1、基于免疫學原理及現(xiàn)有技術制定免疫治療方案基于免疫學原理及現(xiàn)有技術制定免疫治療方案基于免疫學原理及現(xiàn)有技術制定免疫治療方案基于免疫學原理及現(xiàn)有技術制定免疫治療方案基于免疫學原理及現(xiàn)有2013年12月20日，SCIENCE雜志“腫瘤免疫療法”：全球十大科技突破之首22013年12月20日，SCIENCE雜志“腫瘤免疫療法”Ipilimumab（-CTLA-4）和Nivolumab （-PD1）: 患者體內抗腫瘤T細胞被非特異性激活3Ipilimumab（-CTLA-4）和NivolumabCAR-T：CTL019：賦予患者體內T細胞以特異性腫瘤抗原識別能力39名罕見并致命的急性淋巴細胞白血病兒童，

2、有36名兒童（92%）在輸注該藥物后經歷了完全緩解。6個月后，70%的響應者仍處于緩解中，75%的兒童仍存活。CTL019在5名濾泡性淋巴瘤患者中達到了100%的緩解率和80%的完全緩解率，使5/11名彌漫大B細胞淋巴瘤患者腫瘤縮小，到第三個月時，36%的人未顯示有疾病跡象。24名慢性淋巴細胞白血病2期，達到42%的緩解率，一半的受試者出現(xiàn)完全緩解。在9個月的隨訪中，有68%的總生存率。主要副作用：在每一項研究中，一些或全部的患者經歷了細胞因子釋放綜合征(CRS)，這是人體對細胞治療藥物的一種響應，這種響應可導致類似流感的癥狀，甚至會導致一些病例死亡。諾華報道了三例及CTL019相關的CRS相

3、關死亡，指出每個死亡病例的感染都是獨立的，該綜合征嚴重程度往往及疾病負擔相對應。4CAR-T：CTL019：賦予患者體內T細胞以特異性腫瘤抗原Cancer Antigens vs Cytotoxic T Cells5Cancer Antigens vs Cytotoxic T特異性免疫治療6特異性免疫治療6腫瘤抗原的類型腫瘤抗原分類抗原來源人類腫瘤抗原舉例突變抗原腫瘤驅動基因或非驅動基因在腫瘤發(fā)生過程中突變產生的抗原Ras：1-10%的腫瘤中有突變p210：Bcr/Abl重排p50：50%腫瘤中有突變多種被殺傷性T淋巴細胞（CTL）識別的突變抗原MUCIN過表達抗原正常組織中低表達、腫瘤組織高

4、表達的基因產物HER2/NeuCD19，CD20，Tyrosinase，gp100， MART1，PAPCEA腫瘤特異性共享抗原（又稱CT抗原，Cancer-Testis Antigens）在多種腫瘤中表達、在除免疫豁免的正常組織中不表達的基因產物在多種腫瘤中表達，正常僅在免疫豁免組織睪丸、胎盤中表達MAGE家族、NY-ESO-1家族等致癌病毒抗原EBV、HPV、HBV等病毒基因表達于腫瘤細胞的基因產物LMP1/2（EBV）E6，E7(HPV) 7腫瘤抗原的類型腫瘤抗原分類抗原來源人類腫瘤抗原舉例突變抗原腫88TIL治療惡黑PR和混合型反應50% Science. 2002 )9TIL治療惡黑

5、PR和混合型反應50% Science. 2PatientTotal cells infused(109)CD4/CD8(%)VB12(%)MART-1 cells infused(109)Sites of evaluable diseaseResponse(duration in months)|111.027/73677.4Ln, CuNR2a*13.03/95648.3Ln, CuNR314.017/82354.9Cu, SubNR41.050/50420.5Li, SubPR(21)512.018/82172.2Lu, Ln, SubNR67.037/72513.6Lu, LnNR79

