分離和擴(kuò)增間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)，用作骨折愈合、肌腱韌帶修復(fù)、肌肉再生和造血重建等組織工程的種子細(xì)胞。第五十二張，PP

25、T共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 六、ES細(xì)胞研究面臨的問(wèn)題和研究趨勢(shì)-如何解決用于人類胚胎干細(xì)胞研究的胚胎來(lái)源問(wèn)題？-如何分離、純化干細(xì)胞？-如何保持體外培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞的全能性，并控制定向誘導(dǎo)分化？-如何使ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化產(chǎn)生的分化細(xì)胞永生化？-分化后的細(xì)胞是否有致瘤性？-如何使干細(xì)胞在體外發(fā)育成完整的器官？-如何克服分化細(xì)胞移植后仍有可能發(fā)生的免疫排斥？-有關(guān)倫理道德和法律以及商業(yè)應(yīng)用等問(wèn)題第五十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月-改善ES細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件，建立更有效、更簡(jiǎn)便的獲得 ES細(xì)胞的方法；-定向誘導(dǎo)分化成特定類型細(xì)胞，用于臨床疾病治療并解決 免疫排斥和潛在的致腫瘤的問(wèn)題；-成體干細(xì)胞的橫向分化的能力以及與胚胎干細(xì)胞的比較： 成體干細(xì)胞能否替代胚胎干細(xì)胞？第五十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月嵌合體一詞的英文是chimera，源于希臘神話，是指獅子頭、山羊身和蛇尾的雌性怪物。有關(guān)嵌合體神話在各國(guó)文化中都有嵌合體的科學(xué)概念則是，任何由兩個(gè)或兩個(gè)以上遺傳上不同的組織構(gòu)成的機(jī)體。它可以是任何不同物種的混合，但目前較關(guān)注的是動(dòng)物與人的嵌合體。嵌