1、選修 1生物技術(shù)實(shí)踐學(xué)問(wèn)點(diǎn)歸納試驗(yàn)1大腸桿菌的培育和分別 生物、原生生物和某些真菌。細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物，有細(xì)胞壁肽聚糖、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)， 無(wú)成型的細(xì)胞核，只有一環(huán)狀DNA 分子擬核。以分裂二分裂的方式生殖，分裂速度很快。 顏色和革蘭氏陰性菌兩大類，區(qū)分在細(xì)胞壁的成分不同。大腸桿菌是革蘭氏陰性細(xì)胞壁薄，有莢膜、兼性厭氧的腸道桿菌。 高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一上劃線，在劃線的過(guò)程中菌液漸漸削減，細(xì)菌也漸漸削減 將接種后的固體培育基培育 1020 小時(shí)后，一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞就會(huì)生殖成很多細(xì)菌細(xì)胞，形成菌落， 如抗氨芐青霉素基因有抗性基因，所以在劃線后只有存在抗性基因的工程菌能生存下來(lái)。10-510-

2、7之間，然后去 0.1ml 不同稀釋度的 下，可產(chǎn)生相互分開(kāi)的菌落。通常每個(gè)培育皿中有20 個(gè)以內(nèi)的單菌落為最適宜。將每個(gè)菌落分別接種在斜面上擴(kuò)增培育后，再做功能性試驗(yàn)。劃線分別法，方法簡(jiǎn)潔；涂布分別法，單菌落更易分開(kāi)，但操作簡(jiǎn)單。 是無(wú)菌的，轉(zhuǎn)移培育基、倒平板、接種、平板劃線、平板稀釋涂布等操作中的每一步都要做到無(wú)菌防止雜菌污染。進(jìn)展恒溫培育時(shí)，要將培育皿倒置，是由于培育基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式 集中，菌落見(jiàn)相互影響，很難在分成單菌落，達(dá)不到分別的目的。細(xì)菌擴(kuò)大培育要用LBLB固體培育基常用于微生物分別、鑒定、計(jì)數(shù)和菌種保存 樣五類。人及動(dòng)物的養(yǎng)分物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生

3、素六類； 植物的養(yǎng)分物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類；因子等五類。無(wú)菌技術(shù)獲得純潔培育物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，要留意以下幾個(gè)方面：和消毒。將用于微生物培育的器皿具進(jìn)展滅菌。為避開(kāi)四周環(huán)境中微生物的污染精燈火焰四周進(jìn)展。試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避開(kāi)已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸。消毒與滅菌的區(qū)分消毒指使用較為溫存的物理或化學(xué)方法僅殺死物體外表或內(nèi)部一局部對(duì)人體有害的微生不包括 芽孢和孢子。消毒方法常用煮沸消毒法，還有化學(xué)藥劑如酒精、氯氣、石炭酸等消毒、紅外線消毒。 滅菌則是指使用猛烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。培育基依據(jù)物

4、理性質(zhì) 征可以推斷是哪一種菌。各種培育基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種養(yǎng)分物質(zhì)。滿足微生物生長(zhǎng)還需要適宜pH、氧氣的要求依據(jù)微生物的需求供給有氧或無(wú)氧環(huán)境、特別養(yǎng)分物質(zhì)等。碳源：能為微生物的代謝供給碳元素的物質(zhì)。如 CO 、NaHCO 等無(wú)機(jī)碳源；糖類、蛋白質(zhì)、脂肪等23有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。氮源：能為微生物的代謝供給氮元素的物質(zhì)。如N 、NH 、NO -、蛋白質(zhì)、氨基酸等。只有固氮微生233物才能利用N2培育基配制的原則：目的要明確、PH 值要適宜、養(yǎng)分要協(xié)調(diào)和要經(jīng)濟(jì)節(jié)約。試驗(yàn)4果汁中的果膠和果膠酶果膠的構(gòu)造式：細(xì)胞粘合在一起的作用，去掉果膠，就會(huì)使

