1、齊魯細(xì)胞TIL細(xì)胞治療手冊(cè)LOGYOURLO(某某廣告設(shè)計(jì)有限么文件編碼（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）本廣工劫一討二，:文件編碼（GHTU-UITID-Aralbumofpaintinesofcallinffcardoftheprofessionalelectronthatmakeaelectrorii.catalogproductaniujationdosign,advortisonwnTdesign,rolase,install?1、TIL細(xì)胞簡(jiǎn)介腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TumorInfiltratingLymphocytes,TIL)是通過(guò)采集患者胸腔積水或

2、者腹水，經(jīng)過(guò)體外激活擴(kuò)增培養(yǎng)，得到的一種在生理?xiàng)l件下能夠殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞群。它是新一代的特異性免疫活性細(xì)胞療法，具有高效、特異、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，可有效輔助惡性腫瘤的治療。惡性頑固性胸腹水多數(shù)為晚期腫瘤或轉(zhuǎn)移瘤所引起的嚴(yán)重并發(fā)癥，也稱(chēng)癌性腹水，用常規(guī)的手段治療效果不佳，不良反應(yīng)大，且易反復(fù)。癌性胸腹水在最初可能對(duì)生活質(zhì)量影響不大，但如果進(jìn)展迅速可導(dǎo)致病情惡化及死亡，應(yīng)及時(shí)采取相應(yīng)措施控制癌性胸腹水，緩解癥狀，為全身治療創(chuàng)造條件，提高患者的生活質(zhì)量，癌性胸腹水的淋巴細(xì)胞是一種特殊形式的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL細(xì)胞)，主要源于T淋巴細(xì)胞，它對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的識(shí)別能力，但殺傷活性低。從癌性胸腹水中

3、分離并提取TIL細(xì)胞，經(jīng)一系列細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)并擴(kuò)增后將其回輸?shù)交颊叩男馗骨恢?，可通過(guò)以下幾種途徑發(fā)揮治療作用：a.TIL細(xì)胞能特異性識(shí)別并殺傷自體腫瘤細(xì)胞，引起腫瘤供血血管的損傷，使其閉塞，減少滲出并發(fā)揮抗腫瘤作用，有效抑制腫瘤細(xì)胞的正常生長(zhǎng)；b.TIL細(xì)胞可抑制腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的能損傷腹膜表面的蛋白因子，抑制細(xì)胞內(nèi)組織胺成分的釋放，一減輕腹膜表面的滲出，并促進(jìn)損傷的腹膜表面的修復(fù)，使?jié)B出液盡快吸收，從而達(dá)到治療作用；c.提高機(jī)體免疫功能。該治療項(xiàng)目能有效控制胸腹水積液、緩解癥狀、提高患者的生活質(zhì)量，且副作用小，癥狀改善的同時(shí)也為臨床其他治療如手術(shù)、化療、放療創(chuàng)造了條件，提高腫瘤綜合治療的療效。

4、2、TIL的抗腫瘤途徑TIL細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞主要依賴(lài)其中的CTL細(xì)胞的有效激活和有效行使功能。T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)細(xì)胞，需要有兩個(gè)刺激信號(hào)，第一激活信號(hào)由TCR與抗原肽：MHC分子復(fù)合物結(jié)合提供；第二激活信號(hào)T細(xì)胞上的CD28與抗原提呈細(xì)胞(APC)上B7分子結(jié)合提供。通過(guò)該途徑殺傷腫瘤細(xì)胞機(jī)制目前已經(jīng)清楚，另外研究證明TIL殺傷腫瘤還有3條途徑：Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，其主要機(jī)制為淋巴細(xì)胞通過(guò)表面的Fas配體(FasL)與靶細(xì)胞上的Fas結(jié)合，引起細(xì)胞DNA片段化，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡。穿孔素/顆粒酶B介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。TIL分泌一些分子如TNF-a，IFN-Y等介導(dǎo)的細(xì)胞溶解與凋亡，該途徑可通過(guò)釋放顆

5、?；蛑苯蛹?xì)胞接觸殺傷靶細(xì)胞。3、TIL細(xì)胞表型TIL主要是由T細(xì)胞、NK細(xì)胞組成。在抗瘤作用中，T細(xì)胞是最主要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，并且T細(xì)胞中以CD4+、CD8+為主。Radoja等發(fā)現(xiàn)TIL細(xì)胞群還可表達(dá)多種激活標(biāo)記物，有CD69、CD95L、CD122和LFA-1以及分泌IL-2。關(guān)于擴(kuò)增后的TIL表型變化，大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示CD4+細(xì)胞比例呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，而CD8+細(xì)胞比例增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯，CD4+/CD8+比例降低。在不同的培養(yǎng)時(shí)期，TIL表型也有差異。初始分離時(shí)TIL表型以CD3+T細(xì)胞為主，CD4+/CD8+值為，說(shuō)明機(jī)體免疫功能處于抑制狀態(tài)，經(jīng)培養(yǎng)后CD8+T細(xì)胞的比率明顯升高，CD4+