6、.075/21403.6Lu, LnNR86.168/40321.9Lu, LnNR94.272/24411.7Ln, Ad, SubMR108.653/30342.9Ln, Sub116.37/92452.8Lu, Pa, LnNR124.730/60612.9Br, SubNR137.740/67423.2Lu, SubNR2b*2.130/59531.1Ln, CuNR148611/604034.4HiPR(20)153816/824517.1LuNR163313/76216.9Lu, Li, SubNR172317/78306.9Lu, Ln, SubNRTCR基因轉染T細胞治療惡黑（

7、Science，2006）10PatientTotal cells infused(10CAR-T19治療CLL（14例，2015）11CAR-T19治療CLL（14例，2015）11療效持續(xù)監(jiān)測：CAR-T19治療CLL（14例，2015）12療效持續(xù)監(jiān)測：CAR-T19治療CLL（14例，2015）1精準免疫細胞治療治愈一例膽管細胞癌（Science，2014）13精準免疫細胞治療治愈一例膽管細胞癌（Science，2014A “blueprint” for the treatment of patients with T cells recognizing tumor-specific

8、mutations. Steven A. Rosenberg, and Nicholas P. Restifo Science 2015;348:62-68Published by AAAS14A “blueprint” for the treatmen體外活化、擴增腫瘤記憶性T淋巴細胞15體外活化、擴增腫瘤記憶性T淋巴細胞15抗原活化的樹突狀細胞（AADC）Antigen-Pulsed DCVaccination (systemic)LeukapheresisDC Generation(GM-CSF, IL-4)Tumor AntigenImmune & Clinical Monitorin

9、gVaccination(Intratumoral)DC Maturation(TNF, CD40-L)Ag loading16抗原活化的樹突狀細胞（AADC）Antigen-PulsedAADC作用機制體外腫瘤抗原活化大量抗原提呈細胞（APC）APC體內活化腫瘤抗原特異性記憶性T細胞記憶細胞大量增殖成為效應細胞效應細胞進入外周組織殺傷腫瘤通過不斷重復此過程，控制殘存腫瘤細胞復發(fā)轉移APC體外活化17AADC作用機制體外腫瘤抗原活化大量抗原提呈細胞（APC）ASipuleucel-T（Provenge，2010年獲FDA批準上市）顯著延長晚期去勢治療失敗的前列腺癌患者的OSKantoff PW

10、 et al. N Engl J Med. 2010;363(5):411-22Sipuleucel-T治療轉移性前列腺癌，疾病進展時間不延長，但OS顯著提高4.1個月。18Sipuleucel-T（Provenge，2010年獲FDAADC可延長手術后黑色素瘤患者無進展生存期和生存率19AADC可延長手術后黑色素瘤患者無進展生存期和生存率19AADC可延長晚期黑色素瘤患者的總生存期20AADC可延長晚期黑色素瘤患者的總生存期20LDC, 74歲,女,胃癌術后復發(fā)后5年余(頸部、縱膈及腹膜后淋巴結轉移、腹水中等量）Her-2 +手術2010.6.2212周期化療2010年7-8月2011年6-

11、8月多發(fā)淋巴結轉移2011年9-10月612周期S1+Lapatinib2012年1-2月SD2012年3月2013年6-11月 Lapatinib35周期化療LapatinibPDPDSDPR2014年 1月EAAL2011年6-8月2011年9-11月EAAL2012年1-2月EAAL2013年5、11月AADC-1、22014年1、5、8月AADC-3、4、52015年1月AADC-62015年1月2015年5、6月AADC-7、8cCRcCR2015年10月 CTLA4單抗/PD-1單抗 21LDC, 74歲,女,胃癌術后復發(fā)后5年余(頸部、縱膈及腹膜WDQ, 41歲, 男, 惡性黑色

