1、肝母細(xì)胞瘤相關(guān)遺傳變異及生物標(biāo)記物肝母細(xì)胞瘤（，）是小兒最常見的原發(fā)性肝臟惡性腫瘤，也是繼神經(jīng)母細(xì)胞瘤和腎母細(xì)胞瘤之后的小兒第三大常見的腹部惡性腫瘤1。14的肝母細(xì)胞瘤見于新生兒，%發(fā)生于歲以內(nèi)，0發(fā)生于歲以內(nèi)。僅有的患者歲。男性患病比例略高，：1但沒有種族傾向。常見的臨床表現(xiàn)有腹部膨隆、腹塊、腹痛等。的患兒有血甲胎蛋白水平升高。手術(shù)和化療是目前主要治療措施。上世紀(jì)80年代以前，肝母細(xì)胞瘤的治愈率僅為30。%近年來，隨著研究的深入和綜合治療的應(yīng)用，肝母細(xì)胞瘤的治愈率已達(dá)到以上。盡管如此，肝母細(xì)胞瘤的病死率仍高達(dá)。最近通過基礎(chǔ)與臨床研究確定了許多與肝母細(xì)胞瘤相關(guān)的遺傳學(xué)及生物學(xué)標(biāo)記,這些標(biāo)記的獲

2、得可以幫助篩選病人,早期診斷,預(yù)測預(yù)后和對腫瘤分層,從而進(jìn)行適當(dāng)?shù)闹委?。許多預(yù)后研究也已經(jīng)確定多種腫瘤標(biāo)記物與肝母細(xì)胞瘤的總體生存率及無瘤生存率有關(guān)。然而,目前很難確定哪一種標(biāo)記物最有效,這也表明了腫瘤復(fù)雜的本性以及尚缺少大樣本的臨床研究?，F(xiàn)查閱近15年國內(nèi)外肝母細(xì)胞瘤研究文獻(xiàn)，對與肝母細(xì)胞瘤篩查、診斷、預(yù)后及監(jiān)測相關(guān)的部分遺傳及生物標(biāo)記物進(jìn)行綜述。一、染色體變異隨著肝母細(xì)胞瘤相關(guān)染色體及基因研究不斷進(jìn)步。研究者們發(fā)現(xiàn)了許多染色體的變異。在染色體的變異中染色體的獲得多于染色體的丟失2.其中最常見的變異為2、8和20號染色體的三體性。目前染色體雜交技術(shù)使研究者能夠進(jìn)一步的準(zhǔn)確確定染色體的變異，并

3、且能夠定位肝母細(xì)胞瘤相關(guān)的基因片段。隨著人類基因組計劃的完成研究者利用基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)了許多染色體區(qū)域的變異，染色體的獲得以及和的丟失都與晚期的腫瘤及不良的預(yù)后相關(guān)研究者還發(fā)現(xiàn)染色體以及雜合性的丟失，其中后者與-關(guān)系密切，并且導(dǎo)致抑癌基因的丟失及胰島素樣生長因子的兩個等位基因的激活高紅等通過比較基因組雜交技術(shù)，對例中染色體上個微衛(wèi)星的雜合子丟失進(jìn)行檢測，結(jié)果每例細(xì)胞染色體均有不同程度的變異，例中號染色體上個基因座發(fā)生的總頻率為.%,其中為最高，其次為。此研究認(rèn)為存在多條染色體拷貝數(shù)擴(kuò)增或丟失的區(qū)域；在染色體上存在廣泛的O染色體變異引起相應(yīng)瘤基因擴(kuò)增和抑癌基因的丟失可能參與了的發(fā)生、發(fā)展二、原癌

4、基因及抑癌基因基因突變主要是某些原癌基因的激活、抑癌基因的失活以及凋亡相關(guān)基因的改變，這些改變導(dǎo)致細(xì)胞的增殖分化和凋亡失調(diào)最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。抑癌基因根據(jù)功能可分為控制細(xì)胞增生的看門基因和維持基因完整的看管基因。幾乎一半的人類腫瘤均存在抑癌基因的失活，可見抑癌基因的失活與腫瘤的生長有著密切的關(guān)系。目前研究較多的常見抑癌基因包括、等。腫瘤抑制基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因，是目前研究最廣泛和深入的抑癌基因。其正常功能的喪失，最主要的方式是基因突變。由于、基上因點突變，直接的后果是導(dǎo)致氨基酸的改變，最終產(chǎn)生沒有活性的、蛋上白，失去抑癌作用。由于人類惡性腫瘤、上基因突變率較高，、上基因的研

