蔬菜農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法(fāngfǎ)概述第一頁(yè)，共四十九頁(yè)。目前(mùqián)農(nóng)藥在蔬菜中的殘留問(wèn)題農(nóng)藥是把“雙刃劍〞，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但由于農(nóng)藥本身固有的化學(xué)屬性和對(duì)其使用不當(dāng)，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)，嚴(yán)重危害到廣闊人民群眾的身體健康。在我國(guó)農(nóng)藥中，70％為有機(jī)磷農(nóng)藥，而在我國(guó)生產(chǎn)使用的有機(jī)磷農(nóng)藥中，70％為劇毒、高毒類，而且較多是禁止在蔬菜(shūcài)作物上使用的。第二頁(yè)，共四十九頁(yè)。農(nóng)藥(nóngyào)中毒事件常有報(bào)道，究其原因1.農(nóng)產(chǎn)品不按規(guī)定的用藥量、次數(shù)、方法或平安間隔期施藥，或施用不允許在蔬菜上使用(shǐyòng)的劇毒、高毒農(nóng)藥；2.現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)施行的農(nóng)藥殘留測(cè)定需要通過(guò)有機(jī)溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進(jìn)行，無(wú)法對(duì)廉價(jià)的蔬菜進(jìn)行隨時(shí)隨地或快速的檢測(cè)而形成的監(jiān)管不到位。第三頁(yè)，共四十九頁(yè)。目前所使用的農(nóng)藥按其化學(xué)結(jié)構(gòu)(jiégòu)大致可分為以下幾類：有機(jī)氯類；有機(jī)磷類；氨基甲酸酯類；擬除蟲(chóng)菊酯類等。第四頁(yè)，共四十九頁(yè)。根據(jù)以上情況，制定出有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速(kuàisù)檢測(cè)方法，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留的快速(kuàisù)檢測(cè)已成為十分必要的監(jiān)管措施。第五頁(yè)，共四十九頁(yè)。農(nóng)藥殘留主要的檢測(cè)(jiǎncè)方法有兩種：⒈色譜檢測(cè)法色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。⒉速測(cè)儀法速測(cè)儀法只能作農(nóng)殘定性分析，對(duì)于檢測(cè)人員技術(shù)水平要求低，易于在基層推廣等特點(diǎn)，是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效(yǒuxiào)方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用最為廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。第六頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)儀法的主要(zhǔyào)優(yōu)點(diǎn)：1.該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、本錢較低等優(yōu)點(diǎn)，適用于現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定(cèdìng)，特別適合在蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場(chǎng)及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門(mén)開(kāi)展快速檢測(cè)工作。2.該方法可對(duì)有農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩，將一局部農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場(chǎng)之外，防止因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。第七頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)儀法的主要(zhǔyào)缺點(diǎn):1.酶試劑易失活，導(dǎo)致反響不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好，實(shí)際應(yīng)用中確實(shí)認(rèn)率大約為60%~70%左右；2.存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，不能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥；3.不適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜(jiǔcài)、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品；第八頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)儀的檢測(cè)(jiǎncè)方法有兩種:

(GB/T5009.199-2003)⒈速測(cè)卡法〔紙片法〕⒉酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕第九頁(yè)，共四十九頁(yè)。兩種快速檢測(cè)方法(fāngfǎ)的技術(shù)原理根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲(chóng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的乙酰膽堿酯酶的活性造成(zàochénɡ)神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲(chóng)中毒致死的原理而設(shè)計(jì)。如果蔬菜中不含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，乙酰膽堿酯酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反響產(chǎn)生顏色。第十頁(yè)，共四十九頁(yè)。兩種快速檢測(cè)方法(fāngfǎ)的技術(shù)原理如果蔬菜中含可以(kěyǐ)抑制乙酰膽堿酯酶的活性的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就不能被水解，從而無(wú)顯色反響。在溶液中參加乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。第十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕1.試劑

