V:1.0精細(xì)整理，僅供參考本科生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)書(shū)日期：20xx年X月附件：項(xiàng)目編號(hào)：附件：廣州中醫(yī)藥大學(xué)本科生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)書(shū)項(xiàng)目名稱(chēng)葛花治療酒精性脂肪肝大鼠的實(shí)驗(yàn)研究項(xiàng)目負(fù)責(zé)人（學(xué)生）吳向維所在學(xué)院班級(jí)中藥學(xué)院2007級(jí)中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)指導(dǎo)教師李政木、龍泳伶單位中藥學(xué)院電請(qǐng)日期2009-3-25廣州中醫(yī)藥大學(xué)教務(wù)處二OO七年九月說(shuō)明學(xué)生參與學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，均須填寫(xiě)《廣州中醫(yī)藥大學(xué)本科生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)書(shū)》。填寫(xiě)表格前必須認(rèn)真閱讀《廣州中醫(yī)藥大學(xué)本科生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)施與管理暫行辦法》，并根據(jù)教務(wù)處發(fā)布的項(xiàng)目招標(biāo)公告和項(xiàng)目指南的要求認(rèn)真填寫(xiě)。指導(dǎo)教師必須保證確有時(shí)間和精力在查閱資料、設(shè)計(jì)課題、實(shí)驗(yàn)操作、分析結(jié)果與撰寫(xiě)論文等環(huán)節(jié)對(duì)學(xué)生給予全程指導(dǎo)，并簽署意見(jiàn)。有關(guān)實(shí)驗(yàn)室要按照實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放的原則為學(xué)生提供完成創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的必要條件，并由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人簽署意見(jiàn)。如果個(gè)別項(xiàng)目是以教研室或我校其他實(shí)踐教學(xué)基地為主實(shí)施完成的，需要相應(yīng)部門(mén)簽署意見(jiàn)，保證提供必要的條件支持。項(xiàng)目申請(qǐng)人須為入學(xué)以來(lái)平均學(xué)分積點(diǎn)在3.0以上的在讀二年級(jí)及以上本科生，由學(xué)生所在學(xué)院負(fù)責(zé)審核。

研究項(xiàng)目項(xiàng)目名稱(chēng)葛花治療酒精性脂肪肝大鼠的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)科名稱(chēng)中藥學(xué)院申請(qǐng)金額2000元起止時(shí)間2009年3月至2010年3月項(xiàng)目負(fù)責(zé)人姓名吳向維學(xué)院中藥學(xué)院平均學(xué)分積點(diǎn)3.5性別男年級(jí)2007級(jí)電導(dǎo)老師姓名李政木職稱(chēng)教授電別男單位中藥學(xué)院Emaillongyongling@項(xiàng)目小組成員姓名性別學(xué)院年級(jí)班別平均學(xué)分積點(diǎn)林順粦男第一臨床醫(yī)學(xué)院2004級(jí)中醫(yī)學(xué)七年制3.5鐘成培男中藥學(xué)院2007級(jí)中藥學(xué)（營(yíng)銷(xiāo)與物流）3.4戚伯成男中藥學(xué)院2007信息管理學(xué)院3.2吳文瀚男中藥學(xué)院2007級(jí)中藥學(xué)（營(yíng)銷(xiāo)與物流）3.0胡奕榮男中藥學(xué)院2007級(jí)制藥工程3.5研究?jī)?nèi)容和意義簡(jiǎn)介(400~500字)隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人民生活水平的提高，酗酒、暴飲者明顯增多，與之相關(guān)的酒精性脂肪肝(AFLD)患者也逐年增多。