5、植物組織變得松散。果膠不溶于乙醇，這是鑒別果膠的一種簡(jiǎn)易方法。 低，果汁渾濁。果膠酶分解果膠的作用是：瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層，使榨取果汁更簡(jiǎn)潔； 把果膠分解為可溶性的半乳糖醛酸 膠酶的作用是與纖維素酶一起除去植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。試驗(yàn)5加酶洗衣粉的使用條件和效果洗衣粉主要成分：外表活性劑，水軟化劑，堿劑，漂白劑等成分，有的洗衣粉中還含有增白劑， 香精和色素，以及填充劑等。加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉,目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶 。其中應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。3.堿性蛋白酶的作用是使蛋白質(zhì)水解成可溶于水的小分子肽和氨基酸。蛋白質(zhì)酶多肽酶氨

6、基酸脂肪酶的作用是將大分子的脂肪水解為小分子的物質(zhì)，甘油和脂肪酸。脂肪酶甘油 + 脂肪酸過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致酶活力損失。試驗(yàn)操作課題名稱：溫度對(duì)加酶洗衣粉洗滌效果的影響。試驗(yàn)?zāi)康模罕容^不同溫度下加酶洗衣粉的洗滌效果。試驗(yàn)原理：酶的催化活性受溫度影響，在適宜溫度下酶的催化活性最高，溫度過(guò)低或過(guò)高酶的催化力量降低。試驗(yàn)材料：加酶洗衣粉、天平、白色棉布、1000mL 燒杯、玻棒、溫度計(jì)、滴管、穎雞血、水浴5、15、25、35的清水。1取10c10cm的白色棉布4塊，用滴管各滴加5滴穎雞血，晾干備用。1000mL40.5g45、15、25、35500mL445000mL 5、15、25、35清水，插入溫度計(jì)保持

7、恒溫。將 4 個(gè)燒杯分別放到一樣水溫的水浴缸中，將帶雞血的棉布分別放到燒杯中浸泡20min。按一樣方式用不同玻棒攪拌棉布各，放到水浴缸中。結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：不同種類的洗衣粉對(duì)同一污漬或不同污漬洗滌效果的列表比較污染物油漬 血漬 奶漬 果汁漬常見(jiàn)問(wèn)題解答蛋白酶洗衣粉復(fù)合酶洗衣粉一般洗衣粉為什么洗滌前先將衣物浸于加有適量洗衣粉的水內(nèi)數(shù)小時(shí)？如何縮短衣物的浸泡時(shí)間？需要適宜的溫度。60以上的水中使用此洗衣粉？試解釋為什么此洗衣粉不能用于絲質(zhì)及羊毛衣料？由于蛋白酶能使蛋白質(zhì)水解，而絲質(zhì)及羊毛衣料中含有蛋白質(zhì)，這樣會(huì)損壞衣物。為什么使用加酶洗衣粉洗衣后，須徹底清洗雙手？疹等，因此，應(yīng)避開(kāi)與這類洗衣粉長(zhǎng)時(shí)間

8、地接觸。脂肪酶對(duì)沾有礦物油的棉布是否起作用?不起作用。脂肪酶只對(duì)羥基和羧基形成的酯鍵起作用，而礦物油多為飽和鏈烴，沒(méi)有酯鍵。試驗(yàn)7-淀粉酶的固定化及淀粉水解酶的生產(chǎn)提取法：承受肯定的技術(shù)直接從動(dòng)植物或微生物的組織、細(xì)胞中將酶提取出來(lái)。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)潔易行，在動(dòng)植物或微生物資源豐富的地區(qū)具有應(yīng)用價(jià)值。缺點(diǎn)：要有充分的原材料，廣泛應(yīng)用受到限制。發(fā)酵法常用方法優(yōu)點(diǎn)：易培育、生殖速度快、便于大規(guī)模生產(chǎn)。酶制劑的優(yōu)點(diǎn)：催化效率高、低能耗、低污染等。酶制劑的缺點(diǎn)：通常對(duì)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫存有機(jī)溶劑等條件格外敏感，簡(jiǎn)潔失活；溶液中的酶很難，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。 3.固定化酶：固定化酶技術(shù)。馬上酶固定在肯定空間內(nèi)的技術(shù)

9、如固定在不溶于水的載體上。固定化酶的優(yōu)點(diǎn)：使酶既能與反響物接觸，又能與產(chǎn)物分別；固定在載體上的沒(méi)可以被反復(fù)利用。4.固定化酶方法：吸附法、交聯(lián)法、包埋法、共價(jià)偶連法等。5.試驗(yàn)操作試驗(yàn)原理：本試驗(yàn)是用吸附法將 a-淀粉酶固定在石英砂上，肯定濃度的淀粉溶液經(jīng)過(guò)固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示劑溶液測(cè)試，流出物呈紅色說(shuō)明水解產(chǎn)物糊精生成。設(shè)備及用品：5ml 塑料注射器、50ml 燒杯、滴管、自行車用氣門(mén)心及夾子、注射器架、試管及微量3材料：-淀粉酶的固定化:在燒杯中將 5mg-淀粉酶溶于 4ml 蒸餾水中.由于酶不純,可能有些5g,30min14ml10 倍體積的蒸餾水洗滌此注射器以除

