1、Evaluation Warning: The document was created with Spire.Doc for .NET.犬細(xì)小病毒病臨床診斷方法的篩選及新治療手段的研究作者姓名：程雪梅指導(dǎo)教師：柴春彥彥學(xué)科（專(zhuān)業(yè)業(yè)）：獸獸醫(yī)論文提交日日期：220088.5.20學(xué)號(hào)：1006155020019關(guān)鍵詞：犬犬細(xì)小病病毒病，聚聚合酶鏈鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)，診斷斷，治療療申請(qǐng)學(xué)位級(jí)級(jí)別：碩碩士犬細(xì)細(xì)小病毒毒病臨床診斷方方法的篩篩選及新新治療手手段的研研究摘 要對(duì)上海市犬犬細(xì)小病病毒病進(jìn)進(jìn)行了發(fā)發(fā)病率調(diào)調(diào)查，同同時(shí)進(jìn)行行了治療療手段的調(diào)查。設(shè)設(shè)計(jì)了聚聚合酶鏈鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)，免疫疫膠體金金試紙條條，酶

2、聯(lián)聯(lián)免疫吸吸附試驗(yàn)，血血凝試驗(yàn)驗(yàn)四種方方法診斷斷犬細(xì)小小病毒病病。并采采用單克克隆抗體體、干擾素、單單克隆抗抗體干擾擾素相結(jié)結(jié)合等綜綜合治療療措施對(duì)對(duì)該病進(jìn)進(jìn)行了分分組治療。目的的是篩選選出當(dāng)前前最佳實(shí)實(shí)驗(yàn)室診診斷方法法，并選選擇最適適合的治治療措施。結(jié)果果表明，春春季犬細(xì)細(xì)小病毒毒病在上上海市的的發(fā)病率率高，占占門(mén)診比比例的19.2%以以上，應(yīng)應(yīng)用PCCR診斷斷診斷犬犬細(xì)小病病毒病的的準(zhǔn)確率率達(dá)955.7%，而且成本低低，敏感感性，特特異性強(qiáng)強(qiáng)，完全全可以應(yīng)應(yīng)用于實(shí)實(shí)驗(yàn)室和和臨床診診斷中。實(shí)驗(yàn)應(yīng)應(yīng)用的綜綜合治療療措施對(duì)對(duì)犬細(xì)小小病毒病病早期的的治愈率率達(dá) 884%，中期的治愈愈率達(dá) 45%，

3、晚期期的治愈愈率為 9%以以上，是是一種行行之有效效的治療措施。摘要就是對(duì)你整個(gè)文章核心內(nèi)容的高度概況，也就是讀者看完你的摘要就能了解你整片文章的結(jié)構(gòu)和思路。疾病類(lèi)的包括主要臨床癥狀（代表這種疾病的最顯著癥狀），實(shí)驗(yàn)室診斷，行業(yè)中公認(rèn)的或是GB(國(guó)家）NY(地方、行業(yè)）權(quán)威認(rèn)可的方法，的重要結(jié)果確。以及你的治療方法。摘要就是對(duì)你整個(gè)文章核心內(nèi)容的高度概況，也就是讀者看完你的摘要就能了解你整片文章的結(jié)構(gòu)和思路。疾病類(lèi)的包括主要臨床癥狀（代表這種疾病的最顯著癥狀），實(shí)驗(yàn)室診斷，行業(yè)中公認(rèn)的或是GB(國(guó)家）NY(地方、行業(yè)）權(quán)威認(rèn)可的方法，的重要結(jié)果確。以及你的治療方法。關(guān)鍵詞：犬犬細(xì)小病病毒病 聚

4、合酶酶鏈?zhǔn)椒捶磻?yīng) 診診斷 治治療o(wú)nn Diiagnnosiis aand Treeatmmentt off Caaninne表 1 犬犬細(xì)小病病毒在不不同季節(jié)節(jié)的發(fā)病病情況 5488 例病病犬逐月月發(fā)病情情況月份 1 2 33 4 5 66 7 8 99 100 111 122發(fā)病數(shù) 227 224 332 445 663 334 330 228 997 779 558 331百分率% 4.99 4.3 55.8 8.77 111.4 6.22 5.4 55.1 17.7 11444 1005 5.66圖 1 年年平均發(fā)發(fā)展趨勢(shì)勢(shì)05101520253035第一季度 第三季季度2001200

5、220032004200520061233 傳染染源本病主要傳傳染源為為病犬，康康復(fù)犬，以以及無(wú)臨臨床癥狀狀的帶毒毒犬。病病毒隨病病犬的糞糞便，尿尿液，嘔吐物，唾唾液等排排出體外外，污染染食物，器器具等周周?chē)h(huán)境境從而使使犬感染染。病犬犬在感染染的第 344天，即可通通過(guò)糞便便向外界界排毒，此此時(shí)病毒毒呈單個(gè)個(gè)散在，傳傳染性也也最強(qiáng)。77100 天后后隨著腸腸黏膜 IgAA 的產(chǎn)產(chǎn)生和隨隨出血進(jìn)進(jìn)入腸道道的 IIgA 等 CCPV 特異抗抗體的增增多，散散在的病病毒被凝凝集到一一起，感染性降低低，血凝凝性也大大大降低低甚至喪喪失。1244 易感感動(dòng)物本病主要以以感染未未經(jīng)免疫疫的斷奶奶仔犬為為

6、主，成成年犬發(fā)發(fā)生較少少，且多多呈良性性經(jīng)過(guò)。斷斷乳前后的仔犬最最易感染染，多以以同窩爆爆發(fā)為特特征，幼幼犬（尤尤其是離離乳 1153 個(gè)個(gè)月的仔仔犬）平平均發(fā)病率 6554%，有時(shí)時(shí)高達(dá) 1000%。在在養(yǎng)犬較較集中的的地方，常常呈地方方性流行行。據(jù)統(tǒng)統(tǒng)計(jì) 4488 例病犬中，最小小的為 15 日齡，最最大的為為 5 歲，其其中，11 月齡齡以?xún)?nèi)的的 7 例，223 月齡的的 655 例，445月齡的 2254 例，667 月齡的的 711 例，77122 月齡齡的 444 例例，122 月齡齡以上的的 7 例。雄雄性犬 2066 例，占 4598%，雌性性犬 2242 例，占占 54402

7、2%；警警犭 4431 例，占占 9662%，普通通家犬 17 例，占占 38%。由此可見(jiàn)，本本病不分分品種，性性別，年年齡，均均可發(fā)病病，但以以純種警警犭易感感。年齡齡與易感感性也有一定的的關(guān)系，其其中以幼幼齡犬居居多。- 3-1255 傳播播途徑本病主要由由直接接接觸或間間接接觸觸病犬和和污染物物而感染染，病毒毒主要由由感染犬犬的糞便便，尿液液，嘔吐物，唾唾液中排排出，并并通過(guò)污污染的食食物，墊墊草，餐餐具和周周?chē)沫h(huán)環(huán)境而使使易感犬犬受到感感染。病毒經(jīng)消化化道進(jìn)入入機(jī)體，人人工皮下下，肌肉肉，或靜靜脈接種種也能引引起發(fā)病病。但特特定菌叢叢犬癥狀狀較輕，有時(shí)僅僅見(jiàn)體溫溫升高與與血細(xì)胞胞減少

8、，需需要其它它微生物物協(xié)同作作用，才才會(huì)出現(xiàn)現(xiàn)嚴(yán)重的的臨床癥癥狀。還本病的犬犬康復(fù)后后，任長(zhǎng)長(zhǎng)期帶毒毒，可從從糞尿中中長(zhǎng)期排排毒，成成為本病病的重要要隱性傳傳染源。不不經(jīng)嚴(yán)格消毒的的車(chē)輛，用用具，甚甚至飼養(yǎng)養(yǎng)和醫(yī)療療人員的的衣服，鞋鞋子，器器具等也也可成為為散播本本病的媒媒介。1.2.66 不同同品種的的發(fā)病情情況對(duì) 3433 例細(xì)細(xì)小病毒毒病犬的的品種進(jìn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)，博美美、可卡卡、京巴巴的發(fā)病病數(shù)居前前 3 位，占占發(fā)病犬總數(shù)的 6064。各品種的發(fā)發(fā)病情況況見(jiàn)表 2表 2 犬犬細(xì)小病病毒病犬犬各品種種的發(fā)病病數(shù)品種 發(fā)病病數(shù)/只只 占全全部病犬犬比例%博美 1009 331.778可卡 5