據(jù)悉，約75%～95%慢性嗜酒者有不同程度的肝脂肪浸潤(rùn)。AFLD屬酒精性肝病(ALD)的早期表現(xiàn)，癥狀不明顯，很多患者在初次診斷為AFLD時(shí)，往往存在不重視或不相信心理，缺乏對(duì)AFLD危害的了解，延誤早期治療的時(shí)機(jī)，導(dǎo)致本來(lái)可緩解甚至治愈的疾病不能得到有效控制，進(jìn)而發(fā)展至酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化、甚至肝癌，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量和壽命，故尋找安全有效的治療脂肪肝的中藥研究越來(lái)越引起人們的重視。因此，現(xiàn)用葛花對(duì)酒精性脂肪肝的大鼠模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，找出對(duì)酒精性脂肪肝更有效的防治方法。立論依據(jù)1.選題依據(jù)：1.1提出問(wèn)題及其意義：隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人民生活水平的提高，酗酒、暴飲者明顯增多，與之相關(guān)的酒精性脂肪肝(AFLD)患者也逐年增多。據(jù)悉，約75%～95%慢性嗜酒者有不同程度的肝脂肪浸潤(rùn)[1]。AFLD屬酒精性肝病(ALD)的早期表現(xiàn)，癥狀不明顯，很多患者在初次診斷為AFLD時(shí)，往往存在不重視或不相信心理，缺乏對(duì)AFLD危害的了解，延誤早期治療的時(shí)機(jī)，導(dǎo)致本來(lái)可緩解甚至治愈的疾病不能得到有效控制，進(jìn)而發(fā)展至酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化、甚至肝癌，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量和壽命[2]，故尋找安全有效的治療脂肪肝的中藥研究越來(lái)越引起人們的重視。因此，現(xiàn)用葛花對(duì)酒精性脂肪肝的大鼠模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，找出對(duì)酒精性脂肪肝更有效的防治方法。1.2國(guó)內(nèi)外的研究現(xiàn)狀述評(píng)1.2.1文獻(xiàn)資料來(lái)源筆者通過(guò)CKNI-KNS4.0全文期刊數(shù)據(jù)庫(kù)和維普數(shù)據(jù)庫(kù),使用“篇名/關(guān)鍵詞/摘要”模糊匹配的方法,對(duì)1995年以來(lái)關(guān)于對(duì)酒精性脂肪肝大鼠的預(yù)防及治療的文獻(xiàn)進(jìn)行了檢索，通過(guò)對(duì)這些文獻(xiàn)的初步整理和分析,可以看出在文獻(xiàn)中均以選取AFLD的特異性指標(biāo)的形式來(lái)得出結(jié)論的定量研究。文獻(xiàn)的思路是：所有的研究者都主要通過(guò)實(shí)驗(yàn)分組，設(shè)立病理模型進(jìn)行對(duì)比分析的實(shí)驗(yàn)方法來(lái)初步得出藥物對(duì)酒精性脂肪肝的防治作用。在文獻(xiàn)中,研究者的研究對(duì)象為通過(guò)建模所人為形成的酒精肝大鼠模型;以對(duì)照實(shí)驗(yàn)的方法，實(shí)驗(yàn)大多數(shù)采用血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和堿性磷酸酶(ALP)活性以及總蛋白(TP)及白蛋白(ALB)的含量作為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SPSS12．0統(tǒng)計(jì)軟件。1.2.2關(guān)于酒精性脂肪肝的研究成果 酒精性脂肪肝的研究 乙醇水溶性極強(qiáng)，極易為消化道吸收，飲酒后5分鐘便可從血液中檢出，30—60分鐘血中濃度達(dá)高峰。吸收后的乙醇98％通過(guò)生物氧化被清除，少量可由呼吸道及尿液排出。主要在肝臟代謝，在生理?xiàng)l件下經(jīng)乙醇脫氫酶(ADH)代謝為乙醛，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為乙酸，進(jìn)入體循環(huán)。