TAZ一種非小細(xì)胞肺癌基因基于PDZ結(jié)合基序的轉(zhuǎn)錄共激活子taz是一種參與干細(xì)胞分化以及多器官發(fā)生的轉(zhuǎn)錄共激活子。最近，TAZ在新型的hippo-LATS腫瘤抑制途徑的一種主要組分中被鑒定出來(lái)，這種抑制途徑在乳腺癌原癌基因中起作用。我們第一次發(fā)現(xiàn)，taz是一種非小細(xì)胞肺癌的原癌基因。結(jié)果顯示，taz在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)，并且慢病毒介導(dǎo)的taz過(guò)量表達(dá)在HBE135永久的人類上皮呼吸道細(xì)胞引起細(xì)胞增生和轉(zhuǎn)化。通過(guò)沉默基因TAZ可以使其恢復(fù)原有的水平。另外，在非小細(xì)胞肺癌中NSCLC)，小發(fā)卡RNA(shRNA)介導(dǎo)的TAZ表達(dá)沉默抑制他們的增殖和非停泊性增長(zhǎng)。將shRNA抗性的TAZ重新引入TAZ沉默的非小細(xì)胞肺癌的細(xì)胞中可使其恢復(fù)。這說(shuō)明TAZ是一種原癌基因并且在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的腫瘤發(fā)生學(xué)中起重要作用。因此，TAZ在未來(lái)診斷，預(yù)測(cè)和治療肺癌提供一種新的靶標(biāo)。介紹肺癌是全球最普遍的的癌癥，每年都?xì)⑺?2萬(wàn)人。盡管近些年外科手術(shù)、放療和化療一直都在進(jìn)步。近五年肺癌患者仍小于〈15%的生存率強(qiáng)調(diào)了該疾病的攻擊性。在所有診斷為肺癌的患者中，80%是非小細(xì)胞肺癌，包括腺癌、鱗狀細(xì)胞癌和巨大細(xì)胞癌。在過(guò)去的幾十年中，盡管許多對(duì)非小細(xì)胞肺癌的發(fā)展具有重要作用的抑癌基因和原癌基因已陸續(xù)被鑒別;大多數(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者常常鑒定時(shí)已到肺癌晚期，而不能得到及時(shí)的治療。因此，識(shí)別新的負(fù)責(zé)非小細(xì)胞肺癌發(fā)生的蛋白質(zhì)對(duì)早期的鑒別和開發(fā)新型治療肺癌的方法是非常重要的。TAZ，也被稱為含有WW域的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子，它能夠激活轉(zhuǎn)錄因子PPARr、Runx2和Smad。此外，敲除TAZ基因的小鼠會(huì)得多囊腎疾病和肺氣腫。最近，已經(jīng)鑒定TAZ是新發(fā)現(xiàn)的Hippo-LATS腫瘤抑制途徑中的一種元件，在果蠅和哺乳動(dòng)物中對(duì)細(xì)胞增殖、腫瘤形成和器官大的調(diào)節(jié)具有重要作用。值得注意的是，我們和其他人表明與人類具有同源性的果蠅的Hippo和LATS腫瘤抑制子Mst2和LATS1/2可以通過(guò)磷酸化和阻遏抑制TAZ和它的同源物YAP進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。最近，在乳腺癌細(xì)胞系和組織中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)的是TAZ而不是YAP。并且還表明在人類乳腺上皮永生化細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)的TAZ會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞增殖和遷移、轉(zhuǎn)化和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變，而在TAZ敲除的乳腺癌細(xì)胞中抑制了腫瘤的形成，這暗示了TAZ是一個(gè)新的癌基因并且有可能在乳腺癌的行成中具有重要作用。然而，TAZ是否也在其他類型腫瘤發(fā)生中有關(guān)系有待進(jìn)一步研究。在本研究中，我們通過(guò)使用人類肺癌細(xì)胞系和小鼠體內(nèi)模型提供了強(qiáng)有力的證據(jù)表明TAZ在非小細(xì)胞肺癌中是一個(gè)新的癌基因。結(jié)果及討論非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的過(guò)量表達(dá)我們和其他人最近發(fā)現(xiàn)LATS1腫瘤抑制因子的過(guò)量表達(dá)抑制肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，鑒于LATS2在非小細(xì)胞肺癌的突變和下行調(diào)節(jié)(Yangetal.,2001;Strazisaretal.,2009),提出LATS1/2可能涉及肺癌腫瘤發(fā)生。考慮到原癌基因TAZ和YAP是僅有被鑒定出下游標(biāo)靶介導(dǎo)LAST腫瘤抑制功能(VisserandYang,2010)，檢查是否他們?cè)诜伟┲惺д{(diào)。