1.1固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片(速測(cè)卡)。1.2pH7.5緩沖溶液：分別取15.0g磷酸氫二鈉(Na2HP04·12H2O)與1.59g無(wú)水磷酸二氫鉀[KH2P04]，用500mL蒸餾水溶解。2儀器2.1常量天平(tiānpíng)有條件時(shí)配備37℃±2℃恒溫裝置第十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕3.分析步驟3.1整體測(cè)定法3.1.1選取有代表性的蔬菜樣品，擦去外表泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，參加10mL緩沖溶液，震搖50次，靜置2min以上。3.1.2取一片速測(cè)卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min以上進(jìn)行預(yù)反響，有條件時(shí)在37℃恒溫(héngwēn)裝置中放置10min。預(yù)反響后的藥片外表必須保持濕潤(rùn)。第十三頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕3.1.3將速測(cè)卡對(duì)折(duìzhé)，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合反響。3.1.4每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)緩沖液的空白對(duì)照卡。第十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕3.2外表(biǎomiàn)測(cè)定法〔粗篩法〕3.2.1擦去蔬菜外表泥土，滴2～3滴緩沖溶液在蔬菜外表，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。3.2.2取一片速測(cè)卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。第十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕3.2.3放置10min以上進(jìn)行預(yù)反響(fǎnyìng)，有條件時(shí)在37℃恒溫裝置中放置10min。預(yù)反響(fǎnyìng)后的藥片外表必須保持濕潤(rùn)。3.2.4將速測(cè)卡對(duì)折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合反響。3.2.5每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)緩沖液的空白對(duì)照卡。第十六頁(yè)，共四十九頁(yè)。結(jié)果(jiēguǒ)判定

陽(yáng)性(yángxìng)結(jié)果陰性(yīnxìng)結(jié)果白色藍(lán)色第十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。結(jié)果(jiēguǒ)判定結(jié)果以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥(nóngyào)抑制(為陽(yáng)性)、未抑制〔為陰性〕表示。與空白對(duì)照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同，為陰性結(jié)果。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。第十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕本卷須知1.有些蔬菜如生姜、蔥、蒜、辣椒和番茄等的汁液中含有破壞酶活性或者使藍(lán)色產(chǎn)物褪色的物質(zhì)，處理這類蔬菜時(shí)，不要讓其汁液太多釋放出來(lái)，不要剪得太碎，浸提時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，必要時(shí)可采用整枝蔬菜浸提或采用外表測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株(體)蔬菜浸提的方法(fāngfǎ)，減少色素的干擾。第十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕本卷須知2.試紙上的提取液不可太多而溢出試紙，亦不可太少而使反響不完全。3.最好將每一批樣品處理(chǔlǐ)好后一起加樣，以免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)蒸干。第二十頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕本卷須知4.當(dāng)溫度條件(tiáojiàn)低于37℃，酶反響的速度隨之放慢，藥片加液后放置反響的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間確實(shí)定，應(yīng)以空白對(duì)照卡用〔體溫〕手指捏3分鐘時(shí)可以變藍(lán)，即可往下操作。注意樣品放置的時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照卡放置的時(shí)間一致才有可比性。5.空白對(duì)照卡不變色的原因：一是藥片外表緩沖溶液加的少，預(yù)反響后的藥片外表不夠濕潤(rùn)，二是溫度太低。第二十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。速測(cè)卡法〔紙片法〕本卷須知6.