1、2013年艾滋病檢測點培訓課件第一頁，共59頁。艾滋病基礎知識-定義 艾滋?。ˋIDS）：由人類免疫缺陷病毒（HIV）所引 起的一種以輔助性T淋巴細胞（CD4+T淋巴細胞）數量減少導致免疫功能減退為主要特征的嚴重傳染性疾病。-來源 20世紀40-50年代的非洲，HIV病毒可能由猴子體內的猿免疫缺陷病毒演變而來第二頁，共59頁。-流行 最早在美國發(fā)現 歐洲 非洲 20世紀80年代中后期傳播到亞洲-感染的自然發(fā)展過程窗口期 受到HIV感染到可以檢測出艾滋病抗 體的這一段時間 特點：輕微的一過性感冒癥狀 在窗口期內檢測不出抗體 感染（HIV-1）2-3周可檢出P24抗原 感染者的血液、精液、陰道分泌

2、物等 體液中，含有大量HIV 第三頁，共59頁。無癥狀潛伏期 8-10年 特點：HIV抗體+臨床癥狀出現 平均10年的潛伏期后出現艾滋病病人 臨床癥狀出現后1年發(fā)展為病人死亡 無抗病毒治療情況下，半年到2年的時間，病人死于艾滋病 HIV抗體（-） HIV抗體（+），無癥狀 HIV抗體+ 有癥狀 艾滋病 4-8周 810年 1年 0.52年左右 個體感染艾滋病病毒后的自然發(fā)展過程 第四頁，共59頁。HIV檢測是艾滋病防治的一項重要保證措施明確HIV感染者（診斷）及早醫(yī)學干預合宜的治療指標和效果評估疫苗效果考評發(fā)現HIV陰性者做好減少危險（不安全性行為和藥癮者）的咨詢開展VCT的基礎流行病學監(jiān)測和

3、專題研究公共衛(wèi)生規(guī)劃（政策形成、保險、控制等）職業(yè)保護第五頁，共59頁。達到保證措施的必要條件貫徹有關HIV檢測的法規(guī)（實驗室網絡、人員、儀器設備、房屋等條件）有效的檢測方法和檢測試劑常規(guī)質量控制和質量保證第六頁，共59頁。艾滋病檢測工作管理文獻1990. 全國HIV檢測管理規(guī)范（試行）1997.9. 全國艾滋病檢測工作規(guī)范2004.8. 全國艾滋病檢測技術規(guī)范（試行） - “規(guī)范”2003. 全國艾滋病檢測工作管理辦法 - “辦法”2004.12全國艾滋病檢測技術規(guī)范（正式）2009 全國艾滋病檢測技術規(guī)范（修訂版）第七頁，共59頁。HIV感染的實驗診斷檢測方法HIV培養(yǎng)，核酸測定，P24抗

4、原檢測，血清抗體測定金標準血清抗體測定，HIV感染后平均25天檢出，待12周時幾乎全檢出HIV抗體檢測兩個階段（篩查和確認）三個程序（初篩復檢確認）23標本（血清，全血，唾液，尿液，濾紙干血）第八頁，共59頁。HIV篩查試劑要求和種類- 要求SFDA 注冊批準中檢所 批批檢合格CDC 臨床評估質量優(yōu)良使用 有效期內 采供血機構 必須使用HIV-1/2 - 種類 酶聯免疫試劑（EIA） 顆粒凝集試劑（PA） 其它快速試劑（RT）第九頁，共59頁。檢測注意事項- HIV抗體檢測工作應該按照全國艾滋病檢測技術規(guī)范，在合格的艾滋病檢測實驗室進行- 為了減少檢測的錯誤和誤差，應采取嚴格的質量保證、質量控