5、究及治療腫瘤就自然成了研究的熱點。推測突變型、基因蛋白致癌作用是通過抑制細(xì)胞凋亡來實現(xiàn)的。另外近年發(fā)現(xiàn)可抑制各種組織的細(xì)胞凋亡，是目前公認(rèn)的抗凋亡基因、-6。周建斌、李代強(qiáng)等應(yīng)用原位末端標(biāo)記及免疫組化技術(shù)檢測肝母細(xì)胞瘤中細(xì)胞凋亡及增殖細(xì)胞核抗原A和蛋白表達(dá)，通過與對照組對比研究，得出突變型及蛋白均具有抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用口。其他研究，胡友主通過過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素方法表面，抑凋亡基因在肝母細(xì)胞瘤及小兒正常肝組織中均無表達(dá)，在肝母細(xì)胞瘤中表達(dá)陽性率為92在小兒正常肝組織中無表達(dá)P的陽性表達(dá)水平，臨床分期越晚則越高P胚胎型組高于胎兒型組口。證實肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生與蛋白異常表達(dá)有關(guān)，

6、與表達(dá)無關(guān)?？梢酝ㄟ^肝母細(xì)胞瘤測定表達(dá)判斷預(yù)后。肝母細(xì)胞凋亡與增殖平衡調(diào)控異常在肝母瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能起重要作用，突變型及蛋白均具有抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。研究人員還發(fā)現(xiàn)與增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)之間存在著一種正相關(guān)關(guān)系，都與腫瘤的預(yù)后等因素有關(guān)。針對上述研究引入基因體內(nèi)體外實驗均表明確實可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)其出現(xiàn)凋亡。將正常的抑癌基因?qū)肽[瘤細(xì)胞中，以補償和代替突變或缺失的抑癌基因，達(dá)到抑制腫瘤的生長或逆轉(zhuǎn)其表型的抑癌基因治療。基因是近年發(fā)現(xiàn)的新型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，研究表明，其可在轉(zhuǎn)錄后水平抑制多種的表達(dá)，抑制腫瘤血管形成，從而抑制腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。研究表明，在號染色體短臂

7、上，特別是基因定位的區(qū)域上的基因11與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，這些腫瘤包括肺癌、肝細(xì)胞癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌和膀胱移行細(xì)胞癌等?；|(zhì)金屬蛋白酶，是自然界進(jìn)化中高度保守的一類酶，其廣泛分布于植物、脊椎動物、無脊椎動物中，對的降解是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，多種惡性腫瘤都伴有分泌水平和活性的增高。在正常穩(wěn)定狀態(tài)下，組織中的表達(dá)量極少，而在炎性細(xì)胞因子、激素、生長因子刺激和細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中其表達(dá)量明顯升高。此過程涉及人體多種生理及病理過程，如炎癥、胚胎發(fā)生、血管形成、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等。其中在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制的研究較多，有研究表明，在腫瘤組織中，其多種的表達(dá)均明顯升高，與多種腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移

8、的能力呈明顯正相關(guān)。因此，關(guān)于及其抑制劑的研究方興未艾。蛋白、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶同樣在肝母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及其在腫瘤轉(zhuǎn)移抑制中的作用。孫建等通過免疫組織化學(xué)方法檢測例肝母細(xì)胞瘤組織和例正常肝臟組織及例肝臟良性腫瘤組織中、的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝母細(xì)胞瘤組織的表達(dá)水平明顯降低，肝母細(xì)胞瘤組織中高表達(dá)，并隨著腫瘤浸潤深度的加深、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生而增高；二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。和在肝母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；和在肝母細(xì)胞瘤的進(jìn)展中起重要作用。免疫組織化學(xué)方法檢測蛋5例肝母細(xì)胞瘤組織和15例正常肝臟組織及10例肝臟良性腫瘤組織中、的表達(dá)情況。結(jié)果：肝母細(xì)胞瘤組織的表達(dá)水平明顯降低；肝母細(xì)胞瘤組織中高表達(dá)，