9、44 155.744京巴 455 133.122黑背 277 7.87蘇格蘭犬 24 7.000吉娃娃 224 77.000西施 211 6.12八哥 100 2.92金毛獵犬 10 2.992沙皮 7 2.004其他 122 3.05合計(jì) 3443 110013 發(fā)發(fā)病機(jī)理理病毒侵入后后在感染染的頭兩兩天，病病毒在口口咽部位位復(fù)制，通通過(guò)血流流傳播到到其它器器官，第第 35天出現(xiàn)病毒毒血癥。雖雖然通常常腸炎病病癥明顯顯，但細(xì)細(xì)小病毒毒病感染染是全身身性的。病病毒是通通過(guò)血流流- 44-而不是腸腔腔到達(dá)腸腸黏膜。基基于這個(gè)個(gè)原因，血血清抗體體效價(jià)與與保護(hù)極極其相關(guān)關(guān)，被動(dòng)動(dòng)獲得的的抗體在在足夠

10、能量時(shí)時(shí)完全可可以保護(hù)護(hù)動(dòng)物。腸腸道 IIgA 對(duì)保護(hù)護(hù)是非必必需的。知知道口服服 CPPV 后后 45 天天，臨床上才明顯顯表現(xiàn)出出腸道的的癥狀。一一般認(rèn)為為潛伏期期為 33 至 7 或或 8 天，第第 3 天首次次排毒，常常在明顯的臨床癥癥狀出現(xiàn)現(xiàn)之前排排毒。犬細(xì)小病毒毒病的病病理變化化主要取取決于病病毒對(duì)分分離細(xì)胞胞所需要要的必要要條件。因因此，病病毒復(fù)制主要在腸腸，淋巴巴組織和和骨髓。細(xì)細(xì)胞也必必須具有有適當(dāng)?shù)牡牟《臼苁荏w，因因?yàn)椴⒉徊皇撬杏芯邆浼?xì)細(xì)胞增值的組織織都受影影響。加加速細(xì)胞胞增值有有利于病病毒復(fù)制制，加重重病理變變化和臨臨床癥狀狀。因此此，如果感染犬冠冠狀病毒毒先于 CP

11、VV，冠狀狀病毒通通過(guò)破壞壞更多的的成熟絨絨毛上皮皮細(xì)胞來(lái)來(lái)刺激腸腸腺胚上上皮的增值，導(dǎo)導(dǎo)致雙重重感染，比比其它任任何一種種感染都都嚴(yán)重。在在腸道內(nèi)內(nèi)，細(xì)小小病毒的的復(fù)制殺殺死了腸腺的胚上上皮細(xì)胞胞，導(dǎo)致致上皮脫脫落，絨絨毛變短短，嘔吐吐和服瀉瀉。淋巴巴壞死和和骨髓增增值細(xì)胞胞的破壞導(dǎo)致淋巴巴細(xì)胞減減少，嚴(yán)嚴(yán)重者出出現(xiàn)泛白白細(xì)胞減減少癥。犬細(xì)小病毒毒病能很很快產(chǎn)生生棉衣，臨臨床癥狀狀一出現(xiàn)現(xiàn)即可檢檢出細(xì)小小病毒循循環(huán)抗體體，而在在臨床發(fā)病期間迅迅速達(dá)到到高峰，能能迅速產(chǎn)產(chǎn)生免疫疫反映是是疾病臨臨床癥狀狀嚴(yán)重的的一個(gè)關(guān)關(guān)鍵因素素。能限限制病毒血癥的的程度和和持續(xù)時(shí)時(shí)間的動(dòng)動(dòng)物，其其癥狀就就較緩和

12、和，康復(fù)復(fù)的機(jī)會(huì)會(huì)就較大大。這可可以解釋釋為什么當(dāng)滅活疫疫苗保護(hù)護(hù)減弱時(shí)時(shí)應(yīng)能使使犬不發(fā)發(fā)病，對(duì)對(duì)感染的的記憶反反映之快快足以縮縮短病毒毒血癥。如如果犬在感染的的急性階階段幸存存下來(lái)，通通常能迅迅速和完完全地從從腸炎病病狀康復(fù)復(fù)，甚至至在致命命的病例例，都有腸再生生的例證證。僅僅僅是現(xiàn)在在已很罕罕見(jiàn)的心心肌炎病病例可導(dǎo)導(dǎo)致心肌肌損害的的慢性進(jìn)進(jìn)行性疾疾病。免疫是長(zhǎng)期期的和完完全的，間間隔兩年年再受到到攻擊應(yīng)應(yīng)能抵抗抗感染。14. 臨床癥癥狀：根據(jù)臨床癥癥狀可分分為兩種種：即腸腸炎型和和心肌炎炎型。1411 腸炎炎型：腸炎型又稱(chēng)稱(chēng)出血性性腸炎，潛潛伏期77一l44d，主主要表現(xiàn)現(xiàn)為急性性出血性性

13、腹瀉、嘔嘔吐、沉沉郁、白白細(xì)胞顯著減減少等癥癥狀?；蓟既裆癯劣?，食食欲廢絕絕，嘔吐吐，體質(zhì)質(zhì)迅速衰衰弱。不不久，發(fā)發(fā)生腹瀉瀉，呈噴射狀排排出，糞糞便呈黃黃色或灰灰黃色，隨隨后糞便便呈番茄茄汁樣，帶帶有血液液，發(fā)出出難聞的的腥臭味味。體溫升高到到404l，呈稽稽留熱4。呼吸及心心跳增數(shù)數(shù) (11202000次mmin)。1422 心肌肌炎型：此型多見(jiàn)于于46周齡齡的幼犬犬。發(fā)病病的特征征是臨床床癥狀未未出現(xiàn)就就突然死死亡，或或者是出出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸困困難之后后死亡。病病犬常突突然病情情加重，肌肌肉震顫顫，四肢肢末端和和耳鼻發(fā)發(fā)涼，可可視黏膜膜蒼白，病犬犬迅速衰衰竭，呼呼吸極度度困難(可持續(xù)續(xù)2

14、030 minn)，體體溫升高高，心率率加快(2000次mmin- 1-1 前言11 犬犬細(xì)小病病毒病的的特性該病病原體體為CPPV，屬屬細(xì)小病病毒科細(xì)細(xì)小病毒毒屬，是是哺乳動(dòng)動(dòng)物中最最小、結(jié)結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)簡(jiǎn)單的一一類(lèi)單鏈線(xiàn)狀DDNA病病毒。病病毒粒子子直徑220nmm，無(wú)囊囊膜，二二十面體體立體對(duì)對(duì)稱(chēng)，呈呈圓形或或六邊形形，其基因組大大小約55KB，CCPV基基因組有有兩個(gè)主主要的開(kāi)開(kāi)放閱讀讀框架，33端編碼碼結(jié)構(gòu)蛋蛋白，55端編碼非結(jié)構(gòu)構(gòu)蛋白1。CPV對(duì)對(duì)外界理理化因素素的抵抗抗力非常常強(qiáng)，這這與病毒毒的化學(xué)學(xué)組成和和解構(gòu)特特點(diǎn)密切相關(guān)。病病毒無(wú)囊囊膜，不不含脂質(zhì)質(zhì)和糖類(lèi)類(lèi)，結(jié)構(gòu)構(gòu)堅(jiān)實(shí)緊緊密，絕

15、絕大多數(shù)數(shù)病毒能能耐受連續(xù)分鐘而而不喪失失其感染染性，個(gè)個(gè)別病毒毒能耐受受更高的的溫度。在在，于病毒保持持感染性性分分鐘，而而在此條條件之外外，病毒毒感染性性迅速降降低。低低溫長(zhǎng)期期存放的的CPVV其感染性不不發(fā)生明明顯變化化。CPPV對(duì)乙乙醚、氯氯仿、醇醇類(lèi)和去去氧膽酸酸鹽有抵抵抗性，無(wú)無(wú)論感染染性還是血凝性都都不受影影響。消消毒劑可可用于滅滅活CPPV,最最有效的的是福爾爾馬林、氨氨水和氧氧化劑等等212 流流行病學(xué)學(xué)1.2.11 犬細(xì)細(xì)小病毒毒病的感感染CPV是119788年美國(guó)國(guó)Apppel3等從患腸炎炎的病犬犬中分離離獲得，主主要引起起犬的出出血性腸腸炎和幼幼犬心肌炎，并并使白細(xì)細(xì)胞

