1、第 頁細菌形態(tài)學檢查法細菌的形態(tài)學檢查是細菌檢驗中極為重要的基本方法之一，包括不染色標本檢查法和染色標本檢查法鏡檢可以迅速了解標本中有無細菌及大致的菌量，根據細菌形態(tài)、結構和染色性有助于對病原菌的初步識別和分類，為進一步作生化反應、血清學鑒定提供依據。對臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義。一、顯微鏡在細菌的形態(tài)學檢查中以光學顯微鏡為常用，借助顯微鏡放大至1000倍左右可以觀察到細菌的一般形態(tài)和結構，至于細菌內部的超微結構，則需經電子顯微鏡放大數萬倍以上才能看清。檢查細菌常用的顯微鏡有以下幾種：1.普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡通常以可見光為光源，顯微鏡的最大分辨率為波長的一半，即0.25m，

2、而肉眼所能看到的最小形象為0.2mm，故在普通光學顯微鏡下用油鏡放大1000倍，一般細菌大于0.25m，故用普通光學顯微鏡均能清楚看到。2.暗視野顯微鏡用特制的暗視野集光器代替普通光學顯微鏡上的明視野集光器，暗視野集光器的中央為不透光的遮光板，光線不能直接射入鏡筒，從集光器四周邊緣斜射到標本部位的光線，經菌體散射后而進入物鏡。故在強光的照射下，在暗的背景中看到發(fā)亮的菌體，明暗反差提高了觀察的效果，多用于檢查不染色的活細菌和螺旋體的形態(tài)及運動觀察。3.相差顯微鏡相差顯微鏡依據光波穿過標本中密度不同的部位時，引起光相差異的原理，利用相差板的光柵作用，將光相的差異轉換成光的強度的差異，使細菌中的結構

3、呈現明、暗對比。本法可用于檢查細菌的內部結構。由于細胞各部分的折射率和厚度的不同，光線通過這種標本時，直射光和衍射光的光程就會有差別。隨著光程的增加或減少，加快或落后的光波的相位會發(fā)生改變（產生相位差）。光的相位差人的肉眼感覺不到，但相差顯微鏡能通過其特殊裝置環(huán)狀光闌和相板，利用光的干涉現象，將光的相位差轉變?yōu)槿搜劭梢圆煊X的振幅差（明暗差），從而使原來透明的物體表現出明顯的明暗差異，對比度增強，使我們能比較清楚的觀察到普通光學顯微鏡和暗視野顯微鏡下都看不到或看不清的活細胞及細胞內的某些細微結構。4.熒光顯微鏡熒光顯微鏡以紫外光為光源，能激發(fā)熒光物質發(fā)光使之成為可見光。細菌經熒光色素染色后，置于

4、熒光顯微鏡下，即可激發(fā)熒光，因此在暗色的背景下可以看到發(fā)射熒光的細菌。由于紫外光的波長較短（0.30.4m），故分辨率得到進一步提高。熒光顯微鏡還廣泛應用于免疫熒光技術中。衣原體免疫熒光染色雙球菌免疫熒光染色5.電子顯微鏡以電子束為光源，其波長極短（0.005nm），分辨能力大大提高，電磁圈代替普通顯微鏡的光學放大系統(tǒng)，放大倍數可達數萬至數十萬倍，能分辨1nm的物體，細菌的表面形態(tài)和內部超微結構均能清楚地顯現。電子顯微鏡有透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡。前者適于觀察細菌內部的超微結構，后者適于對細菌表面結構及附件的觀察。二、不染色細菌標本的檢查主要用于檢查生活狀態(tài)下細菌的動力及運動狀況。常用的

5、方法有壓滴法和懸滴法，用暗視野顯微鏡則效果更好。細菌如有動力。可看到細菌自一處移至另一處，有明顯的方向性位移；細菌如無動力，受水分子撞擊細菌呈現布朗運動，只在原地顫動而無位置的改變。在臨床上，有時通過不染色標本的動力檢查可對某些病原菌作出初步鑒定。如疑似霍亂患者，取其水樣便，制成懸滴標本，于暗視野下觀察細菌動力，若見穿梭似流星狀運動的細菌，同法重新制備另一標本并加入O1群霍亂弧菌診斷血清，如果原運動活潑的現象停止為制動試驗陽性，可初步推斷為“疑似O1群霍亂弧菌”。三、細菌染色標本的檢查細菌染色標本在普通光學顯微鏡下可以觀察細菌的形態(tài)、大小、排列、染色性、特殊結構（芽胞、莢膜、鞭毛）、異染顆粒等

