1、相對(duì)相的要求相對(duì)相的要求不與固定相發(fā)生化學(xué)反對(duì)樣品有適宜的溶解必須與檢測(cè)器相適粘度3溶劑系統(tǒng)對(duì)分離度的影-nR溶劑系統(tǒng)對(duì)分離度的影-nR=)4n：由固定相及色譜柱填充質(zhì)量k：主要受溶劑種類的：主要受溶劑配比的4溶劑的強(qiáng)度和選擇a. 溶劑溶劑的強(qiáng)度和選擇a. 溶劑的極性和強(qiáng)正相分配色譜：相極性小于固定相極性，極性小的先流出，適于極性組分分反相分配色譜：相極性大于固定相極性，極性大的先流出，適于非極性組分分離5正、反相色正、反相色譜中極性和保留時(shí)間6正相色反相色低極高極時(shí)時(shí)中等極中等極時(shí)時(shí)待測(cè)物極選相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問選相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問73. HPLC中的速率理GC：3. HPLC中的速率理GC：

2、H=A+B/u+B/u+毛細(xì)管柱HPLC：H=A+=8a. 渦流擴(kuò)散 (eddy)a. 渦流擴(kuò)散 (eddy)A=2A減小的措降低降低：9b. 縱向擴(kuò)散 (longitudinal )B=b. 縱向擴(kuò)散 (longitudinal )B= 液氣THPLC為室溫 最(35倍 B/u 可忽略不c.傳質(zhì)阻抗(mass c.傳質(zhì)阻抗(mass )C=Cm +Csm +Cs：化學(xué)鍵合相，單分子C=Cm +HPLC：H= A + Cmu + CsmmCm2Cdp /mCm2Cdp /降低增大相：相流速提高，色譜柱柱效降低（變化不如在GC中快一般流量為相流速提高，色譜柱柱效降低（變化不如在GC中快一般流量為

3、HPLC的適宜條固定相與HPLC的適宜條固定相與裝柱：小粒度、均勻的球形鍵合相勻漿法裝相：低粘度、低流量。（甲醇(2) 分離條件的選正(2) 分離條件的選正相鍵合相色譜法的分離條基（合物）、氨基鍵合相（反相鍵合相色譜法的反相鍵合相色譜法的分離條可選擇弱酸（醋酸）、弱堿（氨水）或緩沖鹽（反相離子對(duì)色譜法反相離子對(duì)色譜法的分離條4. 4. 三、高效液相三、高效液相色譜流動(dòng)流動(dòng)1. (1) 高壓輸液1. (1) 高壓輸液為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m）(2)梯度淋洗裝洗脫(2)梯度淋洗裝洗脫方式相組成保持恒梯度洗脫2. 進(jìn)樣器：六2. 進(jìn)樣器：六通進(jìn)樣：(2) 高效分離，內(nèi)徑(2) 高

4、效分離，內(nèi)徑16mm，柱長540cm3. 專屬型檢測(cè)3. 專屬型檢測(cè)通用型檢測(cè)示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)噪音噪音(1)紫外檢測(cè)器 ultraviolet(1)紫外檢測(cè)器 ultraviolet detector; 流通池可做的很?。▽?duì)a. 可變波a. 可變波長檢測(cè)b. 光電二極管陣列b. 光電二極管陣列檢測(cè)器 photodiode 。熒光檢理熒光檢理F K：熒光收集效:摩爾吸光Q：量子l：光徑長作特點(diǎn)靈特點(diǎn)靈敏度高（高于紫外檢測(cè)器是體內(nèi)藥物分析常用的檢測(cè)器安培檢測(cè)理發(fā)生氧化還原安培檢測(cè)理發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生電量（Q）的大小符合法拉第定律Q=nFN。因此反應(yīng)的電流（I）n：每摩爾物質(zhì)在氧化

5、還原過程中轉(zhuǎn)移的F：法拉第N：物質(zhì)的摩爾t：時(shí)I nF 作蒸發(fā)光散色檢測(cè)evaporativelightscatteringdetector;相蒸發(fā)光散色檢測(cè)evaporativelightscatteringdetector;相蒸發(fā)除加測(cè)定散射光I=k組分形成氣溶相（樣品特點(diǎn)通用型：如特點(diǎn)通用型：如糖類、氨基酸等適用于揮發(fā)性低靈敏相的組相必須是揮發(fā)的，不能含有緩(5) 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)(5) 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)光輻特點(diǎn)靈敏度選擇性不需光基四、高效四、高效液相色譜分析方(1) 定性方(1) 定性方化學(xué)鑒兩譜聯(lián)用鑒(2) 定量方(2) 定量方例1用15cm長的ODS柱分離兩個(gè)組分。柱效n2.84104m-測(cè)得t0 1.31min；組分的tR1 R2= 4.45min。例1用15cm長的ODS柱分離兩個(gè)組分。柱效n2.84104m-測(cè)得t0 1.31min；組分的tR1 R2= 4.45min。tt4.101.312.40 t R1k