6、/CD8+值下降為二這表明幾乎激活所有的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，使得CD3+CD8+T細(xì)胞成優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)。4、TIL的實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用1988年Rosenberg等首次應(yīng)用TIL靜脈回輸并聯(lián)合IL-2、CTX治療20例惡性黑色素瘤，其中12例達(dá)到部分或完全消退。此后研究人員陸續(xù)做了許多實(shí)驗(yàn)，2002年Rosenberg實(shí)驗(yàn)室在Science上發(fā)表了研究成果。他們采用TIL對(duì)13例化療無(wú)效的晚期惡性黑色素瘤患者進(jìn)行免疫替代療法，結(jié)果6例獲得部分緩解，4例取得混合型療效。目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道TIL對(duì)腫瘤引起的惡性胸腹水具有良好的治療作用。國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)50例體腔積液患者進(jìn)行TIL治療。50例患者中18例由肺癌引起的

7、胸腹水，8例是乳腺癌引起的胸水，6例由肝癌引起的胸腹水，10例結(jié)直腸癌引起的胸腹水，5例卵巢癌引起的胸腹水，3例是其它原因引起的胸腹水。經(jīng)過(guò)TIL治療后，結(jié)果見(jiàn)下圖。病種胸水腹水PD有效率CRPRSDPD有效率CRPRSD肺掘W61094%41083%乳腺癌6200100%0000肝癌LJ066%2-7080%結(jié)直腸癌220160%441089%卵巢癌1L100%2210SO%其它011050%10I050%總計(jì)201341的%13q5Q81%54%35%48%33%Fabbri等采用TIL聯(lián)合IL-2對(duì)39例病人進(jìn)行治療，結(jié)果%病人生存期超過(guò)37個(gè)月；%病人生存期超過(guò)21個(gè)月；2例病人完全治

8、愈。5、TIL細(xì)胞的適用癥和禁忌癥.TIL細(xì)胞的適用癥適用于各種惡性胸腹水.TIL細(xì)胞的禁忌癥a）臟器移植者；b）T細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞白血??；c）嚴(yán)重的自身免疫性疾病者；d）不可控制的感染性疾??；e）對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中所用生物制劑過(guò)敏者；f）懷孕或哺乳期婦女；g）器官功能衰竭者,具體器官標(biāo)準(zhǔn)如下：心臟：IV級(jí)以上肝臟：達(dá)到國(guó)內(nèi)肝功能分級(jí)C級(jí)以上腎臟：腎功能衰竭及尿毒癥肺：出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸衰竭癥狀，累及到其他臟器，如肝、腎功能腦：腦轉(zhuǎn)移并伴意識(shí)障礙者6、TIL細(xì)胞治療惡性胸腹水方案采集惡性胸腹水后，14天左右回輸TIL細(xì)胞，直接注射到胸腹腔，回輸前將胸腹水抽干。7、采集胸腹水及注意事項(xiàng).采集前工作患

9、者填寫(xiě)知情同意書(shū)由醫(yī)生根據(jù)患者病情提出TIL細(xì)胞治療并填寫(xiě)患者信息表，患者簽署知情同意書(shū)。患者提供化驗(yàn)結(jié)果血常規(guī)（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，7天內(nèi)有效），此結(jié)果必須提供；感染篩查（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，30天內(nèi)有效），此結(jié)果必須提供；腫瘤標(biāo)志物（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，30天內(nèi)有效），此結(jié)果建議提供；以進(jìn)行治療評(píng)價(jià)；CT或X光片、B超（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，30天內(nèi)有效），此結(jié)果建議提供，以進(jìn)行治療評(píng)價(jià)；病毒拷貝數(shù)檢測(cè)（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，7天內(nèi)有效），對(duì)慢性病毒感染患者，此結(jié)果建議提供，以進(jìn)行治療評(píng)價(jià)；血生化全項(xiàng)（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，7天內(nèi)有效），此結(jié)果建議提供；以進(jìn)行治療評(píng)價(jià)。醫(yī)生提供其它治療安排a）目