12、素瘤(右手中節(jié)）術前化療2009年12月-2010年2月手術2010年2月2010年4月2010年5月化療2010年10-12月化療未見復發(fā)轉移放療+化療PD多發(fā)皮下轉移SDCR2011年1-3月2011年5-11月AADC-4、5、6、7、8、92012年1-7、11月AADC-10、11、12、13、14、15AADC-16、17、182014年1、6、10月AADC-19、20、21AADC-1、2、32013年2、6、10月2015年5月AADC-22CRPDCRCRCR22WDQ, 41歲, 男, 惡性黑色素瘤(右手中節(jié)）術前化療2AADC適應癥腫瘤抗原明確、免疫原性明確的腫瘤疾病進

13、展較為緩慢ECOG PS 0123AADC適應癥腫瘤抗原明確、免疫原性明確的腫瘤23非特異性免疫治療24非特異性免疫治療242525腫瘤微環(huán)境：反應性腫瘤間質Tumor Microenvironment: Reactive Stroma26腫瘤微環(huán)境：反應性腫瘤間質26Ipilimumab（-CTLA-4）和Nivolumab （-PD1）: 患者體內抗腫瘤T細胞被非特異性激活27Ipilimumab（-CTLA-4）和NivolumabImmune Monitoring of CTLA-4 and PD-1 Antibodies血液淋巴細胞計數(shù)在治療過程中的變化CD4+ICOS+腫瘤抗原特異

14、性抗體腫瘤特異性T細胞TregMDSCPD-L1/PD-1表達突變抗原錯配修復基因28Immune Monitoring of CTLA-4 aSignatures of mutational processes in human cancer29Signatures of mutational proce體外活化、擴增腫瘤記憶性T淋巴細胞30體外活化、擴增腫瘤記憶性T淋巴細胞30外周血20-100ml擴增及活化回輸100ml/次，1-8次培養(yǎng)及擴增14-35天收集誘導的殺傷細胞擴增活化的淋巴細胞（EAL）31外周血擴增及活化回輸培養(yǎng)及擴增14-35天收集誘導的擴增活化EAL作用機制體外活化擴

15、增記憶性T細胞，獲得含有大量腫瘤抗原特異性效應細胞的混合T細胞T細胞進入體內殺傷腫瘤細胞記憶性T細胞體外活化擴增32EAL作用機制體外活化擴增記憶性T細胞，獲得含有大量腫瘤抗原EAAL細胞培養(yǎng)后腫瘤特異性T細胞比例顯著增加33EAAL細胞培養(yǎng)后腫瘤特異性T細胞比例顯著增加33外周血T細胞體外培養(yǎng)前后的腫瘤抗原特異性分析DonorA2-01A2-02A2-03Cancer AntigenNY-ESO-1BC(%)0.170.860.32AC(%)1.122.572.3Multiple6.59 2.99 7.19 MAGE-1BC(%)0.390.070.1AC(%)0.251.150.51Mul

16、tiple0.64 16.43 5.10 MAGE-3BC(%)0.450.060.07AC(%)0.280.360.36Multiple0.62 6.00 5.14 MAGE-10BC(%)0.520.150.23AC(%)0.250.220.48Multiple0.48 1.47 2.09 P53BC(%)0.631.130.78AC(%)5.2712.248.7Multiple8.37 10.83 11.15 HIVBC(%)0.590.20.22AC(%)0.240.250.31Multiple0.41 1.25 1.41 FLUBC(%)1.060.60.66AC(%)4.4411.

17、7610.01Multiple4.19 19.60 15.17 34外周血T細胞體外培養(yǎng)前后的腫瘤抗原特異性分析DonorA2兩項隨機對照臨床試驗Takayama T等Lee JH等The Lancet, 2000Gastroenterology, 2015適應癥根治術后肝細胞癌I、II期根治術后肝細胞癌年齡20-80歲18-80歲治療開始時間術后2周術后2周治療周期共5次回輸。每周一次，三次回輸；每月一次，二次回輸共16次回輸。每周一次，四次回輸；每二周一次，四次回輸；每月一次，四次回輸；每三月一次，四次回輸35兩項隨機對照臨床試驗Takayama T等Lee JH等T療效評價 試驗方案Ta