此外，肝臟中還存在微粒體乙醇氧化酶系(MEOS)等代謝系統(tǒng)，MEOS的米氏常數(shù)(Km=86mmol/L)比ADH(2mmol/L)大數(shù)倍，主要在攝取高劑量乙醇時(shí)發(fā)揮作用[3]。乙醇在代謝過(guò)程中誘發(fā)自由基的產(chǎn)生，對(duì)肝臟等多個(gè)器官造成損害。乙醇脂溶性較大，可透過(guò)血腦屏障入腦[4]。酒精性脂肪肝的發(fā)生與以下因素有關(guān)：(1)TG合成增多，這是酒精損傷肝臟引致脂肪肝的主要原因；(2)肝臟分解脂肪的能力下降；(3)肝臟輸出TG的能力下降[5]。 中藥葛花解酒功能的研明蘭茂(滇南本草>載：“葛花解酒醒脾；酒毒酒痢，吐血嘔血。消熱，解酒毒?！睋?jù)此，說(shuō)明葛花(FlosPuerariae)是中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中最具代表性的解酒藥物[6]。文獻(xiàn)通過(guò)每日予大鼠白酒灌胃方法復(fù)制大鼠酒精性肝損傷模型。觀察中藥葛花對(duì)大鼠酒精性肝損傷的預(yù)防作用。110只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、葛花醇提物低劑量組、葛花醇提物中劑量組、葛花醇提物高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥東寶甘泰片組。在造模的同時(shí)灌胃葛花醇提物及東寶甘泰片水溶液。連續(xù)灌胃8周，8周末取材觀察：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性?？偟鞍?TP)及白蛋白(ALB)含量；肝組織超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、還原型谷胱甘肽(GSH)含量；肝組織病理變化。結(jié)果顯示，模型組大鼠出現(xiàn)肝組織脂肪變性和炎性浸潤(rùn)，血清ALT、AST、ALP活性較空白組顯著增加。TP、ALB含量較空白組顯著降低；且肝組織中SOD活性顯著降低。MDA含量顯著升高。葛花醇提物組大鼠的肝組織脂肪變性和炎性浸潤(rùn)均較模型組有所減輕。血清ALT、AST活性較模型組顯著降低，TP、ALB含量較模型組顯著升高肝組織SOD活性較模型組顯著升高。MDA含量顯著低于模型組。GSH含量較模型組也明顯升高。研究表明，葛花醇提物具有明顯預(yù)防酒精性肝損傷的作用[7]。中藥葛花解酒的作用機(jī)制葛花主要作用為解酒和保肝。葛花中的異黃酮可使血中乙醇、乙醛濃度下降，以及降低BUN的升高，從而起到解酒作用；異黃酮及三萜皂苷對(duì)CCl4所致小鼠肝損傷，可使AST、ALT顯著下降[8]。葛花能夠在乙醇的腸胃吸收及代謝兩個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。其水提取物通過(guò)激活乙醇脫氫酶活性來(lái)降低乙醇的濃度，從而有效地降低血中乙醇濃度，對(duì)酒精引起的肝細(xì)胞損害有保護(hù)作用[9~11]。葛花中的有效成分對(duì)酒精代謝障礙及肝功能有改善作用；對(duì)酒精引起的臟器障礙及消化道功能障礙也有一定的改善作用[12]。此外，葛花異黃酮還能擴(kuò)張腦血管、心血管和外周血管，使血壓驟降、心輸出量銳減，使腦組織缺血缺氧，異黃酮還能解除平滑肌痙攣[13]。葛花解酲湯可降低酒精所致小鼠ALT、HI升高。減輕肝臟損害，有明確的保肝作用，也是治療酒精性肝病的有效方藥[13]。2．研究方案：2.1研究目標(biāo)：用葛花對(duì)酒精性脂肪肝大鼠模型進(jìn)行治療研究，找出對(duì)酒精性脂肪肝更有效的防治方法。2.2材料與方法2.2.1動(dòng)物及飼料健康雄性Wistar大鼠40只，體重200±20g，二級(jí)動(dòng)物（由學(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。普通飼料喂養(yǎng)，動(dòng)物室溫度(25±2)℃2.2.2藥物高度白酒(北京釀酒總廠生產(chǎn)的紅星二鍋頭酒，56度)；玉米油(華北制藥康欣有限公司生產(chǎn))；葛花（購(gòu)自杏園春藥材有限公司）；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測(cè)定試劑盒（北京化工有限公司生產(chǎn)）。2.2.3將40大鼠正常飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)取10只作為空白組正常飼養(yǎng)，其余30只動(dòng)物為造模組。