16、大量量減少，幼幼犬的發(fā)發(fā)病率和和死亡率率都很高高。該病病發(fā)現(xiàn)時(shí)時(shí)間不長(zhǎng)長(zhǎng)，但在在歐、美等一一些商業(yè)業(yè)飼犬場(chǎng)場(chǎng)，相繼繼有流行行和造成成幼犬群群損失的的報(bào)道，除除美國(guó)外外，己相相繼在英英國(guó)。德國(guó)和法國(guó)國(guó)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)當(dāng)前己成成為犬的的一種重重要傳染染病，我我國(guó)亦有有本病的的爆發(fā)流流行，并并己分離離獲得多株病毒毒，研究究報(bào)道日日趨增多多，并發(fā)發(fā)現(xiàn)它在在抗原性性上與貓貓泛白細(xì)細(xì)胞減少少癥病毒毒有密切切關(guān)系2主要調(diào)查了了上海地地區(qū)家家寵物醫(yī)醫(yī)院從220011年到220077年15500個(gè)個(gè)腹瀉有有關(guān)病例例。其中中有6554例犬細(xì)小病病毒病. 調(diào)查查結(jié)果表表明,春春季犬細(xì)細(xì)小病毒毒病在上上海市的的發(fā)病率率高,占

17、占門(mén)診比比例的19.2%以上,該病死死亡率達(dá)達(dá)78%,且當(dāng)當(dāng)前這些些寵物醫(yī)醫(yī)院對(duì)該該病的治治愈率達(dá)達(dá)20%.1222 季節(jié)節(jié)性本病一年四四季均可可發(fā)生，但但在春季季（36 月月）和秋秋季（99111 月）發(fā)發(fā)病率較較高，共共統(tǒng)計(jì)了了548 例例嘔吐和和服瀉的的病犬，當(dāng)當(dāng)時(shí)疑為為犬細(xì)小小病毒性性腸炎分分別占全全年發(fā)病病總數(shù)的的 322.1%和42.6%。同時(shí)時(shí)，在臨臨床調(diào)查查中還發(fā)發(fā)現(xiàn)本病病與犬瘟瘟熱有間間隔爆發(fā)發(fā)的流行行特點(diǎn)。結(jié)結(jié)果見(jiàn)表表 1:- 55-以上)，心心區(qū)聽(tīng)診診有明顯顯的心內(nèi)內(nèi)雜音，心心電圖顯顯示多灶灶性期外外收縮(即心肌肌損傷)。14.33 病理理剖檢：死亡犬極度度脫水，消消瘦，

18、腹腹部蜷縮縮，眼球球下陷，黏黏膜蒼白白。腸粘粘膜嚴(yán)重重剝落，腸腸壁彌漫漫性充血和出出血，呈呈暗紅色色。腸淋淋巴結(jié)腫腫大、充充血，腸腸內(nèi)容物物呈醬油油色，具具有惡臭臭味。幼幼齡死犬表現(xiàn)為肺肺淡紅及及輕度水水腫，氣氣管及支支氣管內(nèi)內(nèi)有多量量泡沫樣樣液體，肝肝淤血，水水腫。心心肌軟化化，顏色變淡，心心內(nèi)膜及及心外膜膜上有出出血點(diǎn)5。15鑒別別診斷1511 犬細(xì)細(xì)小病毒毒?。河蒀PV引引起，CCPV能能在犬腎腎細(xì)胞和和貓腎細(xì)細(xì)胞(原原代和傳傳代上皮皮細(xì)胞)上生長(zhǎng)長(zhǎng)，在44或255的條件下，能能聚集恒恒河猴的的紅細(xì)胞胞，而不不聚集其其他動(dòng)物物的紅細(xì)細(xì)胞，這這一生物物特性可可對(duì)CPPV作出實(shí)驗(yàn)室鑒鑒定提供

19、供條件6。1522 犬瘟瘟熱：也出現(xiàn)嘔吐吐、腹瀉瀉，但癥癥狀輕微微，沒(méi)有有犬細(xì)小小病毒病病中的西西紅柿湯湯狀暗紅紅色的腥腥臭糞便便。該病主要以以雙相熱熱型、神神經(jīng)癥狀狀、后軀軀癱瘓、上上呼吸道道黏膜和和眼結(jié)膜膜的膿性性卡他、皮皮膚上的的紅色丘疹和和硬足掌掌癥為特特征。1533 犬細(xì)細(xì)菌性出出血性腸腸炎：有食人腐敗敗變質(zhì)食食物病史史，盡管管也發(fā)生生嘔吐、腹腹瀉和脫脫水，但但易與犬犬細(xì)小病病毒病相相區(qū)別。1544 犬傳傳染性肝肝炎：以暫時(shí)性角角膜渾濁濁，黃疸疸，囊壁壁水腫，肝肝腫大，表表面呈花花斑狀為為特征。嘔嘔吐、腹腹瀉和脫脫水較輕，糞糞便呈黃黃色粥樣樣，偶爾爾混有少少量血液液，且無(wú)無(wú)犬細(xì)小小病

20、毒病病糞便的的腥臭味味。1555 犬?dāng)硵呈筲c鹽鹽或殺鼠鼠迷中毒毒：以?xún)?nèi)、外出出血為特特征。外外出血表表現(xiàn)可視視黏膜出出血，注注射針孔孔出血和和陰道出出血；內(nèi)內(nèi)出血主主要見(jiàn)于眼底底出血，心心包血腫腫，縱膈膈血腫及及胸腔積積血。雖雖然該病病也出現(xiàn)現(xiàn)嘔吐、腹腹瀉和血血便，但但癥狀輕微，糞糞便中無(wú)無(wú)犬細(xì)小小病毒病病的特異異性臭味味，且有有食人毒毒餌和毒毒鼠的病病史。維維生素KKl為本病的特特效解毒毒藥，若若配合催催吐洗胃胃等治療療措施，初初、中期期病犬迅迅速獲愈愈。1566 犬鉤鉤端螺旋旋體?。憾喟l(fā)于夏季季(79月)，有明明顯黃疸疸、血尿尿，尿在在暗視野野顯微鏡鏡下可檢檢查出蟲(chóng)蟲(chóng)體。1.6 實(shí)實(shí)驗(yàn)室檢

21、檢查大細(xì)小病毒毒性腸炎炎有較明明顯的臨臨床癥狀狀和病理理變化，可可據(jù)此做做出初步步診斷，但但確診必必須依靠實(shí)驗(yàn)室室診斷。常常用的實(shí)實(shí)驗(yàn)室診診斷方法法有病毒毒分離、HHA/HHI試驗(yàn)驗(yàn)、電鏡鏡負(fù)染及及ELIISA和和PCRR- 66-等。病毒分離法法雖然較較為敏感感，但是是耗費(fèi)時(shí)時(shí)間太長(zhǎng)長(zhǎng)，因此此一般用用于新疫疫區(qū)，或或?yàn)榱藢?duì)對(duì)流行毒毒株進(jìn)行研究究比較7。16.11 血液液學(xué)檢查查:正常犬血液液白細(xì)胞胞數(shù)為(6ll1)109L，犬細(xì)細(xì)小病毒毒病患犬犬白細(xì)胞胞明顯減減少，小小犬可降低到(001 02)109L，多數(shù)數(shù)在(OO52)109L，由于于其他原原因引起起的嚴(yán)重重腹瀉也會(huì)使白細(xì)細(xì)胞減少少，故

22、此此法只能能作為輔輔助診斷斷。1.622 血凝凝試驗(yàn)(HA)與血凝凝抑制試試驗(yàn)(HHI) :在診斷時(shí)，可可根據(jù)病病程決定定選擇血血清學(xué)診診斷方法法。1）HA：取糞便便樣品和和臟器樣樣品處理理后，用用055豬紅紅細(xì)胞懸懸液在44時(shí)按比比例混合合，充分分振蕩后，結(jié)果果判定的的方法是是以出現(xiàn)現(xiàn)50的紅細(xì)細(xì)胞凝集集為終點(diǎn)點(diǎn)，HAA效價(jià)以以出現(xiàn)終終點(diǎn)凝集集的樣品品最高稀釋倍數(shù)數(shù)表示。2）HI：將病犬犬血清、腹腹水或乳乳汁樣品品作l：5稀釋釋?zhuān)瑴缁罨詈筮B續(xù)續(xù)稀釋?zhuān)址謩e加血血凝素抗抗原和豬紅細(xì)胞。判判定方法法是以完完全不凝凝集為抑抑制終點(diǎn)點(diǎn)，樣品品的HII 效價(jià)價(jià)以其出出現(xiàn)終點(diǎn)點(diǎn)抑制的的樣品最高稀釋倍倍數(shù)