5、制和質量評價措施- 注意實驗室生物安全防護和職業(yè)暴露預防- 嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP），按照試劑盒說明書操作，注意防止樣品間交叉污染第十頁，共59頁。檢測程序- 篩查試驗- 重復檢測- 確認試驗第十一頁，共59頁。HIV抗體篩查-職責經省衛(wèi)生行政部門指定驗收專家組，驗收合格的HIV篩查實驗室-方法、試劑酶聯免疫實驗：第三代雙抗原夾心法試劑（ELISA）快速檢測 明膠顆粒凝聚實驗 斑點ELISA 斑點免疫膠體金 艾滋病唾液檢測卡第十二頁，共59頁。采集標本血液標本一般采集肘正中靜脈血液3-5ml嬰幼兒可選擇頸外靜脈第十三頁，共59頁。采集標本以肘靜脈取血為例。選擇適宜靜脈，在上臂扎上壓

6、脈帶。先用25g/L碘酊棉簽于欲穿刺處皮膚從內向外做環(huán)形消毒，待干后再用0.75L/L乙醇棉簽以同樣方式擦去碘跡。第十四頁，共59頁。采集標本取無菌注射器，按牢針頭，使針頭斜面與針筒刻度平行，并查看有無阻塞和漏氣。采用一次性注射器還應注意包裝是否密封，有無過期，否則不得使用。第十五頁，共59頁。采集標本囑病人緊握拳頭，使靜脈顯露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手持注射器，使針筒刻度向上，先以約30角度沿靜脈正面進針，快速穿過皮膚刺入靜脈中央。見回血后，右手固定注射器，用左手緩緩抽出注射器針栓，至所需血量后，解除壓脈帶，放松拳頭，以消毒棉簽壓住穿刺孔，拔出針頭。第十六頁，共59頁。采集標本取下針頭

7、，將血液沿管（瓶）壁緩慢注入容器內，待血液自行凝固。血塊收縮后，即可分離出血清。如需全血或血漿，則將血液注入事先準備的抗凝管（瓶）中，輕輕混勻，防止凝固，即為抗凝血。經適當離心可分離出血漿。血清和血漿的主要差別是，血清中無纖維蛋白原。采樣完畢后應同時填寫采樣登記表第十七頁，共59頁。標本處理將采集好的血液標本放入離心機3000轉/分離心5分鐘取出標本，用移液器（或一次性滴管）將血清移入血清儲存管中（1.5ml）檢測完畢后將血清儲存管蓋緊，放入冰箱冷凍室保存至少2個月第十八頁，共59頁。膠體金快速檢測技術第十九頁，共59頁。 一、原理 本品采用膠體金免疫層析技術，在玻璃纖維膜上預包被金標記HIV

8、gp 160和gp3 6抗原，在硝酸纖維膜檢測線和質控線上分別包被HIVgp41、gp3 6混合抗原和抗HIVgp41抗體，當檢測進行時，樣品中HIV抗體可與金標記的HIV抗原結合形成復合物，由于層析作用,使復合物沿試紙條向前移動。若樣品中含有可被檢測的HIV抗體，則與檢測線預包被的HIV抗原結合形成“金標記HIV抗原-HIV抗體一HIV包被抗原復合物凝聚顯色；若樣品中沒有HIV抗體或HIV抗體的含量低于檢測限時，則不形成復合物而不顯色。第二十頁，共59頁。二、試劑盒組成 1. HIV(12)抗體膠體金試紙條板50人份盒， ( 5條)lO袋。 2. 說明書1份。 3. 稀釋液l份， 4ml瓶。

9、第二十一頁，共59頁。 三、操作步驟根據試劑盒說明書進行操作！一般操作步驟： 1將密封袋打開，取出所需試紙條板。 2樣本檢測：取4 O ul待檢樣本加在試紙條板的加樣區(qū)，再在近加樣區(qū)上方加1滴稀釋液。 3 3 0分鐘內觀察并記錄試驗結果。第二十二頁，共59頁。四、結果判斷 陽性結果：在試紙條板的檢測窗和質控窗位置上各出現一條紫紅色條帶。 陰性結果：僅在試紙條板的質控窗位置上出現一條紫紅色條帶。 無效結果：在試紙條板的檢測窗和質控窗位置上均未出現紫紅色條帶為試驗無效。第二十三頁，共59頁。 五、實驗結果判斷示意圖第二十四頁，共59頁。六、注意事項 1被檢樣品、試劑應在室溫2 O左右平衡30分鐘后