9、并隨著腫瘤浸潤深度的加深、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生而增高；二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。表明在肝母細(xì)胞瘤組織中表達(dá)隨著腫瘤浸潤程度的增加而下調(diào)白。說明一在肝母細(xì)胞瘤組織中高表達(dá)，并隨著腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的發(fā)生而增高。肝母細(xì)胞瘤組織中和一的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，蛋白的表達(dá)對肝母細(xì)胞瘤的侵襲轉(zhuǎn)移可能有抑制作用，該作用可能與降低一蛋白的表達(dá)有關(guān)。許多細(xì)胞癌基因?qū)嶋H上就是具有啟動子特異性的轉(zhuǎn)錄因子,通過與基因啟動子區(qū)域的特異序列結(jié)合的方式調(diào)節(jié)基因,影響細(xì)胞生長、分化和凋亡。是具有個氨基酸的核蛋白是人們發(fā)現(xiàn)較早的原癌基因之一也是與人類肝臟腫瘤最相關(guān)的基因。它屬于具有結(jié)合功能的轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞增殖過程中起重要作用,人類多腫瘤中發(fā)現(xiàn)基因異常擴(kuò)

10、增被認(rèn)為與腫瘤發(fā)生有關(guān)并把它作為腫瘤與非腫瘤的標(biāo)志及腫瘤分級、分期的敏感指標(biāo)。發(fā)現(xiàn)于年是相對分子質(zhì)量為的酸性蛋白為合成不可缺少的因子也是一種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白其表達(dá)隨細(xì)胞周期而變化在期開始上升期達(dá)高峰常作為測定細(xì)胞增殖水平的指標(biāo)之一。過度表達(dá)是腫瘤生長快、侵襲力強(qiáng)及病人預(yù)后差的指標(biāo)。華堯楷等發(fā)現(xiàn)組織內(nèi)癌基因激活和異常擴(kuò)增,使肝細(xì)胞獲得增殖和分裂優(yōu)勢,這種組織學(xué)上細(xì)胞增殖分化異常,不但與的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系而且與腫瘤的臨床分期和預(yù)后有關(guān)。此研究還顯示陽性表達(dá)與演進(jìn)的一致性及與陽性表達(dá)的相關(guān)性和協(xié)同性說明肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生和發(fā)展是多因素、多步驟作用的結(jié)果。及表達(dá)與的臨床病理指標(biāo)密切相關(guān)檢測中及對估計

11、腫瘤惡性程度判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療有重要意義4近年來在腫瘤發(fā)生的癌基因研究中,普遍認(rèn)為腫瘤的發(fā)生、發(fā)展各階段至少有兩個以上異常激活的癌基因各自發(fā)揮不同作用,并且相互配合,協(xié)調(diào)了細(xì)胞的癌變。三、分子生物標(biāo)記在肝母細(xì)胞瘤的研究中研究者發(fā)現(xiàn)了多種蛋白質(zhì)分子的質(zhì)量異常。血清是在人體胚胎時期血液中含有的一種特殊蛋白質(zhì)主要由胎兒肝臟和卵黃囊產(chǎn)生。作為肝母細(xì)胞的腫瘤標(biāo)志物診斷時患者水平的升高，不但在初診時有重要的預(yù)后意義,而且在整個肝母細(xì)胞瘤的治療過程中始終是患兒預(yù)后情況及療效的重要觀測指標(biāo)5水平與疾病過程平行，當(dāng)腫瘤完全切除時降至正常而隨病變復(fù)發(fā)水平升高。早期水平較低的患兒預(yù)后可能更差6另外目前有數(shù)個與胚胎發(fā)

12、育有關(guān)的分子信號途徑改變在肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。其中途徑在許多肝母細(xì)胞瘤中被激活，從而導(dǎo)致B連環(huán)蛋白的穩(wěn)定產(chǎn)生，這種蛋白能夠聚集在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)并且使幾種與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因活化，例如和。途徑激活可以是B連環(huán)蛋白變異導(dǎo)致的，也可能是由其他的重要分子途徑變異導(dǎo)致，例如基因（在患家族性腺息肉病的病人中），I。在很大一部分肝母細(xì)胞瘤病人中還有信號途徑的激活，高水平的和蛋白水平被發(fā)現(xiàn)，以及下游的（膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因），（凋亡抑制基因）、c隨著一些肝母細(xì)胞瘤中負(fù)調(diào)節(jié)蛋白低表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，可以在這些腫瘤中發(fā)現(xiàn)信號途徑的自分泌激活7在免疫組化上，最近發(fā)現(xiàn)了途徑成員（膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因）的表達(dá)程度與患兒腫瘤的分