23、表示示。但Annaamarria Praatollli等等8通過(guò)比較接接種CPPV2或或CPVV2b滅滅活苗幼幼犬的中中和抗體體反應(yīng)得得出以下結(jié)論：HI試試驗(yàn)并不不總能準(zhǔn)準(zhǔn)確地評(píng)評(píng)估攜帶帶有犬細(xì)細(xì)小病毒毒病犬的的真實(shí)免免疫狀況況。進(jìn)行HA試試驗(yàn)可以以取發(fā)病病早期的的病犬糞糞便，并并用HII試驗(yàn)確確定其特特異性。發(fā)發(fā)病后期期由于腸腸粘膜分泌抗體體，糞便便樣品血血凝性下下降或消消失，但但卻經(jīng)常常出現(xiàn)HHI作用用。通過(guò)過(guò)血凝試試驗(yàn)還可可以將CCPV同F(xiàn)PV和和MEVV區(qū)別開(kāi)開(kāi)9,1001.6.33 血清清中和試試驗(yàn)(SSN)本試驗(yàn)在細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)物中進(jìn)進(jìn)行，多多采用稀稀釋病毒毒一固定定血清法法。臨床床

24、應(yīng)用意意義不大大。1.6.44 免疫疫擴(kuò)散試試驗(yàn)用0011 M、ppH74的PPBS配配制1瓊脂糖糖凝膠，制制備平板板，進(jìn)行行瓊脂擴(kuò)擴(kuò)散試驗(yàn)驗(yàn)，測(cè)定定病毒抗原和相相應(yīng)抗血血清的反反應(yīng)，337濕盒感感作，22448 h，即即可得出出結(jié)果。此此法簡(jiǎn)便便、經(jīng)濟(jì)濟(jì)、特異，但敏敏感性不不高。1.6.55 酶聯(lián)聯(lián)免疫吸吸附試驗(yàn)驗(yàn)(ELLISAA)此法因其便便利、快快速、敏敏感、特特異性強(qiáng)強(qiáng)，便于于自動(dòng)化化，能檢檢測(cè)群體體特異性性抗體而而備受人人們的關(guān)注。119944年，DDranne DDP等建建立了一一種CPPVELLISAA，此法法可在野野外對(duì)犬犬糞便中中的CPPV抗原原進(jìn)行快速檢檢測(cè)?，F(xiàn)現(xiàn)在，EEL

25、ISSA檢測(cè)測(cè)法在國(guó)國(guó)外已廣廣泛推廣廣，并已已有商品品化試劑劑盒。- 7-1.6551 間接EELISSA：吳吳金石等等11用蔗糖密度度梯度離離心和凝凝膠層吸吸純化CCPV作作抗原，建建立了檢測(cè)CPPV抗體體的問(wèn)接接ELIISA法法。其特特異性和和穩(wěn)定性性良好，結(jié)結(jié)果判定定準(zhǔn)確明明顯、易易于把握握。1.655. 22 抗原原競(jìng)爭(zhēng)EEL1SSA：此法也稱(chēng)競(jìng)競(jìng)爭(zhēng)性抑抑制ELLISAA，主要要用于測(cè)測(cè)定小分分子抗原原，如CCPV。RRimmmelzzwaaan GGF等12分別用間接接ELIISA、抗抗原競(jìng)爭(zhēng)爭(zhēng)ELIISA和和HI試試驗(yàn)對(duì)犬犬血清中中的CPPV特異異性抗體體進(jìn)行了了檢測(cè)比比較，結(jié)果發(fā)

26、現(xiàn)，兩兩種ELLISAA的特異異性和可可操作性性比HII的都高高。據(jù)報(bào)報(bào)道國(guó)外外有學(xué)者者分別用用抗原競(jìng)競(jìng)爭(zhēng)ELISAA和HAA試驗(yàn)對(duì)對(duì)犬糞便便中的CCPV進(jìn)進(jìn)行了檢檢測(cè)并對(duì)對(duì)結(jié)果進(jìn)進(jìn)行了比比較。1.6553 雙抗體體ELIISA：此法建立在在單克隆隆抗體技技術(shù)之上上，對(duì)CCPV的的紅血球球凝集蛋蛋白具有有特異性性。Miildbbrannd MMM等 (19984年年)用雙雙抗體EELISSA檢測(cè)測(cè)了犬糞糞便樣品品中的CCPV。1.6554 雙抗體體加心EELISSA(DDas-ElIISA)：利用此原理理已研制制出犬CCPV酶酶標(biāo)診斷斷試劑盒盒13,114，此試劑盒盒在300 miin內(nèi)即即可

27、用肉肉眼判定定結(jié)果，具有有簡(jiǎn)便、快快捷、特特異性高高的優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)。其方方法是：取少許許糞便溶溶于生理理鹽水中中，取一一滴懸濁液加到到犬CPPV酶標(biāo)標(biāo)診斷試試劑盒，330 mmin出出現(xiàn)明顯顯的沉淀淀線(xiàn)，即即判為陽(yáng)陽(yáng)性。RRimmmelzzwaaan GGF等12分別用DaasElJJSA和和HA試試驗(yàn)對(duì)犬犬糞便中中的CPPV進(jìn)行行了檢測(cè)測(cè)比較，結(jié)結(jié)果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)Dass-ELLISAA的特異性和敏感感性都比比HA的的高，此此后，他他們又用用Dass-ELLISAA對(duì)犬糞糞便樣品品中CPPV、犬犬冠狀病病毒和輪輪狀病毒抗原原進(jìn)行了了檢測(cè)。1.6555 斑點(diǎn)EElISSA(DDot-ELIISA)：國(guó)內(nèi)有學(xué)

28、者者應(yīng)用DDot-ELIISA對(duì)對(duì)CPvv進(jìn)行了了快速檢檢測(cè)，并并發(fā)現(xiàn)DDotELIISA的的敏感性性比常規(guī)規(guī)ELISAA的高很很多。BBanjja-BBK等15用Dot-ELIISA檢檢測(cè)了1171只只犬的糞糞便樣品品，結(jié)果果發(fā)現(xiàn)ccPv和和犬冠狀病毒的陽(yáng)陽(yáng)性檢出出率分別別是2998和64，同同時(shí)他們們發(fā)現(xiàn)CCPV病病的發(fā)病病率隨犬犬年齡的的增大而逐漸降低低。1.6556 復(fù)合物物捕獲阻阻斷EllJSAA(Cttb-EELISSA)：此法可檢測(cè)測(cè)病毒抗抗原，RRimmmelzzwaaan GGF等16分別用CttbElJJSA和和間接EELISSA檢測(cè)測(cè)了犬血血清中CPVV、犬冠冠狀病毒毒和

29、輪狀狀病毒的的抗體。16.66 乳膠膠凝集試試驗(yàn)(LLAT):LAT可用用于檢測(cè)測(cè)CPVV抗原和和抗體，它它是一種種可在玻玻片上進(jìn)進(jìn)行的試試驗(yàn)方法法，操作作簡(jiǎn)便，結(jié)結(jié)果容易判定，特特別適用用于現(xiàn)場(chǎng)場(chǎng)檢測(cè)之之用，用用它可檢檢測(cè)到44ngml的的CPVV抗原。SSubhhashhinii-CRR等17分別用LAAT和PPCR法法檢測(cè)了了5566份CPPV患犬犬糞便樣樣品，結(jié)結(jié)果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)，就樣樣品的陽(yáng)陽(yáng)性檢出出率而言言，PCR比LL 更敏敏感。國(guó)國(guó)外另有有學(xué)者分分別用LLAT、HHA、EEIJSSA對(duì)犬犬、貓及及其他毛毛皮獸糞糞便樣品品- 88-進(jìn)行了檢測(cè)測(cè)，結(jié)果果發(fā)現(xiàn)，EELISSA的敏敏感性最最高

30、，HHA和LLAT的的敏感性性分別是是96和9ll ；LAT、HHAEIJJSA三三者的特特異性分分別是992 、955、993 。1.6.77 熒光光抗體試試驗(yàn):此法用于檢檢測(cè)病犬犬腸切片片、心肌肌切片以以及細(xì)胞胞培養(yǎng)物物中CPPV，具具有與EELISSA相同同的敏感感性，但被檢病料料的來(lái)源源有一定定的局限限性，用用于死后后檢測(cè)。 Ryypull K等等18分別用間接接熒光抗抗體試驗(yàn)(IFAA)、LLAT和和PCRR方法檢檢測(cè)了ll8份CCPV患患犬的病病料樣品品，并對(duì)對(duì)檢出的的CPVV野型毒毒株上的的VPIIVP2基基因片段段進(jìn)行了了序列分分析，結(jié)結(jié)果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)，此毒毒株的系系統(tǒng)發(fā)生生具有高高

