1、培養(yǎng)基的制備和滅菌第1頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗材料1.成份：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂2.試劑：1N NaOH溶液、1N HCl溶液3.儀器：pH試紙、三角瓶、試管、燒杯、玻棒、量筒、紗布、漏斗、臺秤、吸管、藥匙、棉塞、牛皮紙、滅菌鍋等第2頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗步驟原料稱量溶解調(diào)節(jié)pH（加瓊脂熔化）塞棉塞、包裝（過濾澄清）滅菌分裝第3頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗步驟之溶解一般情況下，幾種藥品可一起到入燒杯內(nèi)，先加少于計料體積的水

2、進(jìn)行加熱溶解，但如有磷酸鹽和鈣鹽等混合在一起時,易產(chǎn)生磷酸鈣和磷酸鎂沉淀，所以要分別溶解。加熱時要攪拌，完全溶解后補足水分至計料體積。第4頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗步驟原料稱量溶解調(diào)節(jié)pH（加瓊脂熔化）塞棉塞、包裝（過濾澄清）滅菌分裝第5頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗步驟之分裝固體試管斜面分裝固體培養(yǎng)基三角燒瓶的分裝第6頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗步驟原料稱量溶解調(diào)節(jié)pH（加瓊脂熔化）塞棉塞、包裝（過濾澄清）滅菌分裝第7頁，共12頁，202

3、2年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌實驗步驟之滅菌高壓蒸汽滅菌滅菌條件：一般溫度為121（壓力1kg/cm2 ）下,維持1530min。高壓蒸汽滅菌原理是水的沸點隨著壓力的增加而升高。當(dāng)水在滅菌鍋中煮沸，產(chǎn)生蒸汽驅(qū)逐出鍋內(nèi)的空氣后，隨蒸汽的增加，鍋內(nèi)蒸汽壓力也隨之升高，故而水的沸點也就隨著上升，從而獲得高于100 的溫度，達(dá)到滅菌效果。注：使用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌時，鍋內(nèi)的冷空氣必須排除。第8頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌高壓蒸汽滅菌步驟1.放滅菌物件，加蓋，旋緊螺絲，密閉滅菌鍋內(nèi)；2.加水到要求的刻度范圍；3.加熱，打開蒸汽

4、閥，排盡鍋內(nèi)冷空氣，然后關(guān)閉排氣閥；4.當(dāng)蒸汽壓力上升到1kg/cm2時，稍微打開排氣閥使少量蒸汽排出，減少加熱，使鍋內(nèi)壓力維持在1kg/cm2；5.維持30分鐘后，切斷加熱源，稍微開大排氣閥，緩慢排氣，待壓力降為零時，開鍋稍微冷卻后取出滅菌物品。第9頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌高壓蒸汽滅菌注意事項1.滅菌完畢后，用排氣閥排氣不能太猛，否則，壓力驟降，導(dǎo)致鍋內(nèi)液體劇烈沸騰，打濕棉塞，容易造成染菌；2.容器內(nèi)培養(yǎng)基液體裝量不宜太多，以免液體沸騰打濕棉塞；3.瓶塞塞的不要太緊，不然會影響通氣，瓶內(nèi)空氣排不出，達(dá)不到滅菌溫度。第10頁，共12頁，202

5、2年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌注意事項1.原料稱量中，快接近終點時，用左手輕輕拍打右手手腕，將少量藥品振落，以免過量；2.成分中如含有磷酸鹽和鈣鹽應(yīng)分開溶解，否則會產(chǎn)生沉淀；3.待培養(yǎng)基冷卻至室溫時調(diào)節(jié)pH值。調(diào)節(jié)pH前要先測一下培養(yǎng)基的原始pH，緩慢滴加堿液，盡量避免回調(diào)；4.在加熱融化瓊脂過程中要不斷攪拌，以防瓊脂沉淀糊底燒焦；5.培養(yǎng)基成分含有淀粉時，應(yīng)先將淀粉糊化。第11頁，共12頁，2022年，5月20日，11點52分，星期二培養(yǎng)基的制備和滅菌思考題用高壓蒸汽滅菌，如何才能達(dá)到較好的滅菌效果？在同樣的條件下，為什么濕熱滅菌的效果好于干熱滅菌？高壓蒸汽滅菌后，