18、kayama T等（2000，日本方案）Lee JH等（2015，韓國方案）主要研究終點首次復發(fā)時間及無復發(fā)生存率無患者發(fā)生失訪，隨訪期中值為4.4年（0.26.7年）。在免疫治療組（76例）中，有45例患者（59%）發(fā)生了肝癌的復發(fā)，而在對照組（74例）中則為57例（77%）。及對照組相比，免疫治療組出現(xiàn)首次復發(fā)的時間要明顯延長（p=0.008）。免疫治療組（44.0個月）RFS中位值較對照組（30.0個月）延長14.0個月。兩組的RFS差異具有統(tǒng)計學顯著性（p=0.010，單側對數(shù)秩檢驗）。免疫治療降低三種腫瘤復發(fā)的風險：1）肝內復發(fā)（切除或消融邊緣2cm內），2）肝內遠端復發(fā)（邊緣2cm

19、外），3）肝外復發(fā)。復發(fā)風險及對照組相比，免疫治療組將全面復發(fā)、早期復發(fā)和大量復發(fā)的危險性分別降低了41%（p=0.01）、51%（p=0.005）和56%（p=0.03）。治療組相對于對照組的腫瘤復發(fā)或死亡的風險比例為0.63（95%置信區(qū)間CI，0.430.94），顯示治療組相對降低37%的風險。次要研究終點 腫瘤特異性生存期復發(fā)的狀況對總體的生存率有顯著的影響（死亡的相關危險性為21.895%可信區(qū)間7.265.8，p0.0001）。對于疾病特異的生存率，免疫治療組顯著高治療組的腫瘤特異性生存期較長(HR, 0.19; 95% CI, 0.040.87; p= 0.02)總生存期總生存率

20、的差別在兩組間并無統(tǒng)計學意義（p=0.09）至數(shù)據(jù)截止時，兩組患者均未達到中位總生存期和腫瘤特異性生存期。復發(fā)情況對OS的影響顯著(死亡相關風險, 5.22; 95% CI, 1.5218.01; p= 0.003 by z-test)。治療組OS長于對照組(HR, 0.21; 95% CI, 0.060.75; p=0 .008)。36療效評價 試驗方案Takayama T等（2000，日本方案生存曲線分析37生存曲線分析37EAL臨床效果回顧病理明確及隨訪資料完整、接受過至少六次EAAL過繼性細胞免疫治療的54例NSCLC、16例SCLC、42例胃癌、38例結直腸癌及24例胰腺癌患者作為治

21、療組研究對象，按1:1的比例選取及治療組患者同期入院的上述5種惡性腫瘤患者作為對照組研究對象，隨訪所有患者，Kaplan-Meier法分析治療組及對照組OS的差異，COX回歸法多因素分析對OS產生影響的因素，并分層分析不同亞組患者接受EAAL細胞治療后OS獲益情況。38EAL臨床效果回顧病理明確及隨訪資料完整、接受過至少六次EA不同類型惡性腫瘤總生存期結果NSCLC,SCLC,PCGC,CRC39不同類型惡性腫瘤總生存期結果NSCLC,SCLC,PC39胰腺癌肝轉移病例報告40胰腺癌肝轉移病例報告40EAL清除急性髓性淋巴細胞白血病（AML）微小殘留的作用2010年1月至2013年6月北京大學

22、人民醫(yī)院兒科收治的初治AML（除M3外）患兒65例，均為化療后白血病基因殘存患兒。對照組：24例；EAL治療組：41例男孩28例（43%），女孩37例（57%）診斷時年齡1-16歲，中位年齡9歲。按照FAB分型，M2型49例（75.4%），M4型12例（18.5%），M5型4例（6.1%）。中位隨訪時間為25個月（5-50個月）。65例患兒中有5例失訪，失訪率7.6%。對患兒的遺傳學特點的檢測分為2方面：白血病融合基因的檢測，應用逆轉錄聚合酶鏈式反應（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）定量檢測突變基因方法對診斷時的骨