31、度的相相似性。1.6.88 病毒毒分離鑒鑒定將病毒處理理后接種種犬腎原原代細(xì)胞胞或貓、犬犬腎傳代代細(xì)胞系系培養(yǎng)，分分離病毒毒，觀察察細(xì)胞病病變及核內(nèi)包涵涵體，以以便確診診。Maartiinelllo F等19分別用EIIlSAA、HAA和病毒毒分離技技術(shù)對(duì)1115份份狼糞樣品便進(jìn)行行了檢測(cè)測(cè)，其中中在4份份樣品中中檢測(cè)到到了CPPV，并并經(jīng)電鏡鏡檢查得得到了證證實(shí)，這這是第一一次確切切的觀察察到了歐歐洲狼體體內(nèi)的CCPV。1.6.99 PCCR診斷斷技術(shù)PCR技術(shù)術(shù)發(fā)明以以來(lái)，因因?yàn)槠淇炜焖倜舾懈械奶匦孕远妒苁芮嗖A，119933年Haarassawaa R20等人將將PCRR用于CCPV的的

32、基因組組檢測(cè).Mocchizzukii M21用PCCR.病病毒分離離與HAA/HII等方法法檢測(cè)糞糞便中CCPV并并比較結(jié)結(jié)果，表表明PCCR方法法與用MMDCKK細(xì)胞分分離病毒毒的敏感感性相同同，比用用CRFFK細(xì)胞胞分離和和HA試試驗(yàn)敏感感。隨后后人們?yōu)闉榱颂岣吒逷CRR反應(yīng)的的敏感性性或特異異性，建建立了套套式PCCR、降降落PCCR等改改良的PPCR方方法222，223。人人們?cè)趯CRR方法用用于檢測(cè)測(cè)糞便樣樣品中病病原時(shí)發(fā)發(fā)現(xiàn)糞便便中存在在的抑制制物質(zhì)使使PCRR出現(xiàn)假假陰性結(jié)結(jié)果，為為了滅活活或除去去這些物物質(zhì)，可可以采用用直接稀稀釋法、改改換不同同的耐熱熱DNAA聚合酶酶、

33、離子子交換層層析法和和免疫磁磁珠吸附附法等21，224，225，226PPCR技技術(shù)是美美國(guó)PEE-Ceetuss公司人人類(lèi)遺傳傳研究室室Mullliss277，288于119855年發(fā)明明的一種種DNAA體外擴(kuò)擴(kuò)增技術(shù)術(shù)，此技技術(shù)可以以在兒個(gè)個(gè)小時(shí)內(nèi)內(nèi)將極微微量的目目的基因因DNAA成百萬(wàn)萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)擴(kuò)增放大大，并能能夠特異異性地?cái)U(kuò)擴(kuò)增任何何所需要要的目的的基因DDNA片片段。PPCR技技術(shù)開(kāi)始始時(shí)是手手工操作作，在不不同溫度度的水浴浴中往復(fù)復(fù)進(jìn)行，119877年逐漸漸制成了了自動(dòng)操操作的裝裝置，現(xiàn)現(xiàn)在已發(fā)發(fā)展了適適合多種種不同用用途的儀儀器.119888年Saaikii發(fā)現(xiàn)耐耐熱DNNA聚合合

34、酶229，PPCR技技術(shù)逐步步進(jìn)入應(yīng)應(yīng)用階段段。我國(guó)國(guó)的毛裕裕民也于于19888年開(kāi)開(kāi)始耐熱熱DNAA酶的研研究，同同時(shí)我國(guó)國(guó)多個(gè)實(shí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)進(jìn)入應(yīng)用用研究30。PCCR技術(shù)術(shù)首先應(yīng)應(yīng)用于人人p一珠珠蛋白DDNA的的擴(kuò)增及及鐮刀狀狀紅細(xì)胞胞貧血病病的產(chǎn)前前診斷31。PCCR商品品試劑盒盒的出現(xiàn)現(xiàn)使PCCR進(jìn)一一步自動(dòng)動(dòng)化，因因此應(yīng)用用更廣泛泛，但是是準(zhǔn)備樣樣品也是是一個(gè)耗耗費(fèi)人力力的過(guò)程程，Juungkkindd322介紹紹了一種種樣品處處理的試試劑盒CCOBAAS AAmplliPrrep，試試劑盒能能使核酸酸自動(dòng)釋釋放，用用特異的的探針捕捕獲靶序序列，核核酸探針針是通過(guò)過(guò)生物素素一抗生生蛋白

35、鏈鏈據(jù)臨床床觀察，對(duì)對(duì)于嘔吐吐的治療療，確診診為細(xì)小小病毒腸腸炎早期期的，不不應(yīng)盲目目止吐，而而應(yīng)在其其生理?xiàng)l條件可以以承受的的范圍內(nèi)內(nèi)任其嘔嘔吐，因因?yàn)閲I吐吐是犬排排毒的一一種正常常反應(yīng)。若若嘔吐頻頻繁并且且較嚴(yán)重重時(shí)，臨臨床上用用于止吐吐的藥物物有胃復(fù)復(fù)安，嗎嗎叮啉，愛(ài)愛(ài)茂爾，維維生素 B6，氯氯丙嗪和和阿托品品等。臨臨床實(shí)踐踐得知，對(duì)對(duì)胃腸呈呈空虛狀狀態(tài)的犬犬嘔吐，尤尤其是伴伴有出血血性腸炎炎病征的的嘔吐，臨臨床上宜宜選用促促使胃腸腸活動(dòng)靜靜止下來(lái)來(lái)的止吐吐藥，如如愛(ài)茂爾爾，氯丙丙嗪或阿阿托品。這這些藥的的單獨(dú)應(yīng)應(yīng)用或?qū)?duì)頑固性性嘔吐的的聯(lián)合應(yīng)應(yīng)用，一一般均可可獲得可可靠的止止吐效果果。

36、若選選用胃復(fù)復(fù)安或嗎嗎叮啉等等胃動(dòng)力力性止吐吐藥，不不僅止吐吐效果不不確實(shí)，而而且其促促進(jìn)胃腸腸正向蠕蠕動(dòng)的藥藥理效應(yīng)應(yīng)往往致致腸道出出血加重重。維生生素 BB6 在在人醫(yī)用用于放射射病和抗抗癌藥引引起的嘔嘔吐或妊妊娠嘔吐吐的輔助助治療。其其止吐作作用認(rèn)為為是維生生素B66能夠促促進(jìn)氨基基酸代謝謝，而氨氨基酸可可刺激延延腦催吐吐化學(xué)感感受區(qū)引引起嘔吐吐，故可可用于此此病的止止吐。與與其它適適宜的止止吐藥配配合使用用，效果果更佳。腹腹瀉：腹腹瀉多在在嘔吐 122 天后后發(fā)生。早早期表現(xiàn)現(xiàn)糞稀軟軟，不久久轉(zhuǎn)變?yōu)闉橄∷⒉У鄯奂t色。約約在腹瀉瀉出現(xiàn) 23 天天后，即即發(fā)展為為西紅柿柿汁樣的的暗

37、紅色色的腥臭臭血便，并并經(jīng)常在在臨床檢檢查肛門(mén)門(mén)插入體體溫計(jì)后后立即出出現(xiàn)。對(duì)對(duì)于腹瀉瀉的治療療應(yīng)著重重消除腸腸道炎癥癥，減輕輕腸蠕動(dòng)動(dòng)防止脫脫水。在在消除胃胃腸炎方方面除應(yīng)應(yīng)用抗犬犬細(xì)小病病毒血清清外，一一般臨床床上應(yīng)用用氨芐青青霉素，慶慶大霉素素或卡那那霉素，配配合應(yīng)用用維生素素 C，以以及早期期應(yīng)用適適量的糖糖皮質(zhì)激激素，即即可獲得得滿(mǎn)意的的療效。臨臨床用于于腹瀉的的抗生素素有氨基基糖苷類(lèi)類(lèi)，氯霉霉素類(lèi)，四四環(huán)素類(lèi)類(lèi)和喹諾諾酮類(lèi)，對(duì)對(duì)革蘭氏氏陰性桿桿菌具有有抑制或或殺滅作作用，故故在治療療單純性性腹瀉是是可選用用的。但但當(dāng)腹瀉瀉發(fā)展為為出血性性時(shí)，則則不宜選選用，因因?yàn)槟芤鸺t細(xì)細(xì)胞生

