石斛總DNA提取課件_第1頁
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文檔簡介

1、石斛總DNA提取步驟一、材料二、DNA提取方法三、DNA檢測四、注意事項及改進方法材料 實驗共用兩種石斛，其一是鐵皮石斛，其二是霍山石斛。均采自于霍山縣太平畈鄉(xiāng)。DNA提取方法welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience1、打開水浴鍋，檢查水位，調(diào)節(jié)溫度至65，預熱2x CTAB提取緩沖液；2、取干燥25-50 mg植物組織材料至2.0 mL 離心管中，加入滅菌的磁珠在球磨機上粉碎組織；3、向管內(nèi)加入900 L預熱（65）的CTAB提取緩沖液，再加入10 L（1d）-巰基乙醇

2、和少許PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)，置于65水浴保溫40-90 min，其間翻動搖2-3次混勻；DNA提取方法welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience4、冷卻至45以下，加等體積的氯仿/異戊醇，溫和搖動使之混勻，使成乳狀液。室溫，12000 rpm離心10min；5、靜置分層后，將700L上層清液吸入另一干凈的EP管中，加入700L氯仿/異戊醇，溫和搖動使之充分混勻。室溫，12000 rpm離心10 min；6、吸取500 L上清至一干凈的1.5 mL Ep管中，加入330 L異丙醇（約占上清液的2/3體積），-20放置30 min；7、高速冷凍離心機調(diào)至4，12000 rpm離心10 min，棄上清；實驗的問題在石斛總DNA提取過程中常出現(xiàn)雜質(zhì)干擾DNA純度的現(xiàn)象，如含有酚類雜質(zhì)的DNA沉淀物多成黃色或者褐色難以溶解于TE液或雙蒸水中。石斛由于含有較多的多糖，因此在提取中多糖常與DNA一起沉淀，這種沉淀會難溶與水因此會影響PCR擴增。實驗所采用的改良版C

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