1、高效液相色譜及其應用第1頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相色譜簡介高效液相色譜特點高效液相色譜分類高效液相色譜應用高效液相色譜發(fā)展第2頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相色譜簡介 20世紀初： 俄國植物學家茨維特提出經(jīng)典液相色譜法。經(jīng)典液相色譜法包括柱色譜、薄層色譜、紙色譜。20世紀60年代末：隨著色譜理論的發(fā)展、高效細微固定相的開發(fā)、高壓恒流泵及高靈敏度檢測器的應用，高效液相色譜法得到了突破性的發(fā)展。 第3頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四第4頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液

2、相色譜的特點高壓：流動相流經(jīng)色譜柱時，受阻力較大，為了迅速通過色譜柱，必須對流動相加高壓。高效：分離效能高，柱效達2103-5104塊/m。高靈敏度：最低可檢測10-9g（ppb），痕量分析時可達10-12g(ppt)。應用范圍廣：約80%的有機物，特別是高沸點、大分子、熱穩(wěn)定性差的有機化合物。分析速度快：通常分析一個樣品在15-30分鐘，甚至有的樣品在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。（三高一廣一快）第5頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相色譜法局限性成本高易污染環(huán)境缺少通用型檢測器不能代替氣相色譜，無法完成柱效高達10萬塊理論塔板數(shù)的分析不能代替中低壓柱色譜法

3、第6頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相色譜分類吸附色譜法分配色譜法離子交換色譜法體積排阻色譜法按分離原理分類：正相色譜反相色譜第7頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相分析方法的建立收集樣品信息，明確分析目的和要求選擇樣品制備方法確定分析模式，選擇相應色譜柱確定檢測方法和條件優(yōu)化分離條件方法驗證定量分析第8頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四樣品前處理技術(shù)高速離心過濾、超濾選擇性沉淀萃取索氏抽提衍生化反應樣品濃縮旋蒸等新技術(shù)加速溶劑萃?。ˋSE）第9頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液

4、相色譜的應用食品工業(yè)中的應用在制藥工業(yè)中的應用在環(huán)境監(jiān)測中的應用在生物工程和生物化學中的應用在精細化工分析中的應用第10頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四營養(yǎng)成份分析 氨基酸、碳水化合物、維生素等食品添加劑 防腐劑、香料、保鮮劑等有害成分 獸藥殘留、農(nóng)藥殘留等無機成份 各種無機鹽食品工業(yè)中的應用第11頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四在制藥工業(yè)中的應用藥物鑒別 如：青霉素中有效成份可用反相色譜法分離雜質(zhì)檢測（原料、中間體、副產(chǎn)物等）含量測定手性分離藥物代謝動力學研究、臨床血藥濃度等檢測中應用非常廣泛 第12頁，共25頁，2022年，5月20日，2

5、0點32分，星期四在環(huán)境監(jiān)測中的應用多環(huán)芳烴的檢測（有機燃料未完全燃燒產(chǎn)生）多氯聯(lián)苯（PCB）的檢測農(nóng)藥殘留的檢測（有機磷、氯、除草劑等）酚類和胺類的檢測（化工、燃料、制藥等產(chǎn)生的工業(yè)廢水）第13頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四在生物工程和生物化學中的應用氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)的分析研究核堿、核苷、核苷酸和核酸的分析研究生物胺的分析研究變性高效液相色譜檢測法（DHPLC）是近年來發(fā)展起來的一項相對較新的技術(shù)，主要應用于基因突變分析中，能夠滿足大規(guī)模的基因變異檢測篩查。 第14頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四在精細化工分析中的應用醇、醛和酮、醚的

6、分離分析酸和酯的分離分析表面活性劑的分析聚合物的分析研究第15頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相色譜的發(fā)展超高效液相色譜（UPLC）聯(lián)用技術(shù)（LC-MS，LC-MS-MS)第16頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四超高效液相色譜（UPLC） waters從上世紀60年代首推第一臺液相色譜，到70年代液相色譜商業(yè)化，至2004年UPLC系統(tǒng)推出，一直是行業(yè)領(lǐng)導者。第17頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四UPLC的特點超強分離能力（1.7um顆粒）超高速度（壓力可達105MPa）超高靈敏度簡便方便的方法轉(zhuǎn)換快速自動進樣（

7、采用針內(nèi)針）最佳的質(zhì)譜接入口第18頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四UPLC的特點及應用UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍 UPLC主要應用于代謝組織學分析、環(huán)境監(jiān)測及其他一些生化領(lǐng)域，包括天然產(chǎn)物的分析 。特別是中藥研究領(lǐng)域的發(fā)展是一個極大的促進。UPLC是HPLC的未來第19頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四第20頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四第21頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS） 色譜的優(yōu)勢在于分離，質(zhì)譜能夠提供物質(zhì)的分子量

8、及結(jié)構(gòu)信息。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補，將色譜對復雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點結(jié)合起來。第22頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分，星期四LC-MS特點分析范圍廣分離能力強。通過MS的特征離子質(zhì)量色譜圖能分別給出各組分的色譜圖來進行定性定量； 定性分析結(jié)果可靠?？梢酝瑫r給出每一個組分的分子量和豐富的結(jié)構(gòu)信息； MS具備高靈敏度。檢測能力提高一個數(shù)量級以上； 分析時間快。LC-MS使用的液相色譜柱為窄徑柱，縮短了分析時間，提高了分離效果； 自動化程度高，LC-MS具有高度的自動化。 第23頁，共25頁，2022年，5月20日，20點32分