38、成成受阻和和血小板板減少，加加速便血血癥狀而而不利于于止血。當(dāng)當(dāng)腹瀉伴伴有頻繁繁嘔吐癥癥狀時(shí)，不不應(yīng)選用用對(duì)胃腸腸粘膜具具有較強(qiáng)強(qiáng)刺激的的，易引引起空腹腹病犬惡惡心、嘔嘔吐反應(yīng)應(yīng)的土霉霉素和四四環(huán)素，否否則將會(huì)會(huì)減弱止止吐藥和和止瀉藥藥的療效效，促使使病狀?lèi)簮夯?。喹喹諾酮類(lèi)類(lèi)藥雖療療效顯著著，但因因口服給給藥會(huì)誘誘發(fā)嘔吐吐，則不不宜選用用。所以以，對(duì)腹腹瀉癥狀狀的治療療應(yīng)選用用氨基糖糖苷類(lèi)抗抗生素，如如慶大霉霉素，卡卡那霉素素或小諾諾霉素等等。給藥藥方法以以肌肉注注射或靜靜脈注射射較合理理。臨床床證明，即即使對(duì)于于嚴(yán)重的的腸道感感染，在在應(yīng)用氨氨基苷類(lèi)類(lèi)抗生素素的同時(shí)時(shí)，聯(lián)合合應(yīng)用廣廣譜半合合

39、成青霉霉素及短短期應(yīng)用用糖皮質(zhì)質(zhì)激素如如地塞米米松，可可獲得良良好療效效。適時(shí)時(shí)應(yīng)用減減緩腸蠕蠕動(dòng)的藥藥物如阿阿托晶(一般用用藥 112 次)，腹腹瀉癥狀狀即可得得到有效效控制。便便血：血血便表現(xiàn)現(xiàn)為糞便便呈較典典型西紅紅柿汁樣樣、有特特殊腥臭臭味，往往往伴有有體溫突突然升高高，精神神萎頓和和心跳呼呼吸加快快等癥狀狀，表現(xiàn)現(xiàn)為病情情比較嚴(yán)嚴(yán)重。 治療上上，采取取治療腹腹瀉和止止血的方方法。病病初宜較較大劑量量應(yīng)用止止血敏或或安絡(luò)血血，以加加強(qiáng)血管管壁的正正常結(jié)構(gòu)構(gòu)，加速速血凝過(guò)過(guò)程。隨隨著病程程發(fā)展和和治療中中抗生素素的持續(xù)續(xù)應(yīng)用，由由于腸道道壁受抑抑制，內(nèi)內(nèi)源性維維生素 K 合合成減少少或菌

40、素素結(jié)合在在磁珠上上的，靶靶序列一一旦被磁磁珠捕獲獲，即得得到提純純。這一一過(guò)程使使常規(guī)的的樣品準(zhǔn)準(zhǔn)備時(shí)間減少了，現(xiàn)現(xiàn)在PCCR技術(shù)術(shù)甚至己己經(jīng)發(fā)展展到使用用機(jī)器人人操作的的水平。PPCR技技術(shù)的改改良與發(fā)發(fā)展必將將極大地地推動(dòng)跨跨世紀(jì)的的人類(lèi)基基因組計(jì)計(jì)劃研究究的順利利進(jìn)行和和提前完完成。根根據(jù)應(yīng)用用目的不不同出現(xiàn)現(xiàn)了許多多改良的的PCRR技術(shù)，它它們包括括:聯(lián)合合PCRR.套式式PCRR、免疫疫PCRR、原位位PCRR、定量量PCRR等。聯(lián)聯(lián)合PCCR (mullti-PCRR,mPPCR)是在一一個(gè)反應(yīng)應(yīng)體系中中加入多多對(duì)引物物對(duì)多個(gè)個(gè)目的基基因同時(shí)時(shí)進(jìn)行擴(kuò)擴(kuò)增的試試驗(yàn)方法法。聯(lián)合合PC

41、RR能夠捕捕獲更多多基因信信息，使使應(yīng)用范范圍更加加廣泛，分分析的基基因更加加復(fù)雜33；套式式PCRR (nnestted PCRR)是用用第一套套引物擴(kuò)擴(kuò)增155-300個(gè)循環(huán)環(huán)，再用用第一次次擴(kuò)增DDNA片片段內(nèi)設(shè)設(shè)定的第第二套引引物擴(kuò)增增15-30個(gè)個(gè)循環(huán)。此此方法比比常規(guī)PPCR方方法吏為為特異。套套式PCCR可用用于更微微量DNNA的檢檢測(cè)。特特別適應(yīng)應(yīng)于環(huán)境境樣品中中微生物物檢測(cè)和和單拷貝貝基因的的擴(kuò)增34；免疫疫PCRR(immmunno-PPCR)是將抗抗原抗體體反應(yīng)與與PCRR技術(shù)結(jié)結(jié)合起來(lái)來(lái)以檢測(cè)測(cè)微量抗抗原的技技術(shù)，比比ELIISA敏敏感1005倍，因因此免疫疫PCRR具

42、有非非常廣泛泛的應(yīng)用用前景35；原位位PCRR(inn siitu-PCRR)自119900年Haaasee366等人人建立以以來(lái)發(fā)展展得很快快速，它它將PCCR技術(shù)術(shù)和原位位雜交技技術(shù)結(jié)合合起來(lái)，既既可以檢檢測(cè)出低低拷貝的的DNAA或RNNA，又又可特異異地確定定其細(xì)胞胞來(lái)源和和細(xì)胞內(nèi)內(nèi)定位；定量PPCR:由于PPCR擴(kuò)擴(kuò)增在某某一特定定時(shí)期的的產(chǎn)物呈呈指數(shù)增增長(zhǎng)，那那么最終終PCRR產(chǎn)物與與模板量量直接相相關(guān)。人人們利用用這一特特點(diǎn)進(jìn)行行模板定定量。此此技術(shù)的的出現(xiàn)使使極少量量的RNNA定量量成為可可能，為為基因表表達(dá)的調(diào)調(diào)控研究究提供了了很好的的數(shù)據(jù)，也也使一些些與基因因數(shù)量有有關(guān)的疾疾

43、病被人人們所認(rèn)認(rèn)識(shí)337。這這些改進(jìn)進(jìn)的PCCR技術(shù)術(shù)，大大大提高了了實(shí)際應(yīng)應(yīng)用能力力，促進(jìn)進(jìn)了分子子生物學(xué)學(xué)技術(shù)的的進(jìn)一步步發(fā)展。由由于CPPV22、CPPV22a和CCPV2b三三種抗原原型之間間的差異異主要存存在于基基因組33087744451之之間8個(gè)個(gè)點(diǎn)突變變，本文文所設(shè)計(jì)計(jì)的引物物位于22023324470保保守區(qū)，為為CPVV2、CCPV2a和和CPVV2bb三種抗抗原型的的通用引引物。該該引物從從犬五聯(lián)聯(lián)疫苗中中只擴(kuò)增增出CPPV特異異性基因因片斷，沒(méi)沒(méi)有擴(kuò)增增出犬瘟瘟熱病毒毒，犬腺腺病毒型，犬犬副流感感病毒的的基因片片斷，說(shuō)說(shuō)明該引引物的特特異性較較強(qiáng)。將將糞便上上清液稀稀釋

44、10000倍倍以后仍仍然能擴(kuò)擴(kuò)增出CCPV特特異性基基因片段段，說(shuō)明明該方法法具有較較高的敏敏感性。在在對(duì)臨床床病料檢檢測(cè)時(shí)以以糞便上上清液作作為模板板，只需需一步煮煮沸過(guò)程程，省去去了普通通PCRR反應(yīng)時(shí)時(shí)DNAA提取的的繁瑣步步驟，不不僅節(jié)約約了試劑劑，降低低了檢測(cè)測(cè)成本，而而且節(jié)省省大量的的時(shí)間，從從而使整整個(gè)檢測(cè)測(cè)在25h以以?xún)?nèi)完成成，達(dá)到到快速檢檢測(cè)的目目的。1.7 治治療方面面現(xiàn)有的治療療細(xì)小病病毒的方方法主要要為對(duì)癥癥治療、特特異性療療法及支支持療法法。1.7.11 對(duì)癥癥治療嘔吐：嘔吐吐是此病病的主要要癥狀，嘔嘔吐物可可能是食食物或無(wú)無(wú)色粘液液或混有有少量粘粘液的清清水。- 1

