1、弓狀核損毀對小鼠ghrelin餐前分泌峰的影響弓狀核損毀對小鼠ghrelin餐前分泌峰的影響【關(guān)鍵詞】弓狀核;ghrelin;小鼠【摘要】目的觀察損毀新生小白鼠弓狀核后是否會(huì)引起血漿ghrelin程度的變化。方法取第12周正常對照小鼠和谷氨酸單鈉(sg)處理的小鼠，內(nèi)眥取血，酶聯(lián)免疫分析(eia)法測血漿ghrelin程度;小鼠弓狀核冷凍切片，甲酚紫染色觀察尼氏體變化;取小鼠胃體黏膜組織，estenblt檢測prghrelin蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果sg處理組小鼠下丘腦弓狀核尼氏體神經(jīng)元數(shù)量明顯少于正常對照組小鼠(t=5.21,p0.01)。兩組小鼠血漿ghrelin程度在禁食前后均有明顯變化，但

2、兩組小鼠之間比擬差異無顯著性。與禁食前相比，禁食48h后兩組小鼠胃體黏膜組織中prghrelin蛋白表達(dá)程度明顯升高，但禁食前后兩組小鼠之間比擬差異無顯著性。結(jié)論下丘腦弓狀核對sg處理的小白鼠血漿ghrelin程度的調(diào)控并不是必需的?！娟P(guān)鍵詞】弓狀核;ghrelin;小鼠keyrdsaruatenuleus;ghrelin;ieghrelin是由胃黏膜x/a內(nèi)分泌細(xì)胞釋放的一種“生長素促分泌素(ghs)，是ghs受體的內(nèi)源性配體1。最初觀察到ghrelin具有強(qiáng)烈刺激生長素分泌的作用，隨后很快發(fā)現(xiàn)它可刺激攝食和新陳代謝2。包括人類在內(nèi)的多種動(dòng)物給予ghrelin后均增加其攝食量。ghrelin

3、為迄今惟一的由胃腸道分泌的饑餓激素，是啟動(dòng)攝食的饑餓信號。無論是人還是其他動(dòng)物，血漿ghrelin都有一個(gè)餐前分泌峰3，而進(jìn)食后出現(xiàn)一個(gè)餐后抑制。另外，許多文獻(xiàn)報(bào)道新生鼠給予谷氨酸單鈉(sg)處理可選擇性地?fù)p毀弓狀核npy/agrp神經(jīng)元4，luquet等5報(bào)道弓狀核npy/agrp神經(jīng)元為成年鼠所必須，而新生鼠弓狀核損毀后攝食正常。本研究旨在觀察損毀新生小鼠弓狀核后是否會(huì)引起血漿ghrelin程度的變化。1材料和方法1.1動(dòng)物分組及處理新生安康昆明種小白鼠32只，雌雄不限，由青島市藥檢局提供。隨機(jī)分為正常對照組和sg處理組，每組16只。sg處理組小鼠出生后隔日(第1、3、5、7和9天,共5次

4、)于頸部皮下注射sg(4g/g體質(zhì)量)，而正常對照組只注射同體積的生理鹽水。于第4周斷乳后，小鼠自由進(jìn)食、飲水，自然晝夜節(jié)律光照。1.2標(biāo)本采集12周后，兩組小鼠經(jīng)乙醚麻醉后，分別于禁食前、禁食48h、進(jìn)食1h后內(nèi)眥各取血0.5l，放入已預(yù)先參加edta(2g/l)及抑肽酶(5105u/l)處理的ep管中，4下3000r/in離心15in，取上清液，于-80保存。正常對照組和sg處理組小鼠隨機(jī)再分為禁食前、禁食48h組，每組各8只，所有小鼠在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)采用頸椎脫臼法處死，結(jié)扎胃上下兩端，速取約50g胃體部組織，立即行液氮速凍，24h后轉(zhuǎn)移至-80冰箱，以備ghrelin免疫印跡實(shí)驗(yàn)。然后小鼠

