1、蟬花中 類免疫活性組分含量測(cè)定的研究楊明靜王伯初余佳文毛先兵朱華李【摘要】目的創(chuàng)立快速、高效測(cè)定蟬花類免疫活性組分含量的要領(lǐng)。要領(lǐng)接納茚三酮比色法測(cè)定類次生代謝產(chǎn)物的含量，通過(guò)線性度和線性范疇、細(xì)密度、不變性及正確度等指標(biāo)評(píng)價(jià)該要領(lǐng)。效果該要領(lǐng)檢測(cè)線性范疇為，相干系數(shù)為，均勻接納率為，RSD為。結(jié)論茚三酮比色法輕便快捷、效果不變、敏捷度高，可作為測(cè)定蟬花類免疫活性組分的有用要領(lǐng)。【關(guān)鍵詞】蟬花比色法Abstrat：bjetivefrdeterinatinfiadaeethds，Resultslinear，RSDnlusin，.ItanbeusedfrtheftheiadaeKeyrds：rdy

2、epsiadae；蟬花是我國(guó)傳統(tǒng)的一種珍貴中藥，與冬蟲(chóng)夏草一樣同屬蟲(chóng)菌復(fù)合體，且含有相近的化學(xué)身分，醫(yī)家常將其用作冬蟲(chóng)夏草的代用品。醫(yī)學(xué)研究表白，它具有明顯的免疫調(diào)治、抗疲憊和改進(jìn)腎成效的作用。而有關(guān)蟬花藥理物質(zhì)底子的報(bào)道仍舊較少。等通過(guò)細(xì)胞模子從蟬花造就濾液中挑選得到的免疫活性身分，具有明顯的雙向免疫調(diào)治作用，免疫按捺力比環(huán)孢菌素更強(qiáng)且副作用小，。由于蟬花類次生代謝產(chǎn)物含量較低，難以檢測(cè)，如今尚未見(jiàn)定量測(cè)定其含量的報(bào)道?；陬愇镔|(zhì)為長(zhǎng)脂鏈氨基酸，與茚三酮共熱時(shí)天生藍(lán)紫色的酮茚胺，在必然范疇內(nèi)吸光度和氨基酸含量成正比，本研究接納茚三酮比色法定量測(cè)定蟬花類物質(zhì)的含量，創(chuàng)立起一種快捷有用測(cè)定類物質(zhì)

3、的要領(lǐng)。1東西與要領(lǐng)1.1儀器與試劑紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)日本；電子天平上海精天電子儀器廠；型起落恒溫水浴鍋鞏義市英峪予華儀器廠；非極性大孔吸附樹(shù)脂天津南開(kāi)大學(xué)化工場(chǎng)；型酸度計(jì)上海洪紀(jì)儀器裝備；絲氨酸上海康達(dá)氨基酸廠；茚三酮上海三愛(ài)思試劑。別的試劑均為闡發(fā)純，水為去離子水。1.2要領(lǐng)2效果與討論2.1最大汲取波長(zhǎng)簡(jiǎn)直定分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)，起首須確定反響體系的最大汲取波長(zhǎng)。別離細(xì)密汲取樣品溶液、絲氨酸比較溶液和水，按要領(lǐng)“項(xiàng)，以水為參比于波長(zhǎng)下舉行全波長(zhǎng)掃描，效果如圖所示。可見(jiàn)樣品溶液反響產(chǎn)物在處有最大吸光度，與比較品絲氨酸反響產(chǎn)物掃描效果雷同效果未給出，與文獻(xiàn)報(bào)道氨基酸反響產(chǎn)物掃描效果同等

4、；空缺液在以后根本無(wú)汲取。由此確定為測(cè)定波長(zhǎng)。2.2反響溫度和反響時(shí)間簡(jiǎn)直定細(xì)密汲取絲氨酸比較溶液，按要領(lǐng)“，別離于，水浴加熱差異時(shí)間，測(cè)定A，效果見(jiàn)圖?？梢?jiàn)，隨著反響時(shí)間的增長(zhǎng)，A值隨之增大，隨后趨于不變。在下反響，A值到達(dá)最大。再增長(zhǎng)反響時(shí)間，值無(wú)顯著變革。而在，條件下，反響完全的時(shí)間均因溫度低而延伸。同時(shí)對(duì)樣品舉行了觀察，效果如圖所示。可見(jiàn)，樣品在下后反響也已完全。因此，確定反響溫度為，反響時(shí)間為。圖反響產(chǎn)物和空缺的掃描圖略圖反響時(shí)間和反響溫度與吸光度的干系略2.3尺度曲線的繪制細(xì)密汲取絲氨酸比較溶液，和，根據(jù)要領(lǐng)“項(xiàng)測(cè)定A。以絲氨酸含量為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)，繪制尺度曲線如圖。效果表白，