45、11-停止，且因因消化道道出血又又極易造造成血漿漿中諸多多凝血因因子的丟丟失，故故止血治治療中及及時(shí)運(yùn)用用維生素 K 促促進(jìn)血漿漿凝血因因子的合合成，尤尤為必要要。對(duì)出出血癥狀狀持續(xù)較較久的犬犬，配合合應(yīng)用氨氨甲苯酸酸或止血環(huán)酸酸等纖維維蛋白溶溶解藥，會(huì)會(huì)協(xié)同上上述止血血藥的藥藥效，加加速凝血血過(guò)程，達(dá)達(dá)到止血血目的。在治療中，必必須適量量補(bǔ)充葡葡萄糖酸酸鈣和維維生素 C，對(duì)對(duì)于降低低消化道道粘膜毛毛細(xì)血管管的通透透性，提高止血藥藥的療效效，促進(jìn)進(jìn)消化道道粘膜損損傷的愈愈合，具具有十分分重要的的作用。脫脫水：脫脫水是嘔嘔吐、腹腹瀉及便便血發(fā)展展的必然然結(jié)果，也也是病犬犬死亡的的主要原原因。其其

46、癥狀主主要表現(xiàn)現(xiàn)為眼窩窩凹陷、鼻鼻鏡干燥燥、皮膚膚彈性減減弱、全全身衰弱弱等，多多數(shù)病犬犬渴感明明顯。治治療上，最最有效的的方法是是靜脈輸輸液，盡盡快補(bǔ)充充丟失的的水與電電解質(zhì)。臨臨床上常常用的體體液補(bǔ)充充劑有葡葡萄糖、左左旋糖酐酐、生理理鹽水或或復(fù)方鹽鹽水、氯氯化鉀和和 NaaHC003等，治治療時(shí)應(yīng)應(yīng)注意糖糖鹽的輸輸入比例例，如病病犬渴感感明顯，可可將 55110葡葡萄糖和和復(fù)方鹽鹽水按 2：11 比例例靜脈輸輸入，輸輸液量一一般控制制在 5501100mmlkkg。注注意，靜靜輸?shù)钠掀咸烟菨鉂舛炔荒苣苓^(guò)高，否否則體液液會(huì)向血血中轉(zhuǎn)移移，造成成水分自自腎排出出，加重重脫水。經(jīng)經(jīng)兩次輸輸液，

47、若若脫水癥癥狀仍未未得到糾糾正，且且病犬無(wú)無(wú)飲欲，此此時(shí)應(yīng)選選用100的 NaCCl 溶溶液以增增加有限限輸液量量中 NNaCll 的絕絕對(duì)含量量，可提提高細(xì)胞胞外液的的晶體滲滲透壓，擴(kuò)擴(kuò)充并維維持有效效循環(huán)血血量。此此時(shí)，病病犬脫水水狀態(tài)多多可得到到改善。同同時(shí)應(yīng)注注意病犬犬鉀的補(bǔ)補(bǔ)充，由由于病犬犬嘔吐腹腹瀉，可可導(dǎo)致犬犬體內(nèi)鉀鉀的丟失失，而病病犬通常常食欲廢廢絕，鉀鉀的攝入入量也下下降。在在一次大大量補(bǔ)充充無(wú)鉀液液體時(shí)，則則易很快快促進(jìn)低低血鉀癥癥的發(fā)生生。具體體應(yīng)用時(shí)時(shí)，在每每 5000mll 輸入入液中最最多加入入 100KCCl 溶溶液 110mll，不會(huì)會(huì)引起不不良反應(yīng)應(yīng)。在糾糾正

48、脫水水狀態(tài)的的同時(shí)，應(yīng)應(yīng)注意是是否補(bǔ)充充 NaaHC003。如如病犬持持續(xù)腹瀉瀉，可造造成大量量堿性消消化液的的丟失。機(jī)機(jī)體丟失失 NaaHC003過(guò)多多，易引引起代謝謝性酸中中毒。如如頻繁嘔嘔吐則造造成胃酸酸的大量量丟失，引引起代謝謝性堿中中毒。此此外，低低血鉀也也可促進(jìn)進(jìn)堿中毒毒的發(fā)生生，故對(duì)對(duì)犬細(xì)小小病毒性性腸炎的的治療是是否需用用 NaaHC003，應(yīng)應(yīng)對(duì)具體體病例而而定。最最好根據(jù)據(jù)犬嘔吐吐和腹瀉瀉分別發(fā)發(fā)生的時(shí)時(shí)候，次次數(shù)及嘔嘔吐物和和大便的的數(shù)量作作出估計(jì)計(jì)。實(shí)踐踐證明，對(duì)對(duì)患犬細(xì)細(xì)小病毒毒性腸炎炎的大多多數(shù)病例例，在采采用上述述各種用用藥方法法后便可可好轉(zhuǎn)，之之后，輸輸液中加加

49、入適當(dāng)當(dāng)劑量的的 NaaHC003，對(duì)對(duì)促進(jìn)病病犬完全全好轉(zhuǎn)和和食欲恢恢復(fù)具有有非常有有益的作作用。在在輸液過(guò)過(guò)程中，一一定要掌掌握好速速度，輸輸液速度度與本病病的康復(fù)復(fù)有一定定的關(guān)系系。一般般 3 月齡以以?xún)?nèi)的犬犬 500700 滴分為宜宜，46 月月齡病犬犬以600900 滴分為宜宜，6 月齡以以上的病病犬以1100 滴分分左右為為宜，對(duì)對(duì)于體質(zhì)質(zhì)虛弱的的病犬，輸輸液速度度尤應(yīng)注注意，切切忌過(guò)快快。其它它對(duì)癥治治療： 如嘔吐吐可用胃胃復(fù)安注注射液 055mgkg，肌肌肉注射射，每日日 3 次，嘔嘔吐嚴(yán)重重者可加加大用量量為了補(bǔ)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)，適當(dāng)當(dāng)增加葡葡萄糖的的用量，每每日 55g/kkg。

50、必必要時(shí)可可靜脈注注射復(fù)方方氨基酸酸注射液液 200ml/kg，適適當(dāng)增加加一些能能量合劑劑，以促促進(jìn)能量量的轉(zhuǎn)換換及利用用，以及及促進(jìn)蛋蛋白質(zhì)的的合成。1.7.22 特異異性療法法對(duì)于病毒性性疾病，最最根本的的是使用用特異性性抗體進(jìn)進(jìn)行治療療，臨床床觀察表表明，CCPV 單克隆隆抗體，特特異性好好，抗體體含量高高，針對(duì)對(duì)性強(qiáng)。臨臨床應(yīng)用用效果顯顯著，試試驗(yàn)證明明，在足足量注射射犬細(xì)小小病毒單單克隆抗抗體 88 小時(shí)時(shí)后，收收集糞便便電鏡下下觀察，僅僅見(jiàn)有連連片的病病毒顆粒粒。而五五聯(lián)血清清就其含含有的 CPVV 效價(jià)價(jià)而言，要要比單克克隆 CCPV 抗體低低 12 個(gè)個(gè)稀釋度度，因此此效果稍

51、稍差，如如病犬有有其它病病毒（如如 CDDV）混混合感染染時(shí)，使使用五聯(lián)聯(lián)血清則則起到了了抗多種種病毒的的效果。臨臨床上抗抗體的作作用強(qiáng)調(diào)調(diào)用藥時(shí)時(shí)機(jī)，CCPV 感染的的早期，使使用抗體體治療，效效果尤為為顯著。因因?yàn)榭贵w體主要作作用是產(chǎn)產(chǎn)生體液液免疫，不不能跟蹤蹤病毒進(jìn)進(jìn)入細(xì)胞胞內(nèi)將其其結(jié)合，所所以臨床床上主張張?jiān)缙趹?yīng)應(yīng)用。而而且隨著著治療天天數(shù)的增增加，在在單抗或或五聯(lián)血血清使用用一個(gè)療療程后，應(yīng)應(yīng)配合應(yīng)應(yīng)用干擾擾素，胸胸腺肽等等細(xì)胞免免疫促進(jìn)進(jìn)劑，效效果應(yīng)更更為理想想。1.7.33 支持持療法清理胃腸道道：患犬犬細(xì)小病病毒病的的犬，清清理胃腸腸道尤其其重要，因因腸道脫脫落物是是細(xì)菌繁繁殖

52、最佳場(chǎng)所，不不及時(shí)清清理，吸吸收入血血，發(fā)生生脫水性性和中毒毒性休克克。方法法是用 1：550000 洗必必太溶液液進(jìn)行灌灌腸，用用量視犬犬體大小小而定。一一般在 20、330mllk99。提起起后驅(qū)，將將(人)用導(dǎo)尿尿管(也也可用輸液管管代替)緩緩送送入直腸腸，最后后通過(guò)直直腸狹窄窄部，灌灌致病犬犬從口中中嘔出為為佳，每每次灌完使犬排泄泄，直至至再?zèng)]糞糞便，血血污或腸腸粘膜排排出，若若不能從從口中嘔嘔出時(shí)，可可將灌腸腸液從口口中服 30，550mll(小大大酌減)。若無(wú)無(wú)洗必太太亦可用用 09的的生理鹽鹽水灌洗洗(需稍稍加溫)。輸液液： 輸輸液對(duì)于于治療本本病至關(guān)關(guān)重要，嚴(yán)嚴(yán)重的腹腹瀉，便便