10、檢測。被檢品應為新鮮樣品。如發(fā)現試紙條板密封袋破損則需廢棄。 2高血脂和高膽紅素樣品對檢測結果無顯著性影響，但溶血樣品，尤其是大量溶血樣品對檢測結果有顯著影響。 3當質控窗與檢測窗上均不出現紫紅色條帶時，應重新測試，如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產品并與當地供貨商聯系。第二十五頁，共59頁。 七、膠體金快速試劑實物第二十六頁，共59頁。HIV檢測中的保密的認識HIV檢測前后咨詢中獲得的隱私HIV檢測結果與專業(yè)人員的討論在各種場合中對受檢者的討論（包括會議）檔案記錄與保存受檢者，家屬，朋友和單位傳報醫(yī)院匿名檢測系統(tǒng)能確保保密，但不利于醫(yī)學管理第二十七頁，共59頁。初篩結果處理- 初篩（-

11、） 出具“HIV抗體陰性”報告 初篩（+） 可出具“HIV抗體待復檢”的報告，但不能出具陽性報告。- 送復檢 填寫復檢檢測單，兩人簽字 重新采集受檢者的血樣 原樣和新樣連同送樣單 HIV篩查實驗室 確認實驗室 篩查實驗室復檢 做好檢測前后咨詢第二十八頁，共59頁。樣品篩查檢測一陰一陽均陽性反應陰性報告送初篩實驗室進行復檢重復檢測均陰性反應陽性反應原有試劑另一種篩查試劑篩查試劑陰性反應檢測點篩查試驗流程圖第二十九頁，共59頁。重復檢測- 職責 HIV篩查實驗室 或 HIV確認實驗室 篩查實驗室擬作復檢，加強自我質量控制- 試劑 選擇：兩種不同原理或廠家 品種： 酶聯免疫試劑 快速檢測試劑 第三十

12、頁，共59頁。重復檢測結果處理-復檢（-）出具“HIV抗體陰性”報告 復檢（+） 可出具“HIV抗體待復查”的報告，但不能出具陽性報告。-送確認 填寫復查送樣單，兩人簽字 原樣或新樣連同送樣單送確認實驗室第三十一頁，共59頁。確認實驗- 職責 確認實驗室-檢測方法 免疫印跡實驗（WB） 線性免疫實驗（LIA） 免疫熒光實驗 （IFA）第三十二頁，共59頁。確認結果解釋1.確認陰性（-）進行陰性咨詢2.確認陽性（+）進行陽性咨詢3.不確定結果按照“全國艾滋病檢測技術規(guī)范”的規(guī)定進行隨訪第三十三頁，共59頁。 4當樣品中抗體含量極高時，質控窗條帶有所減弱，但此結果仍視為有效結果(若需進一步確認，可

13、用HIV抗體陰性血適量稀釋后再作測試)。 5本品檢測陽性結果須進行確證試驗確證。 6測試過程中所接觸血液樣品，一律視為HIV陽性操作。 73 0分鐘后觀察的結果無效。第三十四頁，共59頁。實驗室生物安全第三十五頁，共59頁。生物危險感染性的致病因子，無論是直接感染，還是間接地散播到環(huán)境中去，對人類、動物或植物都是一個現實的或潛在的危險。AnimalsHumansPlants第三十六頁，共59頁。實驗室生物安全操作者操作對象環(huán)境第三十七頁，共59頁。實驗室的生物安全規(guī)范 實驗室的運行規(guī)范儀器設備的使用規(guī)范針對感染性材料的操作規(guī)范個人防護用品的使用規(guī)范 第三十八頁，共59頁。病原微生物實驗室的生物