6、。因為在接近中性的環(huán)境中細菌都帶有負電荷，易與帶正電荷的堿性染料結合，故常用堿性染料如亞甲藍、結晶紫、堿性復紅等染色細菌。細菌標本經染色后，除能清楚看到細菌的形態(tài)、大小、排列方式外，還可根據染色反應將細菌進行分類，因此染色標本的檢查在細菌的鑒定中應用最廣，具非常重要的作用。細菌染色的基本程序：涂片、干燥、固定染色（媒染）（脫色）（復染）。（一）常用染料用于細菌染色的染料，本身能解離，解離后的染料可以與被染物結合生成鹽類，使之著色。根據染料的帶電情況，可將染料分為堿性和酸性兩大類。此外，還有復合染料。1.堿性染料電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負電荷的被染物結合。由于細菌的等電點在pH25之間，在

7、堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細菌均帶負電荷，易與帶正電荷的染料結合而著色。常用的堿性染料有堿性復紅、結晶紫、亞甲藍等。2.酸性染料電離后顯色離子帶負電荷，易與帶正電荷的被染物結合。一般情況下細菌都帶有負電荷故不易著色。如果降低菌液的pH使細菌帶正電荷，則可被染色。酸性染料通常用來染細胞漿，而很少用于細菌的染色。常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。3.復合染料（中性染料）及熒光染料復合染料是堿性染料和酸性染料的復合物，如瑞氏染料（伊紅亞甲藍）、吉姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料如熒光素標記的抗體。這些染色常用于某些特殊的染色技術中。（二）常用的染色方法在細菌感染標本的檢查中，臨床上常用的染色方法有革蘭

8、染色、抗酸染色和熒光染色。1.單染色法用一種染料將細菌和周圍物體染成同一種顏色，稱為單染色法。細菌經單染色法處理后，可觀察其形態(tài)、排列、大小及簡單的結構，但不能顯示各種細菌染色性的差異。2.復染色法用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱為復染色法或鑒別染色法。常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。（1）革蘭染色：本法是細菌學中最經典、最常用的染色方法。通過革蘭染色將所有細菌分為（G+菌和G-菌）兩大類，可初步識別細菌，縮小范圍，有助于進一步鑒定。革蘭染色法示意革蘭染色除用以鑒定細菌外，病原菌革蘭染色特性可為臨床選擇用藥提供參考，幫助臨床制訂有針對性的治療方案。因為G+菌與G-菌對一些抗生素表現出不同的

9、敏感性，且其致病物質（前者產生外毒素而后者多產生內毒素）及其作用機制不同。（2）抗酸染色：抗酸染色也可將細菌分為兩大類：即抗酸性細菌和非抗酸性細菌。將有肺結核癥狀病人的痰標本，制成涂片后，作萋-納染色鏡檢，根據所見結果即可報告“找到（未找到）抗酸菌”。對臨床疾病的診斷和治療具有重要參考價值。（3）熒光染色：熒光染色法敏感性強，效率高而且容易觀察結果，在臨床細菌鑒定中有很大的實用價值。如痰標本涂片、固定，用熒光染料金胺O法（也稱金胺O-羅丹明B法）染色，以熒光顯微鏡檢查，在暗背景中可觀察到呈金黃色熒光的菌球。另外還有鞭毛染色、異染顆粒染色等。鞭毛染色后于顯微鏡下可觀察到菌體上有無鞭毛、鞭毛的位置

10、及數量，在細菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。疑為白喉棒狀桿菌感染，進行涂片檢查，除證實為革蘭陽性典型棒狀桿菌外，還須用異染顆粒染色法，鏡檢異染顆粒，方可初步報告“檢出形似白喉棒狀桿菌”，為臨床早期診斷提供依據。習題檢查細菌動力常用A.壓滴法B.懸滴法C.毛細管法D.革蘭染色法E.抗酸染色法正確答案B答案解析檢查細菌動力常用懸滴法。習題革蘭染色脫色時所選用乙醇濃度為A.50%B.75%C.85%D.95%E.100%正確答案D答案解析革蘭染色脫色時所選用乙醇濃度為95%。習題細菌L型檢查常用的染色方法為A.莢膜染色法B.芽胞染色法C.細胞壁染色法D.革蘭染色法E.抗酸染色法正確答案C答案解析細菌L型檢查常用的染色方法為細胞壁染色法。習題觀察細菌鞭毛、芽胞常用的染色法A.墨汁染色法B.吉姆薩染色法C.特殊染色法D.革蘭染色法E.抗酸染色法正確答案C答案解析觀察細菌鞭毛、芽胞常用的染色法特殊染色法。習題觀察細菌內部的超微結構需要采用A.熒光顯微鏡B.暗視野顯微鏡C.電子顯微鏡D.相差顯微鏡E.普通光學顯微鏡正確答案C答案解析觀察細菌內部的