53、血及嘔嘔吐很快快導(dǎo)致病病犬脫水水，酸中中毒乃至至休克。輸輸液量可可根據(jù)脫脫水的程程度來(lái)確確定，輕輕度脫水水為 550mllkgg，中度度脫水 70mmlkkg，重重度脫水水互 000mllkgg，臨床床可根據(jù)據(jù)病犬心心臟情況況，以上上三種程程度脫水水酌加或或酌減 1020mmlkkg。液液體以等等滲為佳佳。處方方：平衡衡液 005葡萄糖糖氯化鈉鈉溶液或或用 009氯化鈉鈉溶液及及5葡葡萄糖溶溶液各占占50，并加加入其它它藥品，如如維生素素C5001000mggkgg，維生生素B11 5001000mllkgg，以及及其它輔輔助藥品品緩慢靜靜脈輸入入，每日日 2 次?？箍咕籽祝簽榱肆朔乐挂蛞?/p>

54、機(jī)體抗抗病力降降低，引引起的繼繼發(fā)性感感染，在在清理腸腸道后，可可用吡哌哌酸(氟氟哌酸 10mmgkk9，每每日 33 次，77d 為為一療程程；或用用慶大霉霉素 550000UkkS 內(nèi)內(nèi)服，每每日 22次，225dd 為一一療程：在靜脈脈輸液時(shí)時(shí)再加入入氨芐青青霉素 4 萬(wàn)萬(wàn)單位kg，每每日 22 次。或或小諾霉霉素 334mmgkkg，維維生素 C01mggkgg,地塞塞米松 10mmgkkg。同同時(shí)，還還可以肌肌注 550普普殺平001mmlkkg,或或 200氟哌哌酸 002044mlkg。止血：在清清理胃腸腸道的基基礎(chǔ)上，可可內(nèi)服云云南白藥藥 01gkg，每每日 22u33 次，連

55、連續(xù)應(yīng)用用-35d。也也可選用用止血敏敏 0522mi，肌肌肉或靜靜脈注射射，每日日 2 次?；蚧蚣∽舶步j(luò)血 1020mmg?？箍剐菘耍?病犬犬嚴(yán)重脫脫水時(shí)，四四肢及各各末端發(fā)發(fā)涼，齒齒齦微血血管再充充盈時(shí)間間延長(zhǎng)時(shí)時(shí)，即意意味著休休克，此此時(shí)補(bǔ)充充血溶量量和應(yīng)用用抗體休休克藥物物為當(dāng)務(wù)務(wù)之急?？煽蛇x用去去甲腎上上腺素 055mg，或或復(fù)壓敏敏 5mmg，或或地塞米米松 335mmgkkg，靜靜脈或肌肌肉注射射。當(dāng)脫脫水得到到糾正，血血溶量補(bǔ)補(bǔ)足以后后，可選選用擴(kuò)血血管藥以以改善微微循環(huán)。如如 65542，肌肌肉或靜靜脈注射射 1mmgkkg，若若不見(jiàn)好好轉(zhuǎn)，330miin 后后再重復(fù)復(fù)注射

56、一一次。抗酸中毒： 患犬犬精神沉沉郁，口口流粘液液或發(fā)生生休克時(shí)時(shí)，容易易導(dǎo)致酸酸中毒。一一般應(yīng)用用 5碳酸氫氫鈉注射射液 88100ml/kg 靜脈輸輸入，每每日 112 次，以以調(diào)節(jié)酸酸堿平衡衡，預(yù)防防酸中毒毒。在糾糾正酸中中毒的基基礎(chǔ)上給給予適當(dāng)當(dāng)?shù)亩喟桶桶罚瑢?duì)對(duì)增強(qiáng)心心肌收縮縮力，增增強(qiáng)心臟臟排血量量，升高高血壓，增增加腎小小球的濾濾過(guò)率，對(duì)對(duì)改善微微循環(huán)，抗抗休克均均有重要要意義。護(hù)肝：為保保護(hù)肝臟臟和預(yù)防防心肌炎炎，可在在糖鹽水水中加入入 ATTP200mg,輔酶 A10002200mmg,或或肌苷 20006000mgg 靜注注。輸血： 以以病初、中中期為輸輸血最佳佳時(shí)機(jī)。但但臨

57、診多多見(jiàn)已是是中期或或中后期期了，病病犬表現(xiàn)現(xiàn)精神不不振，喜喜臥，體體溫升高高或處常常溫，食食欲廢絕絕，嘔吐吐，糞便便稀軟帶帶多量粘粘液和血血(黑紅紅色)，病病情較重重時(shí)，排排糞如水水注，早早蕃茄汁汁樣，腥腥臭難聞聞，心跳跳加快，呼呼吸困難難，此時(shí)時(shí)采用輸輸血療法法配合大大量補(bǔ)液液、抗菌菌，止血血治療也也可收到到滿(mǎn)意效效果。當(dāng)當(dāng)患犬體體溫下降降至 336 攝攝氏度以以下，機(jī)機(jī)體高度度衰竭，體體表靜脈脈塌陷，甚甚至無(wú)法法進(jìn)針，輸輸血也難難以逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)病程。(1)供供血犬的的選擇兩兩病都要要相應(yīng)的的康復(fù)犬犬做供血血犬，犬犬細(xì)小病病毒病亦亦可用患患犬的母母犬供血血。前者者供血犬犬的血與與受血犬犬的血必必

58、須相合合(相合合血)，即即供、受受血犬一一方的血血清 11 滴在在玻片上上與另一一方全血血 1 滴攪拌拌后不產(chǎn)產(chǎn)生血凝凝塊。后后者因有有血緣關(guān)關(guān)系，可可不用做做相合血血試驗(yàn)。(2)采采血方法法 采血血用消毒毒注射器器先吸取取抗凝劑劑(4枸櫞酸酸鈉)11ml,然后從從供血犬犬靜脈采采血 99ml,1 次次采不夠夠可重復(fù)復(fù)多次采采。采得得的抗凝凝血立即即注入盛盛有 55葡萄萄糖鹽水水(約 10002000mll)瓶?jī)?nèi)內(nèi)，輕輕輕搖勻并并加入 122ml(5110mgg)地塞塞米松，以以防發(fā)生生過(guò)敏，即即可供輸輸血。一一般是現(xiàn)現(xiàn)用現(xiàn)采采血，也也可冰箱箱 48 攝攝氏度存存放 224h,不會(huì)喪喪失其理理

59、化及生生物學(xué)特特性，仍仍可使用用。(33)輸血血量和方方法：一一般每 kg 體重輸輸血 22ml,輸血量量宜多不不宜少，11 次即即可，嚴(yán)嚴(yán)重病例例可重輸輸 1 次。本實(shí)驗(yàn)的目目的在于于對(duì)臨床床所見(jiàn) CPVV 進(jìn)行行正確診診斷并提提出合理理、有效效的治療療措施2 材料與與方法21 調(diào)調(diào)查資料料2007 年 88 月至至 20008 年 11 月，在在寵物醫(yī)醫(yī)院實(shí)習(xí)習(xí)階段，正正值秋季季犬細(xì)小小病毒病病高發(fā)時(shí)時(shí)期，參與診治了了 1006 條條疑似腹腹瀉與嘔嘔吐病犬犬，其中中 600 條疑疑似為犬犬細(xì)小病病毒病，為為實(shí)驗(yàn)提提供了依依據(jù)。22 實(shí)實(shí)驗(yàn)材料料2211 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動(dòng)物2211 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)習(xí)期

60、間診診治的 60 例嘔吐吐和腹瀉瀉的疑似似為犬細(xì)細(xì)小病毒毒病的病病犬2222 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)儀器 韓國(guó) SD CPVV 酶標(biāo)標(biāo)試紙條條STANDDARDD DIIAGNNOSTTICSS，INNC ， CATTNOO：880FKK20101，EEXP：200051204組成：1 試紙條條+1 微量塑塑料滴管管，真空空包裝*202. 2. 2. 2 聚合酶酶鏈?zhǔn)椒捶磻?yīng)PCCR(1) SSepaaGenne核酸酸提取試試劑盒(購(gòu)自三三光純藥藥株式會(huì)會(huì)社)Taq DDNA聚聚合酶、MMgC112、ddNTPP、100緩沖液液(均購(gòu)購(gòu)自南京京天為生生物科技技有限公公司)。(2)引物物設(shè)計(jì)根據(jù)G