10、去未吸1ml/min。50ml100ml5mmol/L KI-I20.127g0.83g100ml后裝入滴瓶中。步驟：將灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液 ,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速過(guò)柱在流出5ml后接收0.5ml流出液,參加12滴KI-I2溶液,觀看顏色.用水稀釋1倍后再觀看顏色。試驗(yàn)后,用 10 倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱,放置在 4冰箱中,幾天后再重復(fù)上述試驗(yàn),看是否有一樣的結(jié)果。試驗(yàn)反思：如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒(méi)有淀粉酶?可在試管中參加 1ml色，則流出液中沒(méi)有淀粉酶了。一試驗(yàn)原理 1酵母菌的細(xì)胞呼吸試驗(yàn)8果酒及果醋的制作酵母菌進(jìn)展有氧呼吸大量

11、生殖，反響式：CH O+O酶CO+HO+能量6 12 6222酵母菌進(jìn)展無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳，表達(dá)式為：CH O 酶CHOH+CO2酵母菌發(fā)酵的最正確環(huán)境6 12 62 52酵母菌在有氧和無(wú)氧的條件下都能生活：在有氧時(shí)，酵母菌大量生殖 20 最正確溫度是在 1825，pH 最好是弱酸性。3醋酸菌好氧性細(xì)菌，當(dāng)缺少糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇酒精氧化成醋酸。表達(dá)式為：CHOH酶CHCOOH+HO；當(dāng)氧氣、糖源都充分時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。2 532醋酸菌生長(zhǎng)的最正確溫度是在 3035(二)試驗(yàn)步驟選擇葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒醋酸發(fā)酵果醋 75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。取葡萄

12、500g，去除枝梗和腐爛的子粒。12 遍除去污物，留意不要反復(fù)屢次沖洗。用榨汁機(jī)榨取葡萄汁后，將其裝入發(fā)酵瓶中或?qū)⑵咸汛虺蓾{后，用干凈的紗布過(guò)濾至發(fā)酵瓶中， 500mL2/3。5.1825，1012d；醋酸菌，3035，78d。6.由于發(fā)酵旺盛期CO2 的產(chǎn)量格外大，因此需要準(zhǔn)時(shí)排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。假設(shè)使用簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置，如瓶子最好選用塑料瓶，每天要擰松瓶蓋24次，進(jìn)展排氣。7.10d 以后，可以開(kāi)頭進(jìn)展取樣檢驗(yàn)工作。例如，可以檢驗(yàn)酒味、酒精的含量、進(jìn)展酵母菌的鏡檢等工作。8.3035 的條件下發(fā) 酵，適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。假設(shè)找不到醋酸菌菌種或醋曲，可嘗試自然接種，但效果不是很好。假設(shè)沒(méi)有充

13、氣裝置，可以將瓶蓋翻開(kāi)，在瓶口蓋上紗布，以削減空氣中塵土等的污染。(三)留意事項(xiàng)膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋的制作原理，你認(rèn)為應(yīng)當(dāng)如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置？答：充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)展充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出CO2的；出料口是用來(lái)取樣的。排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接，其氣泵，輸入氧氣。四學(xué)問(wèn)重點(diǎn)釀酒和制醋有關(guān)的微生物分別是酵母菌真菌和醋桿菌細(xì)菌。制作酒和醋的過(guò)程：在糯米 變成酒糖酵解。假設(shè)時(shí)間太長(zhǎng)，在有氧條件下，醋酸菌就開(kāi)頭作用，將乙醇氧化成乙酸，也就是變酸生成醋。 產(chǎn)生，假設(shè)裝滿會(huì)使液體外溢，導(dǎo)致發(fā)酵液損失和瓶口等處污染雜菌，影響產(chǎn)物品質(zhì)。用裝著水的彎曲玻璃