造模8周后隨機(jī)分為模型組、葛花水煎液組、葛花粉末組，每組10只動(dòng)物。按照厲有名[14]等的造模方法，給予基礎(chǔ)飼料加1％膽固醇、5％豬油、10％玉米油做成的混合飼料，另外結(jié)合孫怡寧[15]等白酒灌胃的方法，按白酒劑量為1mL/100g／次，每日上午9時(shí)灌胃。2.2.4除正常喂養(yǎng)外，每日上午按1mL/100g分別灌胃：空白組以生理鹽水灌胃；葛花水煎液組按0.16g/mL葛花水煎液灌胃，葛花粉末組按1.4g/kg粉末喂食。3h后模型組和葛花水煎液以及粉末組分別灌相同量的白酒，持續(xù)8周。2.3測(cè)試指標(biāo)于第8周末，所有大鼠均禁食12h，取全血以2500rpm低溫離心15分鐘分離血清，血清ALT、AST采用改良賴(lài)氏法檢測(cè)；取出大鼠肝臟觀察，并取肝右葉距肝臟邊緣0.5cm處組織一小塊，放入10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察。 2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS12.0軟件進(jìn)行錄入和統(tǒng)計(jì)分析，組間比較統(tǒng)計(jì)方法為一般性描述性統(tǒng)計(jì)，單因素方差分析、相關(guān)和回歸分析等。 2.5預(yù)期結(jié)果 至第8周末，模型組大鼠的體重較空白組大鼠體重明顯減輕(P<0．01)，葛花水煎液以及粉末組大鼠體重與模型組無(wú)顯著差異。至第8周末．模型組大鼠肝指數(shù)與空白組相比顯著增加(P<0．01)。葛花的兩組組肝指數(shù)與模型組相比均有顯著下降(P<0．05)。模型組肝細(xì)胞的變態(tài)及炎性浸潤(rùn)程度要比空白組以及葛花兩組大。2.6技術(shù)路線討論定題主要是我們?yōu)g覽了各類(lèi)期刊后再針對(duì)社會(huì)醫(yī)學(xué)的研究的熱點(diǎn)和近年來(lái)出現(xiàn)頻率越來(lái)越高的疾病現(xiàn)象確定我們要研究的方向和定下課題主題。查找撰寫(xiě)定好題目后我們分工合作查找相關(guān)資料，主要通過(guò)上校園網(wǎng)檢索，或其它網(wǎng)站搜索還有利用學(xué)校圖書(shū)館的文獻(xiàn)資源，撰寫(xiě)好綜述。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)的實(shí)驗(yàn)，針對(duì)實(shí)際情況，設(shè)計(jì)出屬于自己的實(shí)驗(yàn)方案。討論分析針對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的與預(yù)期目標(biāo)不符合或相反的情況進(jìn)行分析，找出其原因所在。2.7擬解決的重要問(wèn)題及難點(diǎn) 本課題的難度在于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中取血以及肝臟的處理，因?yàn)楸救藢?duì)該實(shí)驗(yàn)還沒(méi)完全熟練，故需要老資格的師兄協(xié)助完成。2.8創(chuàng)新性 2.8.1選題的切入點(diǎn)恰當(dāng)，采用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)分析方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析匯總 研究進(jìn)度 第一階段：在四月初到四月中旬購(gòu)買(mǎi)研究需要材料。 第二階段：在四月中旬到五月中旬進(jìn)行對(duì)大鼠的喂養(yǎng)。 第三階段：五月中旬到六月初進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 第四階段：六月初將實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及匯總完成論文。3.可行性分析此次研究是在別人研究工作的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，有前人的大量工作可供借鑒，吸取其中的優(yōu)點(diǎn)，避免其中的缺點(diǎn)，從而此次研究的有據(jù)可尋，有理可依。