13、級、大小及預(yù)后有著密切的聯(lián)系8遺傳性的或者后的天突變主要出現(xiàn)在上，這個突變導(dǎo)致的過度表達(dá)，在大部分肝母細(xì)胞瘤中再次導(dǎo)致/通路的激活7下游的（哺乳動物雷帕霉素靶蛋白）在這些腫瘤中強(qiáng)烈表達(dá)并有較強(qiáng)的活性，這些腫瘤靠這種激活途徑長期存活。肝細(xì)胞生長因子能夠刺激數(shù)種不同的細(xì)胞活動，例如生長、侵犯、細(xì)胞運動性、細(xì)胞分化及血管生成等。在胚胎發(fā)育期及傷口愈合劑器官再生時表現(xiàn)活躍，/信號傳導(dǎo)主要存在以下幾種通路：通路和細(xì)胞絲裂原活化蛋白激酶o通路肝母細(xì)胞瘤病人表現(xiàn)的高表達(dá)，即便是在行腫瘤切除術(shù)后仍可出現(xiàn)，它能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵犯周圍組織和壽命延長。另外最近研究發(fā)現(xiàn)一種在成人許多腫瘤中高表達(dá)的酪氨酸激酶受體

14、（）在許多肝母細(xì)胞瘤中也呈現(xiàn)出過度表達(dá)，也可能對這個腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要意義最近的實驗室研究證明信號通路（一個高度保守的細(xì)胞間信號調(diào)節(jié)傳導(dǎo)系統(tǒng)，它通過特異的信號上下級聯(lián)作用影響細(xì)胞的增殖，分化和凋亡）、分子及（微小）的高表達(dá)，這些都可能促進(jìn)腫瘤的惡性行為。另外對于后天性抑癌基因突變研究發(fā)現(xiàn)在肝母細(xì)胞瘤中抑癌基因的啟動子超甲基化比較常見，這導(dǎo)致了上述的和信號途徑的激活，或者抑制了抗增殖及細(xì)胞程序性凋亡調(diào)節(jié)器7最近有人在通過應(yīng)用微點陣分析研究肝母細(xì)胞瘤的分子表型。最有希望的一個是等，他們定義了一個右個基因組成的系統(tǒng)，從組織分化良好的預(yù)后好的腫瘤到組織分化不好預(yù)后差的腫瘤。在這個基因譜中有許多都是上

15、面描述過的對于不同的信號途徑起重要作用的基因。應(yīng)用這個基因譜再加上詳細(xì)的臨床試驗，肝母細(xì)胞瘤的分子分類有可能成為現(xiàn)實23。缺氧誘導(dǎo)因子，是近年來發(fā)現(xiàn)的一類介導(dǎo)哺乳動物細(xì)胞內(nèi)低氧反應(yīng)的核轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，是細(xì)胞在基因轉(zhuǎn)錄水平協(xié)調(diào)缺氧變化的最主要的調(diào)節(jié)因子2。是介導(dǎo)腫瘤缺氧適應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，存在種亞型：、與F其中與與腫瘤生長的關(guān)系較為密切。相關(guān)的蛋白包括、和a-董巋然等學(xué)者探討了缺氧誘導(dǎo)因子及其相關(guān)蛋白在肝母細(xì)胞瘤中表達(dá)情況及其作用。其研究結(jié)果提示在肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展中很可能起著重要作用；而a還有望成為判斷肝母細(xì)胞瘤預(yù)后的新的指標(biāo)；a對一a的獨立作用也許是其影響預(yù)后因素的可能機(jī)制25。葡萄糖調(diào)

16、節(jié)蛋白一，和一,為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白，是細(xì)胞為了適應(yīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)所產(chǎn)生的應(yīng)激蛋白。近年研究證實一些惡性腫瘤和呈高表達(dá)，且與其進(jìn)展、轉(zhuǎn)移發(fā)生及預(yù)后密切相關(guān)。和產(chǎn)生對腫瘤細(xì)胞有保護(hù)作用，這極可能是某些晚期腫瘤患者對放療和化療不敏感的原因之一。陳干農(nóng)等研究證明兒童肝組織中和表達(dá)陽性率明顯高于正常肝組織，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期II期病例及表達(dá)陽性率明顯低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期mw期病例.肝母細(xì)胞瘤是一種多面性疾病,隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展，生物與遺傳學(xué)標(biāo)記的不斷增多表明腫瘤的發(fā)展存在復(fù)雜變化。許多研究試圖確定敏感性強(qiáng)、特異度高的標(biāo)記物在診斷、篩查、預(yù)后等領(lǐng)域的重要價值。但單獨的

