1、異甘草素對腎缺血再灌注的保護作用目的與意義本實驗通過復制腎缺血再灌注模型，利用尾靜脈注射異甘草素的方法，對腎缺血再灌注損傷進行干預，探討其對腎缺血再灌注損傷的保護作用。其目的在于探討異甘草素能否在腎缺血再灌注的保護中作為一種較為理想的藥物，為臨床提供重要的理論支持。 缺血再灌注損傷主要與能量代謝障礙、大量活性氧自由基的生成、細胞內鈣超載、細胞內的炎癥反應、核轉錄因子、內皮素等多種因素1有關。臨床上的防治方法主要是：1、盡早恢復血流量，縮短缺血時間；2、采用低壓、低溫、低鈣再灌注；3、清除活性氧和抗氧化；4、鈣拮抗劑的使用；5、抗白細胞療法；6、補充能量及促進能量生成；7、啟動細胞內源性保護機制

2、。異甘草素異甘草素（iso liqu irit-igenin,ISL）是從中藥材甘草中提取的一種異黃酮類化合物，它的生物活性較強，具有抗腫瘤、抗艾滋病、抗糖尿病并發(fā)癥等活性3, 由此成為藥學界的研究熱點之一。目前市場上已有異甘草素使用，在抗腫瘤和抑制艾滋病方面具有良好的療效。而對腦缺血再灌注有保護作用只局限在實驗室證明，但是對腎的缺血再灌注的保護作用及其機制尚未見報道。 異甘草素可以抑制致癌劑的致癌作用4。 Lee CK5等研究異甘草素不僅能顯著抑制腫瘤細胞的生長，還能對抗化療時血清中肌酐及血中尿素氮增加的腎毒性和血清中谷丙轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶升高的肝臟毒性，有效保護了肝和腎。它能預防和抑制

3、腫瘤細胞增殖，可能是其能阻止細胞周期和誘導細胞凋亡而發(fā)揮作用。其中它能抑制內皮細胞中TNF-誘導ROS的產生及NF-kappa B的轉錄與活化。抑制脂質過氧化反應水平6。異甘草素在對抗機體的生理氧化過程中發(fā)揮作用而具有抗氧化作用7。同時有相關研究指出異甘草素對卡介苗加脂多糖誘導的小鼠免疫性肝損傷具有明顯保護作用，能劑量依賴性降低血清中ALT、AST水平和肝組織中TNF-,IL-1水平，減輕肝組織壞死范圍及程度，減少炎癥細胞浸潤8。而劉斌等9研究表明異甘草素可能通過非競爭性鈣拮抗作用松弛豚鼠氣管平滑肌。除此以外，異甘草素具有解痙作用，是有效的肌松藥，能抗心律失常和抗?jié)冏饔?。因為異甘草素的酚羥基

4、基團具有具有抗生物氧化過程而達到抗氧化、清除氧自由基作用以抑制細胞或者組織在損傷過程中脂質過氧化或氧自由基產生過多進一步加重損傷10。而相關研究發(fā)現(xiàn)ISL在心、腦缺血再灌注損傷動物模型中具有抗脂質過氧化和抑制血小板聚集等作用11, 因而可對腦缺血再灌注損傷的腦細胞起到修復和保護作用12。但ISL對腎缺血再灌注損傷的保護作用及其機制尚未見報道。 儀器設備情況：本實驗采用機能實驗室常用設備，具體如下：哺乳動物手術器械一套、注射器數支、小燒杯、試管、離心管數只、移液器、吸頭若干、離心機、電子天平、組織勻漿機、722分光光度計、肌酐測定試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）測試盒 實驗動物情況:健康大鼠5只

5、 藥品試劑來源：本實驗采用異甘草素注射液、生理鹽水、3%戊巴比妥鈉大鼠（5只）給藥組（1.2號）模型組（3.4號）假手術組（5號）尾靜脈注射異甘草素尾靜脈注射生理鹽水不作處理夾閉雙側腎動脈30min松開動脈夾，再灌注60min觀察大鼠腎臟外觀與顏色，測定血清肌酐濃度（mol/L）和腎臟局部組織中SOD含量(NU/ml)1、2大鼠：在尾靜脈注射異甘草素7mg/kg3、4大鼠：在尾靜脈注射等量的生理鹽水5號大鼠： 不作處理。大鼠術前12h禁食，自由飲用水。分別經腹腔注入3%戊巴比妥鈉1ml/kg進行麻醉，仰臥固定在手術臺上。仰臥固定在手術臺上。沿腹部正中線打開腹腔，作正中切口，暴露雙側腎并游離腎蒂