23、髓標本進行白血病基因檢測，主要檢測的靶基因有：AML1-ETO、CBF-MYH11、CEBPA、NPM1、WT1、c-kit、FLT3；2）、染色體檢測，采用24小時培養(yǎng)G顯帶描述核型。41EAL清除急性髓性淋巴細胞白血病（AML）微小殘留的作用20謝飛，男，14歲首次住院：2011.5.24入院血象：WBC142.76109/L骨髓形態(tài)：AML-M2染色體：46，XY，inv(16)基因：CBF-MYH（+) 83.2% c-kit點突變陽性。治療經過：ADE雙誘導后，予大劑量阿糖胞苷及HA交替治療，8個月時CBF-MYH（+）0.13%，加用EAAL2療程， CBF-MYH轉為0%，但停用

24、4個月后CBF-MYH（+）0.024%，繼續(xù)EAAL2療程CBF-MYH0%，再鞏固EAAL1療程，現(xiàn)CBF-MYH持續(xù)0%1年余。42謝飛，男，14歲42宋宇卉，女，11歲首次住院：2012.7.17發(fā)病時WBC 73109/L染色體：46，XX，del(7)(q32),t(8,21）基因：AML-ETO（+），c-kit（-）治療經過：化療8個月后AML-ETO（+）為0.05%，加用EAAL治療，2療程后融合基因轉為0%，現(xiàn)繼續(xù)治療中。43宋宇卉，女，11歲43王穎，女，5歲發(fā)病日期：2013.1發(fā)病時WBC53.7109/L骨髓形態(tài)：AML-M4EO染色體：47,XX,+8,inv(

25、16)基因： CBF-MYH（+） c-kit點突變（-）治療經過：院外2療程后CR，建議予HSCT來我院。入院CBF-MYH（+）0.22%，加用大劑量阿糖胞苷化療3個月，基因仍（+），遂行化療加EAAL治療，2療程后融合基因為0%，現(xiàn)仍繼續(xù)治療中。44王穎，女，5歲44EAL細胞聯(lián)合化療治療兒童AML療效優(yōu)于單純化療，可明顯延長MRD陰性持續(xù)時間及無事件生存時間45EAL細胞聯(lián)合化療治療兒童AML療效優(yōu)于單純化療，可明顯延EAL適應癥腫瘤抗原不明確根治性治療后預防復發(fā)及化療聯(lián)合產生協(xié)同作用及化療聯(lián)合有效降低化療副作用ECOG PS 0246EAL適應癥腫瘤抗原不明確46腫瘤類型腫瘤分期患者

26、分組化療方案化療周期數(shù)EAL治療組(分組標識：1*）第一階段EAL治療第二階段EAL治療第三階段EAL治療化療期間EAL治療療程化療結束后EAL鞏固治療基本療程第二階段治療結束后：增效療程（可選）非小細胞肺癌手術后輔助化療組A21天周期，第1天化療方案41. 化療周期第3天第一次EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次EAL細胞回輸。第一階段EAL治療結束后，每兩周一次EAL細胞回輸，共6次回輸。 每月一次EAL回輸，至疾病進展（可選）。B第1、8天化療方案41. 化療周期第3天第一次EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次EAL細胞回輸。晚期腫瘤復發(fā)化療組C21天周期，第1天化療

27、方案461. 化療周期第3天第一次EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次EAL細胞回輸。D第1、8天化療方案461. 化療周期第3天第一次EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次EAL細胞回輸。姑息治療組，IIV期患者E最佳支持治療，無化療無每周一次回輸，1218周（相當于化療組進行化療的時間）每兩周一次回輸，6次回輸每月一次回輸，至疾病進展（可選）常規(guī)治療基礎上的非小細胞癌免疫細胞治療方案47腫瘤類型腫瘤分期患者分組化療方案化療周期數(shù)EAL治療組(分組常規(guī)治療基礎上的小細胞癌免疫細胞治療方案腫瘤類型患者分組化療方案EAL治療組(分組標識：1*）第一階段EAL治療第二階段EAL治