5、絲氨酸濃度在范疇內(nèi)與吸光度呈精良的線性干系。圖絲氨酸尺度曲線略2.4細(xì)密度和不變性實(shí)行細(xì)密汲取樣品溶液，按要領(lǐng)“項(xiàng)，一連測(cè)定A次，別離為，和。求得相對(duì)尺度缺點(diǎn)RSD為，說(shuō)明本要領(lǐng)細(xì)密度精良。細(xì)密汲取樣品溶液，按要領(lǐng)“項(xiàng)，反響后安排，測(cè)定A，別離為，。求得RSD為?？梢?jiàn)顯色反響在內(nèi)無(wú)顯著褪色，說(shuō)明本要領(lǐng)不變性精良。2.5重現(xiàn)性實(shí)行在舉行樣品檢測(cè)時(shí)，不但要求要領(lǐng)具有較高的敏捷度和細(xì)密度，并且還要有很高的重現(xiàn)性。細(xì)密汲取份樣品溶液各，根據(jù)要領(lǐng)“項(xiàng)，測(cè)定，別離為，和，求得RSD為，說(shuō)明本要領(lǐng)重現(xiàn)性精良。2.6接納率實(shí)行為了確定該要領(lǐng)的正確度，舉行了加樣接納率實(shí)行。細(xì)密汲取樣品溶液按要領(lǐng)“項(xiàng)舉行比色測(cè)定

6、，測(cè)得值為本底量。然后別離參加絲氨酸比較溶液，測(cè)定A，得加樣后的總量，盤算均勻接納率和RSD，得加樣接納率實(shí)行效果，見(jiàn)表，可見(jiàn)本要領(lǐng)正確度精良。表1加樣接納率實(shí)行效果略2.7樣品測(cè)定闡發(fā)細(xì)密汲取樣品溶液，按要領(lǐng)“項(xiàng)測(cè)得其A為。對(duì)應(yīng)尺度曲線并盤算得發(fā)酵液濾液類物質(zhì)濃度為。同時(shí)，測(cè)定了菌絲體類物質(zhì)的濃度。細(xì)密稱量蟬花菌絲體，乙醇回流次，過(guò)濾得乙醇提取液水稀釋，按要領(lǐng)“項(xiàng)，得菌絲體乙二醇甲醚溶液，細(xì)密汲取上述溶液，按要領(lǐng)“項(xiàng)測(cè)得其為。而每升發(fā)酵液可得到菌絲體，對(duì)應(yīng)尺度曲線并盤算得菌絲體類物質(zhì)濃度為。合計(jì)每升發(fā)酵液類物質(zhì)濃度為。可見(jiàn)，蟬花中類次生代謝產(chǎn)物的含量較低，仍舊有待通過(guò)菌種選育和優(yōu)化發(fā)酵條件進(jìn)

7、步其產(chǎn)量。2.8測(cè)定要領(lǐng)的評(píng)價(jià)蟬花中類次生代謝產(chǎn)物含量低，難以檢測(cè)。筆者接納茚三酮比色法對(duì)蟬花類物質(zhì)含量的測(cè)定舉行了研究。在創(chuàng)立測(cè)定要領(lǐng)時(shí)，為了去除其他類氨基酸對(duì)測(cè)定的滋擾，按要領(lǐng)“項(xiàng)舉行了薄層層析檢測(cè)，效果如圖所示。可見(jiàn)，絲氨酸比較品和樣品經(jīng)茚三酮顯色后，均天生紅紫色物質(zhì)，薄層睜開(kāi)后具有雷同的值。發(fā)酵液中含有大量極性較大的物質(zhì)，在薄層上表現(xiàn)為靠近原點(diǎn)處的紫赤色帶。而經(jīng)太過(guò)散的樣品僅靠近前沿有赤色斑點(diǎn)，去除了樣品中有其他極性氨基酸物質(zhì)的滋擾。通過(guò)斷定樣品重要身分之一為效果另文報(bào)道，表白樣品中顯色的為類弱極性物質(zhì)，為茚三酮比色法測(cè)定類物質(zhì)提供了根據(jù)，從而確保該法測(cè)定樣品中類物質(zhì)的正確性。圖薄層層析色譜圖略筆者對(duì)本要領(lǐng)反響體系舉行了公正優(yōu)化，選用乙二醇甲醚對(duì)樣品甲醇溶液舉行稀釋，其作為茚三酮的溶劑，稀釋樣品甲醇溶液的同時(shí)可以保持溶液的澄清，且沸點(diǎn)較高，反響歷程中不會(huì)逸出粉碎反響體系。同時(shí)，觀察了定量闡發(fā)要領(lǐng)認(rèn)證的參數(shù)，如線性度和范疇、細(xì)密度、正確度、不變性及重復(fù)性等。實(shí)行效果表白，茚三酮比色法簡(jiǎn)樸快速，細(xì)密度高，正確度好，可作為蟬花中類免疫調(diào)治活性物質(zhì)含量測(cè)定的有用要領(lǐng)，對(duì)付進(jìn)一步優(yōu)化的消費(fèi)工藝和研究其藥理作用均具有緊張的意義?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1王琪，劉作易藥用真菌蟬花