14、危險 第三十九頁，共59頁。實驗室主要生物危害微生物氣溶膠吸入刺傷、割傷皮膚、黏膜污染食入感染的實驗動物咬傷 還有許多不明原因的實驗室相關感染 第四十頁，共59頁。Pike等對3 921例實驗室相關感染統(tǒng)計分析結果發(fā)現，已知原因的實驗室感染只占全部感染的18，不明原因的實驗室感染卻高達82。對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。第四十一頁，共59頁。實驗室微生物氣溶膠的種類飛沫核氣溶膠粉塵氣溶膠 兩類微生物氣溶膠對實驗室工作人員都具有嚴重的危害性，其程度取決于微生物本身的毒力、氣溶膠的濃度、氣溶膠粒子大

15、小、以及當時實驗室內的微小氣候條件。 研究發(fā)現，粒徑100m的飛沫沉降很快，而粒徑50m的飛沫在0.4s內就擴散開了；粒徑5m的飛沫核能夠被呼吸道的粘膜捕獲。 第四十二頁，共59頁。產生微生物氣溶膠的其它因素另外，一些在自然環(huán)境中可以繁殖的微生物，一旦進入實驗室的空調或通風系統(tǒng)，污染了空調的冷卻水，則可以形成更廣泛的微生物氣溶膠污染。如軍團菌污染導致的肺炎。除了實驗室操作可以產生微生物氣溶膠外，患有呼吸道傳染病或皮毛上染有病原微生物的實驗動物也可以產生微生物氣溶膠。微生物氣溶膠在一個實驗室內產生后，還可以通過氣流轉移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整個建筑物的空氣。 第四十三頁，共59頁。生物

16、安全實驗室的運行規(guī)范 第四十四頁，共59頁。（一）實驗室的進入未經批準，非實驗室工作人員不得進入實驗室工作區(qū)域。兒童不得進入實驗室工作區(qū)域。實驗室的門應保持關閉。與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。第四十五頁，共59頁。（二）防護要求在實驗室工作時，必須穿著合適的工作服或防護服。在進行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料的操作時，應戴上合適的手套。操作完畢摘除手套后必須洗手。在處理完感染性實驗材料以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設備。第四十六頁，共59頁。（二）防護

17、要求嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室工作區(qū)域。不得在實驗室內穿露腳趾的鞋。禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。在實驗室內用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內。第四十七頁，共59頁。第四十八頁，共59頁。第四十九頁，共59頁。辦公室第五十頁，共59頁。第五十一頁，共59頁。（三）有關操作的指導原則嚴禁用口吸移液管, 嚴禁將實驗材料置于口內。嚴禁舔標簽。所有的實驗操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。應限制使用注射針頭和注射器。注射針頭和注射器不能用于移液或用作其他用途。第五十二頁，共59頁。（三）有關操作的指導原則實驗室應制

18、訂并執(zhí)行處理溢出物的標準操作程序。出現溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質時，必須向實驗室負責人報告。實驗室應如實記錄有關暴露和處理的情況，保存相關記錄。污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學或物理學方法）。根據所處理的微生物因子的危險度評估結果準備專門的污水處理系統(tǒng)。只有保證在實驗室內沒有受到污染的文件紙張才能帶出實驗室第五十三頁，共59頁。（四）實驗室工作區(qū)的管理原則實驗室應保持清潔整齊，嚴禁擺放和實驗無關的物品。每天工作結束后應清除工作臺面的污染。若發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出應立即清除污染。所有受到污染的材料、標本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須先清除污染。感染性材料的包裝和運輸應遵循國家和或國際的相關規(guī)定。如果窗戶可以打開，則應安裝防止節(jié)肢動物進入的紗窗。第五十四頁，共59頁。第五十五頁，共59頁。第五十