6、。觀察腎臟大體形態(tài)和顏色對5只大鼠斷尾采血分別測定其血清肌酐濃度并記錄數據。摘取5只大鼠的左側腎臟備用。制備5只大鼠10%的左腎組織勻漿液按試紙盒說明檢測上清液中SOD活力。（3）旋渦混勻器混勻，室溫放置10分鐘，于波長550nm，1cm光徑，蒸餾水調零，測各管吸光度腎組織SOD活力測定 (1)稱取100mg腎組織，放入盛有10ml生理鹽水的勻漿玻璃器皿中，用勻漿器勻漿2分鐘，倒一半入5ml試管中，離心5分鐘，收取上清。(2)按下表順序用移液器和專用吸頭把下述試劑加入另一個5ml試管。SOD測定步驟試劑 測定管 對照管 試劑 測定管 對照管試劑1（ml） 1.0 1.0 試劑3（ml） 0.1

7、 0.1樣品上清液 0.5 / 試劑4（ml） 0.1 0.1蒸餾水（ml） / 0.5 充分混勻，置37度恒溫水浴40min試劑2（ml） 0.1 0.1 顯示劑（ml） 2.0 2.0實驗數據收集記錄表編號 血清肌酐濃度 SOD含量 腎臟顏色、外觀 （mol/L） (NU/ml) 1 2 3 4 5可行性分析:1、大鼠易得到，容易侍養(yǎng)，在科研工作中被廣泛利用。2、大鼠的腎缺血再灌注模型制作成熟，且對大鼠的損傷較小。3、手術器材和設備均為實驗室常用，手術方法也相對簡單。預期效果:1、異甘草素能夠在腎臟缺血再灌注模型中起保護作用，作為一種較為理想的腎臟缺血再灌注的保護藥物。2、為臨床上進一步研

8、制異甘草素作為腎臟缺血再灌注保護的藥物提供可靠依據。實驗設計工作時間安排:1、共計30min 完成實驗動物的預處理。2、共計90min 完成實驗動物模型制備和取材 3、共計90min完成指標檢測和數據分析4、總共實驗在3.5H完成。1肖獻忠，病理生理書（第2版），20122李德芳,王振，羅鋒等，異甘草素的藥理作用研究3木合布力阿布力孜, 艾尼瓦爾買買提等，異甘草素的制備方法和藥理作用研究J4BabaM, Asano R, TakigamiI, et a.l Studies on can cer ch emoprevention y traditional folkmed icinesXXV.

9、Inhibitory effect of isoliquiritigen in on azoxym eth aneinducedm urin ecolon ab erran t cryp t focus formation and carcinogenesisJ BiolPharm Bu l,l 2002, 25( 2 ): 247.5Lee CK,Son SH,Park KK,et al. lsoliquiritigenin inhibits tumor growth and protects the kidney and liver against chemotherapy-induced

10、 toxicity in a mouse xenograft model of colon carcinomaJ.Pharmacol Sci,2008,106(3):444-4516Kumar S,Sharma A,Madan B, et al. lsoliquiritigenin inhibits lkappaB kinase activity and ROS generation to block TNF-alpha induced expression of cell adhesion molecules on human ecdothelial cellsJ.Biochem Pharm

11、acol,2007,73(10):1602-16127新疆甘草成分的抗氧化作用J國外醫(yī)學，中醫(yī)中藥分冊，1997，19（5）；58Chin Y W,Jung H A,Liu Y,et at.Anti-oxidant constituents of the roots and stolons of NcoriceJ.Agric Food Chem,2007,55(12);4691-4697Jacob V Y,Paula A,Elinky,et al.Antioxidant constituents from licorice roots:isolation,structure elucidati

12、on and anti-oxidative capacity toward LDL oxidationJFree RadicalBiology&Medicine,1997,23(2):302-3138尹龍武，呂曉君，楊靜等，異甘草素對小鼠免疫性肝損傷的保護作用及其機制.中國藥理通訊.2007，24（3）：379劉斌, 楊靜. 異甘草素對豚鼠離體氣管平滑肌收縮功能的影響 J . 中國藥理學通報, 2005, 21 ( 7) : 892.10王振華,李德芳,陳紅梅,等. 異甘草素作為癌分化誘導劑的應用D.碩士, 石河子大學, 201011An W, Yang J. Metallothion ein

13、 mediates card ioprotection of isoliquiritigen in against ischemia-reperfusion injury throughJAK2 /STAT3 activation J . Acta Pharm acol S in, 2006, 27( 11 ) : 1431-1437. 2 Zhan C, Yang J. Protect ive effects of isoliquiritigen in intransientmiddle cerebral artery occlusion-induced focal cerebral ischemia in rats J