如有條件，將農(nóng)藥速測(cè)卡放在10℃以下保存效果會(huì)更好，每小包產(chǎn)品開(kāi)封后最好在三天內(nèi)用完，如用不完，可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封(mìfēng)保存，如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥速測(cè)卡的紅色藥片由鮮紅橙色變?yōu)榘档暮旨t色，說(shuō)明紙片已吸潮失效。第二十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。PR-3便攜式農(nóng)藥(nóngyào)殘毒快速檢測(cè)儀操作步驟1.接通電源，右側(cè)(yòucè)開(kāi)關(guān)撥至“開(kāi)〞，翻開(kāi)上蓋按“START〞鍵預(yù)熱；2.當(dāng)預(yù)熱到達(dá)設(shè)置反響溫度TEMP時(shí)，聽(tīng)到“嘩〞一聲，屏幕顯示“TEMP1〞，預(yù)熱結(jié)束，等待倒計(jì)時(shí)；3.去試紙外膜，插入試紙〔白片在下端〕，在白片上分別加1-2滴提取液；第二十三頁(yè)，共四十九頁(yè)。PR-3便攜式農(nóng)藥殘毒(cándú)快速檢測(cè)儀4.再次按“START〞鍵，單片電腦(diànnǎo)開(kāi)始“TEMP1〞倒計(jì)時(shí)；5.當(dāng)聽(tīng)到連續(xù)“嘩、嘩、嘩〞聲，屏幕顯示“CLOS〞，提示合上前蓋，進(jìn)入“TEMP2〞倒計(jì)時(shí)；6.當(dāng)聽(tīng)到六聲“嘩、嘩、嘩〞音，本次操作結(jié)束，翻開(kāi)上蓋觀察試紙顏色變化；7.試紙顯示藍(lán)色為陰性，淺藍(lán)色為弱陽(yáng)性，白色為陽(yáng)性；8.測(cè)試完畢，向上取下試紙進(jìn)行下一次的檢測(cè)。

第二十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕1.試劑(shìjì)1.1pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無(wú)水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1000ml蒸餾水溶解。1.2顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸〔DTNB〕和15.6mg碳酸氫鈉，用20ml緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。第二十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕1.3底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過(guò)兩周。1.4乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化△Ao值應(yīng)控制(kòngzhì)在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期不超過(guò)四天。第二十六頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕1.5可選用(xuǎnyòng)由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的△Ao值應(yīng)控制在0.3以上。2.儀器2.1分光光度計(jì)或相應(yīng)測(cè)定儀及常量天平。第二十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕3.分析步驟3.1樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉外表泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，參加5mL緩沖溶液(huǎnchōnɡrónɡyè)，振蕩1～2min，倒出提取液，靜置3～5min，待用。第二十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕3.2對(duì)照溶液測(cè)試：先于試管中參加2.5mL緩沖溶液，再參加0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上(每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致)。參加0.1mL底物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反響，應(yīng)立即放入儀器(yíqì)比色池中，記錄反響3min的吸光度變化值△Ao。第二十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法〔分光(fēnɡuānɡ)光度法〕3.3樣品溶液測(cè)試：先于試管中參加2.5mL樣品提取液，其它操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄(jìlù)反響3min的吸光度變化值△At。第三十頁(yè)，共四十九頁(yè)。結(jié)果(jiēguǒ)的表述計(jì)算檢測(cè)結(jié)果按公式計(jì)算：抑制率(％)=[(△Ao-△At)／△Ao]×100式中：△Ao---對(duì)照(duìzhào)溶液反響3min吸光度的變化值；△At---樣品溶液反響3min吸光度的變化值；第三十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。結(jié)果(jiēguǒ)判定結(jié)果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50％時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上(yǐshàng)。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。第三十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法本卷須知1.蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生(chǎnshēng)假陽(yáng)性。處理這類樣品時(shí)，可采取整株(體)蔬菜浸提。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株(體)蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。