10、前無(wú)其它治療；a）目前無(wú)其它治療；手術(shù)時(shí)間安排；化療時(shí)間安排；放療時(shí)間安排；靶向治療時(shí)間安排；抗病毒治療時(shí)間安排。采集時(shí)間的確認(rèn)醫(yī)生結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和臨床安排確認(rèn)采集時(shí)間并通知業(yè)務(wù)人員(最好根據(jù)手術(shù)、放化療的療程同時(shí)制定好回輸計(jì)劃)。患者繳費(fèi)主管醫(yī)生收到患者繳費(fèi)相應(yīng)單據(jù)后安排人員進(jìn)行采集操作。采集無(wú)菌條件下采集胸腹水800T000ml，10IU/ml肝素抗凝，儲(chǔ)存于采血袋中。.采血用具的準(zhǔn)備一次性使用真空采血針組件(BloodCollectionSet)、肝素、采血袋、棉簽、碘伏、膠帶和止血帶。8、細(xì)胞回輸及注意事項(xiàng).回輸日期的通知和確認(rèn)業(yè)務(wù)員在采血后一周內(nèi)以E-MAIL形式通知主管醫(yī)生下周

11、回輸安排，并以電話(huà)、短信形式提醒醫(yī)生查看E-MAIL。確定本次回輸不受其他治療因素，尤其是患者感染、發(fā)燒、放療、化療、轉(zhuǎn)院、出院等的影響。如果因?yàn)榛颊咦陨砘蚱渌颍枰淖兓剌敃r(shí)間，一般只能上下浮動(dòng)1-2天。細(xì)胞制備中心如發(fā)現(xiàn)因細(xì)胞增長(zhǎng)原因，培養(yǎng)時(shí)間需要延長(zhǎng)，將及時(shí)告知主管醫(yī)生。.TIL細(xì)胞的包裝盒質(zhì)量檢驗(yàn)單標(biāo)準(zhǔn)回輸袋100mLTIL細(xì)胞懸液，細(xì)胞回輸袋外標(biāo)注有患者姓名、細(xì)胞編號(hào)、患者所在醫(yī)院、產(chǎn)品出庫(kù)時(shí)間：即當(dāng)天日期的標(biāo)簽。接收產(chǎn)品者還應(yīng)同時(shí)獲得產(chǎn)品驗(yàn)收單，包括：細(xì)胞質(zhì)量報(bào)告單(包括微生物檢測(cè)、內(nèi)毒素檢測(cè)和產(chǎn)品細(xì)胞數(shù)量，并有報(bào)告人和審核人姓名，同時(shí)加蓋質(zhì)檢章)；細(xì)胞回輸簽收單。.TIL細(xì)胞

12、的運(yùn)輸細(xì)胞儲(chǔ)存于細(xì)胞運(yùn)輸箱，箱內(nèi)放冰袋，保持箱內(nèi)溫度在10-20度，通過(guò)專(zhuān)人運(yùn)輸或快遞的方式送至醫(yī)生指定地點(diǎn)。由主管醫(yī)生或護(hù)士簽收產(chǎn)品和產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告；在TIL細(xì)胞回輸簽收單上簽名。.TIL細(xì)胞回輸所需物品：生理鹽水、治療盤(pán)及相關(guān)物品(由醫(yī)院提供)；輸血器、7號(hào)或更大號(hào)套針管(由公司提供)。操作人員：醫(yī)院相關(guān)醫(yī)務(wù)人員回輸前首先核對(duì)TIL細(xì)胞袋標(biāo)簽姓名與患者姓名是否一致回輸方法：連接100mL生理鹽水與輸血器，將輸血器原裝所帶大號(hào)針頭換成套管針并排氣；將針頭與病人血管連接固定，觀(guān)察生理鹽水點(diǎn)滴情況；預(yù)處理：一般不需任何預(yù)處理，但若患者為過(guò)敏體質(zhì)或其它情況需根據(jù)醫(yī)囑加入相應(yīng)處理，比如回輸前提前15分

13、鐘肌肉注射非那根25mg；如果生理鹽水點(diǎn)滴通順，換上細(xì)胞轉(zhuǎn)輸袋，調(diào)節(jié)速度為30-40滴/分；一般病人觀(guān)察10分鐘后如沒(méi)有特殊反應(yīng)，將滴速改為60-80滴/分，直至輸完；若患者有心血管方面疾病應(yīng)按醫(yī)囑控制滴速?；剌斶^(guò)程中可叮囑家屬或護(hù)士每隔5-10分鐘輕輕擠壓轉(zhuǎn)輸袋底部，使沉淀細(xì)胞重新懸??；細(xì)胞回輸完畢后將輸血器連接上剩余的生理鹽水，沖洗輸血器內(nèi)剩余的細(xì)胞；管內(nèi)細(xì)胞沖洗干凈后回輸完成。9、其他注意事項(xiàng).知情同意書(shū)書(shū)面證明患者本人或家屬已了解TIL細(xì)胞治療的情況并同意接受治療，由醫(yī)院保留。.回輸方案的制定單獨(dú)使用TIL細(xì)胞時(shí)，一般在采集后第14天開(kāi)始第一次回輸，具體回輸計(jì)劃在采血后7天內(nèi)告知主管醫(yī)生；如TIL細(xì)胞