28、療第三階段EAL治療化療期間EAL治療療程化療結束后EAL鞏固治療基本療程第二階段治療結束后：增效療程（可選）小細胞肺癌F第1-3天化療，三周方案1. 化療周期第5天第一次EAL細胞回輸；2. 化療周期第12天第二次EAL細胞回輸。第一階段EAL治療結束后，每兩周一次EAL細胞回輸，共6次回輸。 每月一次回輸，至疾病進展（可選）G第1-5天化療，三周方案1. 化療周期第7天第一次EAL細胞回輸； 2. 第14天第二次EAL細胞回輸。H第1-3、14-16天化療，四周方案1. 化療周期第5天第一次EAL細胞回輸； 2. 第18天第二次EAL細胞回輸。48常規(guī)治療基礎上的小細胞癌免疫細胞治療方案腫

29、瘤類型患者分組化療常規(guī)治療基礎上的卵巢癌免疫細胞治療方案腫瘤類型腫瘤分期患者分組化療方案化療周期數(shù)OC-EAL治療組(分組標識：1*）對照組（分組標識：2*）第一階段OC-EAL治療第二階段OC-EAL治療第三階段OC-EAL治療無OC-EAL治療化療期間OC-EAL治療療程化療結束后OC-EAL鞏固治療基本療程第二階段治療結束后：增效療程（建議選擇）卵巢癌手術后輔助化療及一線化療方案組OC21天周期，第1天化療方案61. 化療周期第3天第一次OC-EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次OC-EAL細胞回輸。第一階段OC-EAL治療結束后，每兩周一次OC-EAL細胞回輸，共6次回輸。

30、每34周一次OC-EAL回輸，至疾病進展。無OC-EAL細胞治療，其它治療及OC-EAL治療組方案相同。49常規(guī)治療基礎上的卵巢癌免疫細胞治療方案腫瘤類型腫瘤分期患者常規(guī)治療基礎上的復發(fā)難治卵巢癌免疫細胞治療方案腫瘤分期患者入組標志化療方案化療周期數(shù)ROC-EAL細胞聯(lián)合一線化療第一階段化療+ROC-EAL治療第二階段化療+ROC-EAL治療第三階段化療結束后ROC-EAL治療第四階段ROC-EAL維持治療三周期化療，化療間歇期間給予OC-EAL治療臨床評價第一階段治療有效，繼續(xù)進行化療+OC-EAL治療三周期化療結束后OC-EAL鞏固治療基本療程第三階段治療結束后：增效療程（建議選擇）卵巢癌

31、一線化療三周期治療無效ROC21天周期，第1天化療方案61. 化療周期第3天第一次OC-EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次OC-EAL細胞回輸。1. 化療周期第3天第一次OC-EAL細胞回輸； 2. 化療周期第10天第二次OC-EAL細胞回輸。第一階段OC-EAL治療結束后，每兩周一次OC-EAL細胞回輸，共6次回輸。 每34周一次OC-EAL回輸，至疾病進展。50常規(guī)治療基礎上的復發(fā)難治卵巢癌免疫細胞治療方案腫瘤分期患者常規(guī)治療基礎上的宮頸癌免疫細胞治療方案腫瘤類型腫瘤分期患者分組化療方案化療周期數(shù)CC-EAL治療組(分組標識：1*）對照組（分組標識：2*）第一階段CC-EAL治療第二階段CC-EAL治療第三階段CC-EAL治療無CC-EAL治療化療期間CC-EAL治療療程化療結束后CC-EAL鞏固治療基本療程第二階段治療結束后：增效療程（建議選擇）宮頸癌需進行化療的CC患者CCA第1-4天化療，三周方案41. 化療周期第6天第一次CC-EAL細胞回輸；2. 化療周期第13天第二次CC-EAL細胞回輸。第一