本課題組成員理論知識(shí)扎實(shí)，有很好的獨(dú)立思考問(wèn)題能力和團(tuán)隊(duì)合作精神，有過(guò)多次實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)，熟悉有關(guān)的步驟。我校的師資隊(duì)伍和科研力量都比較強(qiáng)大，有相關(guān)經(jīng)驗(yàn)的師兄師姐也表示會(huì)支持我們的課題和提供建議和幫助，這也將很有助于我們的課題的開(kāi)展。參考文獻(xiàn)[1][2]張秀芬。酒精性脂肪肝患者的健康指導(dǎo)。中國(guó)誤診學(xué)雜志2008年8月第8卷第23期[3]戴德銀．酒的代謝生理及對(duì)藥效和健康的影響[J]．華西藥學(xué)雜志，1991，6(4)：231-235．[4]AlfonsoV，CristinaL，Karo-iS．eta1．SilymarinprotectionFlagainsthepticlipidpemxidatloninducedbyacuteethanolintoxlcatio[J]．BiochemPharmacol，1985，34：2209～2212．[5]歐明．漢英常用中醫(yī)處方手冊(cè)[M]．廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，1991．208．[6]孫衛(wèi)勝，馬駿等．解酒方藥研究概況．甘肅中醫(yī)，1998，11(3)：47～48[7]苗彥妮，鐘贛生.葛花對(duì)大鼠酒精性肝損傷的預(yù)防作用研究.科技導(dǎo)報(bào)2008，26(15)61[8]田代華．實(shí)用中藥辭典(下卷)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社.2002．1897[9]江蘇新醫(yī)學(xué)院．中藥學(xué)大辭典(下冊(cè))[M]．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1994．230[10]蘆潔，李文哲，倪亞明．中藥水提取物對(duì)乙醇脫氫酶活性影響的初步研究[J]．同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版，2002。23(1)：23[11]王東坡，譚學(xué)林．葛花解醒湯對(duì)酒精性肝病防治作用研究[J]．貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，24(2)：55[12]中島嘉次郎．葛花對(duì)消化道的影響[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)·中醫(yī)中藥分冊(cè)，2002，24(4)：250[13]王東坡，譚學(xué)林．葛花解醒湯對(duì)酒精性肝病防治作用研究[J]．貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，24(2)：5[14]厲有名，夏維新．脂肪肝現(xiàn)代診療[M]．江蘇：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2003．65．[15]孫怡寧，尚榮軍．白酒灌胃法建立大鼠早期酒精性肝病模型[J]．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2002，6(32)：565．教師與學(xué)生承擔(dān)的工作及責(zé)任教師在該研究項(xiàng)目中承擔(dān)的工作及責(zé)任：指導(dǎo)和監(jiān)督課題的進(jìn)行學(xué)生在該研究項(xiàng)目中承擔(dān)的工作及責(zé)任：負(fù)責(zé)課題實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、論文撰寫(xiě)預(yù)期成果類(lèi)別：社科類(lèi)社會(huì)調(diào)查報(bào)告及學(xué)術(shù)論文自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文經(jīng)費(fèi)預(yù)算序號(hào)經(jīng)費(fèi)開(kāi)支科目經(jīng)費(fèi)預(yù)算金額（元）1雄性Wistar大鼠30.00元*40只1200.002白酒28元*15瓶420.003葛花150.004ALT、AST試劑盒ALT、AST試劑盒各一瓶84.005顯微鏡用品50.006玉米油30元*2L一瓶30.007常規(guī)石蠟20.008以上科