第三十三頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法本卷須知2.當(dāng)溫度條件(tiáojiàn)低于37℃，酶反響的速度隨之放慢，參加酶液和顯色劑后放置反響的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間確實(shí)定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min的吸光度變化△Ao值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液放置時(shí)間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對(duì)照溶液3min的吸光度變化△Ao值<0.3的原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。第三十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法本卷須知3.當(dāng)吸光度大到無(wú)法讀取時(shí)，說(shuō)明測(cè)定液渾濁有干擾。4.待測(cè)樣品放入分光光度計(jì)速度的影響。待測(cè)樣品參加底物后，應(yīng)馬上(mǎshàng)搖勻，放入測(cè)定儀，否那么影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。第三十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法本卷須知5.比色杯的透光度影響。保持比色杯的清潔，使比色杯有好的透光度是減少檢測(cè)誤差的必要條件。比色杯可定期用乙醇進(jìn)行清洗。6.微量移液器的影響。微量移液器要專用，貼上標(biāo)簽，防止交叉使用造成試劑污染；試劑從試劑瓶吸出后，不能再放回瓶中，堅(jiān)持只吸不進(jìn)的原那么(yuánzé)，防止試劑污染。第三十六頁(yè)，共四十九頁(yè)。酶抑制率法本卷須知7.藥品配制過(guò)程中的影響。磷酸鹽緩沖液的配置一定要用蒸餾水、純潔水或去離子水，不可使用礦物質(zhì)水，否那么(fǒuzé)在測(cè)量過(guò)程中干擾較大，影響準(zhǔn)確性。第三十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。信儀科技(kējì)PR-203-6T農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀1.試劑制備1.1緩沖液：將緩沖液試劑袋中的試劑倒入燒杯(shāobēi)，溶于500ml蒸餾水中，溶解，混勻即可。室溫保存。1.2酶試劑：目前提供的酶試劑已配成溶液可直接使用。0-5℃環(huán)境下保存。第三十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。信儀科技PR-203-6T農(nóng)藥殘毒(cándú)快速檢測(cè)儀1.3顯色劑：向標(biāo)有“顯色劑〞的試劑瓶中用可調(diào)定量移液器參加25ml緩沖液，溶解、混勻即可。室溫保存。1.4底物(dǐwù)：向標(biāo)有“底物(dǐwù)〞的試劑瓶中用可調(diào)定量移液器參加2.5ml蒸餾水，溶解、混勻即可。0-5℃環(huán)境下保存。第三十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。信儀科技PR-203-6T農(nóng)藥殘毒(cándú)快速檢測(cè)儀2.儀器測(cè)試操作步驟：2.1待測(cè)試液的制備：用天平稱取2g有代表性的果蔬樣品〔葉菜剪成1厘米左右見(jiàn)方的菜樣，塊根菜取1厘米見(jiàn)方表皮樣品〕放入三角瓶中，參加10ml緩沖液，用手振蕩提取(tíqǔ)2分鐘后用濾紙干濾，取出清液即為待測(cè)液。第四十頁(yè)，共四十九頁(yè)。信儀科技PR-203-6T農(nóng)藥殘毒(cándú)快速檢測(cè)儀2.2對(duì)照溶液的測(cè)試：在1cm比色皿中，參加酶100μl，參加緩沖液2.5mL，用保鮮膜蓋住比色皿口，用右手(yòushǒu)大拇指按住保鮮膜，食指托住比色皿的底部，拿起搖勻，再參加顯色劑100μl,參加底物20μl，同樣用保鮮膜蓋住比色皿口，拿起搖勻，儀器強(qiáng)制歸“100%〞后立即放入儀器第一通道中，按下“對(duì)照〞鍵進(jìn)行測(cè)試。第四十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。信儀科技PR-203-6T農(nóng)藥殘毒(cándú)快速檢測(cè)儀2.3樣品溶液的測(cè)試：在比色皿中，參加酶100μl，參加待測(cè)試液2.5mL，搖勻，靜置10分鐘后，參加顯色劑100μl，參加底物(dǐwù)20μl，搖勻，儀器強(qiáng)制歸“100%〞后立即放入儀器比色皿池中，按下“樣品〞鍵進(jìn)行測(cè)試。第四十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。信儀科技(kējì)PR-203-6T農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀2.4測(cè)試結(jié)果的判讀：樣品(yàngpǐn)的抑制率在40%-50%之間為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品(yàngpǐn)，抑制率大于50%為農(nóng)殘超標(biāo)樣品(yàngpǐn)，抑制率≥40%的樣品(yàngpǐn)需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上，如有必要時(shí)，可用氣相色譜等方法作進(jìn)一步確認(rèn)。第四十三頁(yè)，共四十九頁(yè)。臺(tái)灣農(nóng)藥殘毒快速(kuàisù)檢測(cè)儀〔96孔〕

檢測(cè)試劑的調(diào)配：1.緩沖劑：使用前每袋+1000mL蒸餾水，無(wú)需分裝，室溫保存(bǎocún)；2.酵素：酵素〔1瓶〕+500mL的緩沖液，等完全混勻后分裝在紅色的15mL離心管中，每管10mL左右，分裝成50管〔每管可檢驗(yàn)200個(gè)樣品〕。酵素須冷凍保存，理論上每瓶可檢驗(yàn)10000個(gè)樣品；第四十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。檢測(cè)試劑(shìjì)的調(diào)配：3.混合液〔呈色劑和受質(zhì)〕：呈色劑〔1瓶〕+500mL的緩沖液