因?yàn)榉切〖?xì)胞肺癌占肺癌的80%，所以我們調(diào)查TAZ和YAP是否涉及非小細(xì)胞肺癌的發(fā)育。我們首先通過(guò)western印記幾個(gè)肺細(xì)胞系檢查TAZ和YAP的過(guò)量表達(dá)，得出普通人類支氣管上皮細(xì)胞(HBE)起源于原發(fā)性肺組織，永生化但不是腫瘤發(fā)育學(xué)的人類支氣管上皮細(xì)胞系和非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系(cellline)。最重要的是，我們發(fā)現(xiàn)TAZ在所有正常細(xì)胞(HBE154andHBE158)和永生化人類支氣管上皮細(xì)胞系(HBE135,BEAS-2BandNL20)相關(guān)性低，但是在9/11(81%)的腫瘤發(fā)生的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中過(guò)量表達(dá)。然而，在15/16的HBE細(xì)胞系中檢測(cè)至0YAP的一致表達(dá)。此外，YAP的磷酸化(未激活)形式(pYAP)和TAZ(pTAZ)在中間產(chǎn)物中低水平的表達(dá)，獨(dú)自的在HBE細(xì)胞系(圖1)。有趣的是，TAZ并沒(méi)有在大規(guī)模的癌細(xì)胞系的檢測(cè)中被發(fā)現(xiàn)，QU-DBandSK-luCi-6(圖1)。使用其他大規(guī)模癌細(xì)胞系檢測(cè)TAZ水平將最終確定是否TAZ在大規(guī)模癌細(xì)胞系中是可檢測(cè)的這些結(jié)果與先前的發(fā)現(xiàn)相一致,AZ而不是YAP在乳腺癌細(xì)胞系中過(guò)量表達(dá)（Chanetal.,2008）。由于增強(qiáng)的原癌基因表達(dá)頻繁的在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)，我們的結(jié)果強(qiáng)有利的支持TAZ而不是YAP可能涉及NSCLC發(fā)育的一種癌基因。然而，通過(guò)YAP在NSCLC組織的免疫組織化學(xué)分析，表明高水平的YAP對(duì)不良預(yù)后（poorprognosis）和在NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相對(duì)應(yīng)起重要作用。盡管如此，和我們的發(fā)現(xiàn)相一致，他們也發(fā)現(xiàn)YAP在大多數(shù)NSCLC細(xì)胞中高水平表達(dá)。由于YAP僅僅在NSCLC細(xì)胞中檢測(cè)到而非在一般和永久化HBE細(xì)胞，YAP是否在NSCLC細(xì)胞中激活在他們的研究中仍不清楚?？紤]到Y(jié)AP和TAZ擁有的獨(dú)立的和交疊的功能，有可能YAP和TAZ都涉及體內(nèi)的肺部腫瘤發(fā)生。進(jìn)一步檢測(cè)TAZ水平，使用臨床的NSCLC病人病變組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，確立TAZ是一種新型用于預(yù)測(cè)或診斷NSCLC發(fā)生的生物標(biāo)簽。TAZ的過(guò)量表達(dá)引起細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)化為了進(jìn)一步確定TAZ是的確是一種新型的肺癌的原癌基因，首先我們調(diào)查在低TAZ中過(guò)量表達(dá)TAZ的效應(yīng)，永久化非腫瘤發(fā)生細(xì)胞系，HBE135（圖2a）通過(guò)慢病毒介導(dǎo)的單獨(dú)感染這些細(xì)胞的載體（WPI）或HA—標(biāo)簽（HA-tagged）TAZ.重要的是我們發(fā)現(xiàn)，和通過(guò)和WPI對(duì)HBE135細(xì)胞感染相比較，TAZ在HBE135細(xì)胞的過(guò)量表達(dá)增強(qiáng)了細(xì)胞增殖（圖2b）?此外，HBE135細(xì)胞過(guò)量表達(dá)TAZ而不是WPI需要不依賴錨定的軟瓊脂上生長(zhǎng)，一種轉(zhuǎn)化腫瘤細(xì)胞的表型（圖2c-d）。通過(guò)慢病毒而不是TAZ過(guò)量表達(dá)的非特異性影響引起HBE135細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)化的增強(qiáng),為了消除這種可能性，我們也使HBE135—TAZ細(xì)胞過(guò)量表達(dá)的TAZ基因沉默，從而通過(guò)shRNA對(duì)抗TAZ使其恢復(fù)到原有水平（圖2a）。重要的是，TAZ的基因沉默回復(fù)了TAZ介導(dǎo)的細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)化的增加（圖2b-d），說(shuō)明TAZ介導(dǎo)的表型是特異性的。我們也對(duì)免疫功能不全的裸鼠進(jìn)行皮下注射TAZ過(guò)量表達(dá)的HBE135細(xì)胞來(lái)觀察是否形成腫瘤。