14、管可以防止氧氣進(jìn)入，發(fā)酵產(chǎn)生的二氧化碳可以出去，還可以防止空氣中雜菌的污染。 3. 氣，保證發(fā)酵是一個(gè)氧化過(guò)程，要用棉花過(guò)濾是防止空氣中的微生物進(jìn)入。試驗(yàn)10泡菜的腌制和亞硝酸的測(cè)定1.泡菜腌制過(guò)程中起作用的主要是假絲酵母和乳酸菌。這類食品含有乳酸和豐富的維生素、礦物質(zhì)等養(yǎng)分所用原料是白菜、洋白菜等。在無(wú)氧的條件由所用容器的凹槽加水在加蓋造成下，微生物利用菜中的糖和其他養(yǎng)分物進(jìn)展發(fā)酵，乳酸菌將糖分轉(zhuǎn)化為乳 加白酒的作用是可抑制雜菌的生長(zhǎng)，也是一種調(diào)味 劑，增加醇香感。加鹽不要太多，否則會(huì)使乳酸菌發(fā)酵緩慢。溫度高則發(fā)酵快，但口味差些。雜菌較少的緣由是乳酸菌產(chǎn)生的乳酸球菌肽對(duì)許多革蘭氏陽(yáng)性菌有抗菌

15、作用，蛋白質(zhì)含量低，白酒的抑制作用等。氮化反響，這一產(chǎn)物再與 N1萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物，可用光電比色法定量。試驗(yàn)以亞硝酸鈉質(zhì)量為橫坐標(biāo)以光密度OD 值為縱坐標(biāo)硝酸鹽含量mg/kgX1ugm21000樣品處理液總體積 V1/樣品質(zhì)量m1測(cè)定樣品液總體積V21000。試驗(yàn)11植物組織培育一植物組織培育的原理與根本過(guò)程1.原理：細(xì)胞全能性。2.根本過(guò)程：外植體愈傷組織胚配裝體植物體二影響植物組織培育的因素 1、培育基配制要進(jìn)展嚴(yán)格的滅菌2、外植體的選?。荷L(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好，簡(jiǎn)潔誘導(dǎo)脫分化和再分化3、消毒4、接種5、培育6、移栽和栽培三影響花藥培育的因素選取適宜的材料和培育基組成是花粉

16、植株誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵 品種的不同而不同，但對(duì)大多數(shù)植物而言，適宜進(jìn)展花藥培育的時(shí)期是單核居中期或單核靠邊期。四試驗(yàn)操作指導(dǎo) 生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培育物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)展嚴(yán)格的無(wú)菌操作。無(wú)菌技術(shù)包括培育基消毒滅菌和植物材料外植體的消毒滅菌。對(duì)培育材料進(jìn)展外表滅菌時(shí)， 甚至不同器官要區(qū)分對(duì)待。34 d污染的現(xiàn)象。一般狀況下，細(xì)菌污染可能是由接種人員造成的，如未戴口罩，接種時(shí)說(shuō)話，或手及器械消毒不嚴(yán)等。真菌污染可能是植物材料滅菌不當(dāng)。 蒸汽滅菌，然后再翻開(kāi)培育瓶，進(jìn)展清洗。有毒藥品的處理：外植體滅菌用過(guò)的有毒藥品要妥當(dāng)處理如氯化汞等，以免引起環(huán)境污染。

17、五學(xué)問(wèn)重點(diǎn)植物無(wú)性生殖的方法有扦插、嫁接和組織培育等。植物組織培育有兩種形式固體培育基、瓊脂培育基和細(xì)胞懸浮培育液體培育基。植物組織培育的原理是細(xì)胞的全能性。 誘變育種、花藥或花粉的單倍體培育、細(xì)胞融合、基因工程等、品種資源的保護(hù)、某些代謝產(chǎn)物如色素、芳香物質(zhì)等的生產(chǎn)等方面。植物組織培育的過(guò)程包括脫分化和再分化。 量元素、有機(jī)成分、激素和瓊脂。培育基中通常加肯定量的蔗糖是除作為養(yǎng)分成格外，還用于維持肯定的滲透壓。細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的摩爾濃度比打算組織是生根還是生芽，當(dāng)兩者比例高時(shí)細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素，誘導(dǎo)芽的生成；兩者大致相等時(shí)，愈傷組織連續(xù)生長(zhǎng)而不分化；兩者比例低時(shí)細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素，誘導(dǎo)根的形成。但試驗(yàn)中不用自然激