17、研究涉及的病例數(shù)較少,代表性差,這就需要我們對于目前的研究進(jìn)行一個系統(tǒng)的總結(jié)和分析。這樣能夠發(fā)現(xiàn)單獨研究所不能揭示的潛在問題,可以辨別將來肝母細(xì)胞瘤研究的重要方向,對于已有的研究進(jìn)行客觀的評價。周高紅張志波歐陽玲張可仞王維林周肝母細(xì)胞瘤基因組不平衡性與染色體變異周中華腫瘤志1)2：915-919周建斌，李代.肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡和增殖狀況及其相關(guān)基因表達(dá)的研究】醫(yī)學(xué)臨床研究，.胡友主3基因在肝母細(xì)胞瘤中的表達(dá)研究及意義D暨南大學(xué)，.胡友主孫健.肝母細(xì)胞瘤組織RC蛋白及膜型基質(zhì)金屬蛋白酶一的表達(dá)及與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制關(guān)系的探討D青島大學(xué)，201013羅.營,糜若然,岳天孚等.C-myc蛋白在宮頸癌組織中

18、的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系J中.國腫瘤臨床,1999,26(2):115116.華堯楷，鄭妙凌.Cmyc及增殖細(xì)胞核抗原在小兒肝母細(xì)胞瘤中表達(dá)及其臨床意義暨南大學(xué)學(xué)報醫(yī)學(xué)版)，第22卷第2期200年14月15謝勇,龍光輝,劉曉平,等.肝母細(xì)胞瘤的綜合治療及影響預(yù)后的因素評價J.實用兒科臨床雜志,2008,23(11):833-835.趙中海譯,耿小平校.肝母細(xì)胞瘤治療方案及預(yù)后相關(guān)因素評價J.國外醫(yī)學(xué)文摘,2003,11(3):175-182.HeidelepatoinaseimmunoimmermannA,Perilongoerg,Springer,iYC,DengYH,lastomapat

19、ients.ietscerittenistocratCo,insightintotonFroanH,Steigerinhepato,Chenemicalstalogolowkinetal.Prognostice，d2R0es1schnerlastomas.MonatsscSchultzR,etal.y.PediatrDeendMiaA,FabrMe,etal.egenesisofthiseinagelertumouronSceinitD(edsediatricLivermoalgeogsignalcomponentexpressionsinetal.rKinpressionanerheilAc

20、tivateatholexpressoifonSERrJCancerapplerR,etal.MicroRCHisepiantop-regulatedinmetastaticepatoblastoma.Hepatology3.CairoS,ArmengolC,DeReyniesA,etal.Hepaticstem-lint/betacateninanycsignalinginaggressiilnctionofthereceptortyrosineerexpressedinhepatoblastomaseadofprint.lastomaA:possibleaheadofprint.ispro

21、cessedfromthekeratinenotypeandinterplayooodliercancer.CancerCellHeidelepatoinaseimmunoimmermannA,Perilongoerg,Springer,iYC,DengYH,lastomapatients.ietscerittenistocratCo,insightintotonFroanH,Steigerinhepato,Chenemicalstalogolowkinetal.Prognostice，d2R0es1schnerlastomas.MonatsscSchultzR,etal.y.PediatrD

22、eendMiaA,FabrMe,etal.egenesisofthiseinagelertumouronSceinitD(edsediatricLivermoalgeogsignalcomponentexpressionsinetal.rKinpressionanerheilActivateatholexpressoifonSERrJCancerapplerR,etal.MicroRCHisepiantop-regulatedinmetastaticepatoblastoma.Hepatology3.CairoS,ArmengolC,DeReyniesA,etal.Hepaticstem-li

23、nt/betacateninanycsignalinginaggressiilnctionofthereceptortyrosineerexpressedinhepatoblastomaseadofprint.lastomaA:possibleaheadofprint.isprocessedfromthekeratinenotypeandinterplayooodliercancer.CancerCellge.Semenza，GWLangGIAnuclearfactorinduceyhypoxiaviadenovoproteinsynthesisbinds.Semenza，GWLangGIAn

24、uclearfactorinduceyhypoxiaviadenovoproteinsynthesisbindstothehumangeneenhanceratasiterepuriedfortranscriptionalactivMaotlioCnellBio.何煒婧董巋然肖現(xiàn)民等.缺氧誘導(dǎo)因子及其相關(guān)蛋白在肝母細(xì)胞瘤中的表達(dá).中華小兒外科科雜志(.73)1：26，UramotoH，SugioK，OyamaT，NakatSa，OnoK，YoshimastueTta1ExpressioonfendoplasmicreticulummolecularchaperoneGrp78inhumanlungcanceranditsclinicalsigniLfuicnagnceJCancer，20，05