在注射兩個(gè)月后沒(méi)有發(fā)現(xiàn)腫瘤形成（數(shù)據(jù)為未展示），說(shuō)明單獨(dú)TAZ的過(guò)量表達(dá)不足以造成HBE細(xì)胞的腫瘤發(fā)生。通過(guò)在HBE細(xì)胞中TAZ過(guò)量表達(dá)引起增強(qiáng)細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)化與在乳腺細(xì)胞中TAZ過(guò)量表達(dá)引起的效應(yīng)相類似。然而，不同于乳腺細(xì)胞，在HBE細(xì)胞的TAZ過(guò)量表達(dá)不能引起EMT并減少鈣黏蛋（E-cadherin）的水平，鈣黏蛋白與癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。這說(shuō)明TAZ可能在整個(gè)肺癌發(fā)生時(shí)期激活腫瘤的形成而不是轉(zhuǎn)移。此外，與我們的發(fā)現(xiàn)相一致，其他原癌基因的過(guò)量表達(dá)，如鼠肉瘤蛋白（腫瘤的標(biāo)志之一）（k-ras）,最為常見的在NSCLC中激活癌基因，或者在永久化HBE細(xì)胞中負(fù)調(diào)控癌抑制基因p53,也引起增長(zhǎng)細(xì)胞的增殖或非停泊性增長(zhǎng)在軟瓊脂中而不是腫瘤細(xì)胞的形成或遷移在裸鼠中。這研究說(shuō)明TAZ單獨(dú)存在可以引起部分HBE細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。因此研究TAZ與其他癌基因或腫瘤抑制基因相互作用的關(guān)系對(duì)于研究TAZ在肺癌細(xì)胞中的作用是非常重要的。抑制NSCLC田胞中的TAZ來(lái)減少腫瘤表型的發(fā)生檢測(cè)TAZ水平提高是否直接有助于檢測(cè)NSCLC中的腫瘤發(fā)生，我們?cè)趦蓚€(gè)高TAZ細(xì)胞系中抑制TAZ:A549andH1299.lentivirus-expressingshRNAstargetingdifferenttregionsofTAZ來(lái)感染shRNA慢病毒載體pLKO.l用作負(fù)調(diào)控。抑制TAZ的A549和H1299兩個(gè)shRNA明顯的抑制腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增。說(shuō)明在NSCLC細(xì)胞中TAZ是重要的在維持腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)中。TAZ抑制對(duì)于細(xì)胞擴(kuò)增的影響并不是脫靶效應(yīng)或者是病毒效應(yīng)。我們也用慢病毒表達(dá)型TAZ突變的cDNA來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞A549-shTAZ-l即在shTAZ-1保持突變的導(dǎo)肽因此用來(lái)阻止shTAZ-1誘導(dǎo)TAZ的降解。重要的是，在TAZ沉默A549細(xì)胞的TAZ回復(fù)突變逆轉(zhuǎn)了由shTAZ-1導(dǎo)致的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制（圖3f）,這說(shuō)明shTAZ減少細(xì)胞增殖是由于NSCLC細(xì)胞的減少引起的。去研究TAZ是否也是重要的在NSCLC腫瘤細(xì)胞發(fā)生中，我們分別用軟瓊脂和裸鼠作為材料來(lái)試驗(yàn)，與pLKO.1慢病毒載體調(diào)控的A549表達(dá)相比較，有TAZ抑制的A549展示了在軟瓊脂上非停泊性增長(zhǎng)的明顯減少和腫瘤在裸鼠體內(nèi)的增長(zhǎng)。這說(shuō)明這種影響并不是由于脫靶效應(yīng)引起的shTAZ。這些結(jié)果不是由shTAZ的脫靶效應(yīng)引起的，因?yàn)橛蓅hTAZ造成在裸鼠中不依賴錨定的生長(zhǎng)和腫瘤發(fā)生的減少，這可以完全通過(guò)重新引入shTNA抗性TAZ突變cDNA逆轉(zhuǎn)為A549-shTAZ-l細(xì)胞（shTAZ-1/TAZ突變cDNA）（圖4a-c）。同時(shí)，這些研究強(qiáng)有力的說(shuō)明TAZ的過(guò)量表達(dá)對(duì)于NSCLC細(xì)胞的腫瘤發(fā)生至關(guān)重要。在了解Hippo-LATS腫瘤抑制通路在調(diào)控細(xì)胞修飾、細(xì)胞死亡和細(xì)胞遷移中所處的角色已取得了巨大的進(jìn)步。然而，在這個(gè)通路中他是如何調(diào)控特殊的癌細(xì)胞還有很多是未知的。我們的研究第一次通過(guò)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外證明在肺癌中TAZ是一種新型的癌基因。TAZ水平的增高可能是作為NSCLC細(xì)胞中腫瘤發(fā)生的應(yīng)答?？偩C合我們的發(fā)現(xiàn)TAZ在NSCLC/