5、經(jīng)主動(dòng)脈灌注，斷頭取腦組織并以40g/l多聚甲醛溶液浸泡24h，分別以200、300g/l蔗糖作用24h;液氮速凍，冷凍切片機(jī)切片，片厚為20，置于-80儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?.3甲酚紫染色切片浸于體積分?jǐn)?shù)1.00氯仿中約30in，體積分?jǐn)?shù)1.00丙酮中約15in，體積分?jǐn)?shù)1.00乙醇30s，體積分?jǐn)?shù)0.95乙醇30s，體積分?jǐn)?shù)0.70乙醇30s，超純水清洗3次;10g/l焦油紫染色10in，超純水清洗3次;體積分?jǐn)?shù)0.70乙醇60s，體積分?jǐn)?shù)0.95乙醇60s，體積分?jǐn)?shù)1.00乙醇60s，體積分?jǐn)?shù)1.00氯仿5s，分化劑約15s;體積分?jǐn)?shù)0.95乙醇30s，體積分?jǐn)?shù)1.00乙醇60s(共2次)，二甲苯

6、5in(共2次)，中性樹膠固封。1.4酶聯(lián)免疫分析(eia)法測定血漿ghrelin濃度1.5esternblt測定小鼠胃黏膜prghrelin蛋白表達(dá)1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss16.0及pps1.57軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，組間比擬采用t檢驗(yàn)和方差分析，以p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1甲酚紫染色sg處理組小鼠下丘腦弓狀核切片平均吸光度值(0.240.09)明顯低于正常對照組的(0.830.11)，差異有顯著性(t=5.21,p0.01)。2.2各組小鼠血漿ghrelin程度比擬sg處理組小鼠在禁食48h后血漿ghrelin程度也明顯高于禁食前，進(jìn)食后血漿ghrel

7、in程度又明顯降低(f=5.031，p0.01);正常對照組小鼠在禁食48h后血漿ghrelin程度明顯高于禁食前，進(jìn)食后血漿ghrelin程度又明顯降低(f=2.650，p0.05)。sg處理組與正常對照組小鼠比擬，無論是在禁食前、禁食48h，還是進(jìn)食后，血漿ghrelin程度差異均無顯著性。見表1。2.3各組小鼠胃黏膜prghrelin程度比擬sg處理組及正常對照組小鼠禁食48h后胃黏膜組織prghrelin蛋白表達(dá)分別為1.410.12、1.320.14，禁食前分別為0.820.09、0.710.09，兩組小鼠在禁食48h后胃黏膜組織prghrelin蛋白表達(dá)均明顯高于禁食前(t=4.3

8、9、3.54，p0.01)。而兩組小鼠之間相比擬，在禁食前、后胃黏膜組織prghrelin蛋白表達(dá)程度差異均無顯著性。見圖1。表1禁食前后兩組小鼠血漿ghrelin程度3討論相比擬而言，進(jìn)食對血漿ghrelin餐后抑制研究比擬詳盡，認(rèn)為其餐后抑制可能是攝入營養(yǎng)物質(zhì)后所產(chǎn)生飽感效應(yīng)的機(jī)制之一，此餐后抑制和飽感信號k有協(xié)同作用，從而終止進(jìn)食。三大營養(yǎng)物質(zhì)，以葡萄糖引起餐后抑制最強(qiáng)，而以脂肪最弱。進(jìn)一步研究說明，并非營養(yǎng)物質(zhì)入胃或胃擴(kuò)張，而是營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入十二指腸或小腸介導(dǎo)此餐后抑制8。本文旨在觀察新生小鼠皮下注射sg導(dǎo)致下丘腦弓狀核大局部神經(jīng)元受到破壞后，是否使血漿ghrelin程度發(fā)生改變。結(jié)果顯示，無論是sg處理的小白鼠，還是正常對照小白鼠，禁食48h后，血漿ghrelin程度照舊比根底程度升高明顯，餐前分泌峰照舊存在;再進(jìn)食后血漿ghrelin程度又明顯降低。且兩組小白鼠胃黏膜ghrelin前體蛋白prghrelin在禁食前后亦有明顯變化，