培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB4789.28——2013

食品室：趙文培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求1目錄一貯存二培養(yǎng)基的制備

三滅菌四培養(yǎng)基的使用五培養(yǎng)基質(zhì)量要求目錄一貯存二培養(yǎng)基的制備三滅菌2貯存脫水合成培養(yǎng)基及其添加成分的質(zhì)量管理和質(zhì)量控制脫水合成培養(yǎng)基一般為粉狀或顆粒狀形式包裝于密閉的容器中。用于微生物選擇或鑒定的添加成分通常為凍干物或液體。培養(yǎng)基的購買應(yīng)有計劃，以利于存貨的周轉(zhuǎn)（即掌握先購先用的原則）。實驗室應(yīng)保存有效的培養(yǎng)基目錄清單，清單應(yīng)包括以下內(nèi)容：——容器密閉性檢查；——記錄首次開封日期；——內(nèi)容物的感官檢查貯存3貯存實驗室自制的培養(yǎng)基在保證其成分不會改變條件下保存，即避光、干燥保存，必要時在5℃±3℃冰箱中保存:通常建議平板不超過2周～4周瓶裝及試管裝培養(yǎng)基不超過3個月～6個月除非某些標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒灲Y(jié)果表明保質(zhì)期比上述的更長。建議需在培養(yǎng)基中添加的不穩(wěn)定的添加劑應(yīng)即配即用，除非某些標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒灲Y(jié)果表明保質(zhì)期更長；含有活性化學(xué)物質(zhì)或不穩(wěn)定性成分的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化。貯存4二培養(yǎng)基的配置一般要求實驗室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時，應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，并記錄相關(guān)信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。二培養(yǎng)基的配置一般要求5二培養(yǎng)基的配置實驗用水的電導(dǎo)率在25℃時不應(yīng)超過25μS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4ΜΩcm)，除非另有規(guī)定要求。水的微生物污染不應(yīng)超過103CFU/mL。應(yīng)按GB4789.2，采用平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h進行定期檢查微生物污染。小心稱量所需要的脫水合成培養(yǎng)基（必要時佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸收含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入適量的水充分混合（注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊），然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散，必要時應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前浸泡幾分鐘。二培養(yǎng)基的配置實驗用水的電導(dǎo)率在25℃時不應(yīng)超過25μS6二培養(yǎng)基的制備

pH的測定和調(diào)整用pH測pH，必要時在滅菌前進行調(diào)整，除特殊說明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時，pH應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)pH±0.2范圍內(nèi)。一般使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH。如需滅菌后進行調(diào)整，則使用滅菌或除菌的溶液。

分裝將配好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦校萜鞯捏w積應(yīng)比培養(yǎng)基體積最少大20%。二培養(yǎng)基的制備pH的測定和調(diào)整用pH測pH，必要時7

濕熱滅菌濕熱滅菌在高壓鍋中進行，一般采用121℃±3℃滅菌15min，滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題，加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s，以防加熱過度。過濾除菌可在真空或加壓條件下進行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的各個部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。應(yīng)對經(jīng)濕熱滅菌或過濾除菌的培養(yǎng)基進行檢查，尤其要對pH、色澤、滅菌效果或均勻度指標(biāo)進行檢查。有毒成分添加必要時應(yīng)在通風(fēng)柜中進行。

過濾除菌

檢查

三滅菌濕熱滅菌濕熱滅菌在高壓鍋中進行，一般采用121℃±8融化后的培養(yǎng)基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫直至使用，融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。四培養(yǎng)基的使用四培養(yǎng)基的使用9五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長特性選擇下列方法對每批成品培養(yǎng)基或試劑進行評價：——定量方法；——半定量方法；——定性方法。采用定量方法時，應(yīng)使用參考培養(yǎng)基進行對照；采用半定量和定性方法時，使用參考培養(yǎng)基或能得到“陽性”結(jié)果的培養(yǎng)基進行對照有助于結(jié)果的解釋。參考培養(yǎng)基應(yīng)選擇近期批次中質(zhì)量良好的培養(yǎng)基或是來自其他供應(yīng)商的具有長期穩(wěn)定性的批次培養(yǎng)基或即用型培養(yǎng)基。五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長特性10五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長率按規(guī)定用適當(dāng)方法將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和液體培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基上菌株的生長率應(yīng)達(dá)到所規(guī)定的最低限值。選擇性為定量評估培養(yǎng)基的選擇性，應(yīng)按照規(guī)定以適當(dāng)方法將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至選擇性培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性應(yīng)達(dá)到規(guī)定值。例如：XLD生長率：定量測試(TSA為參比培養(yǎng)基)PR≥0.5選擇性：半定量大腸G<5金葡G≤1五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長率11五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求性能評價和結(jié)果解釋若按照規(guī)定的所有測試菌株的性能測試達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，則該批培養(yǎng)基或試劑的性能測試結(jié)果符合規(guī)定。若基本要求和微生物學(xué)要求均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基或試劑可被接受。五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求12培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求課件13培養(yǎng)基不能凝固制備過程中過度加熱低pH造成培養(yǎng)基酸解稱量不正確瓊脂未完全溶解培養(yǎng)基成分未充分混勻pH不正確制備過程中過度加熱水質(zhì)不佳外部化學(xué)物質(zhì)污染測定pH時溫度不正確pH計未正確校準(zhǔn)脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差顏色異常制備過程中過度加熱水質(zhì)不佳pH不正確外來污染脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差常見問題培養(yǎng)基不能凝固pH不正確顏色異常常見問題14

常見問題產(chǎn)生沉淀制備過程中過度加熱水質(zhì)不佳脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差pH未正確控制原料中的雜質(zhì)培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低的生長率制備過程中過度加熱脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差水質(zhì)不佳使用成分不正確，如成分稱量不準(zhǔn)，添加劑濃度不正確制備容器或水中的有毒殘留物選擇性差制備過程中過度加熱脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差配方使用不對添加成分的加入不正確，例如加入添加成分時培養(yǎng)基過熱或添加濃度錯誤添加劑污染

污染不適當(dāng)?shù)臏缇鸁o菌操作技術(shù)存在問題添加劑污染常見問題產(chǎn)生沉淀培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低的生長率選擇性差15。。16培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求課件17

培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB4789.28——2013

食品室：趙文培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求18目錄一貯存二培養(yǎng)基的制備

三滅菌四培養(yǎng)基的使用五培養(yǎng)基質(zhì)量要求目錄一貯存二培養(yǎng)基的制備三滅菌19貯存脫水合成培養(yǎng)基及其添加成分的質(zhì)量管理和質(zhì)量控制脫水合成培養(yǎng)基一般為粉狀或顆粒狀形式包裝于密閉的容器中。用于微生物選擇或鑒定的添加成分通常為凍干物或液體。培養(yǎng)基的購買應(yīng)有計劃，以利于存貨的周轉(zhuǎn)（即掌握先購先用的原則）。實驗室應(yīng)保存有效的培養(yǎng)基目錄清單，清單應(yīng)包括以下內(nèi)容：——容器密閉性檢查；——記錄首次開封日期；——內(nèi)容物的感官檢查貯存20貯存實驗室自制的培養(yǎng)基在保證其成分不會改變條件下保存，即避光、干燥保存，必要時在5℃±3℃冰箱中保存:通常建議平板不超過2周～4周瓶裝及試管裝培養(yǎng)基不超過3個月～6個月除非某些標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒灲Y(jié)果表明保質(zhì)期比上述的更長。建議需在培養(yǎng)基中添加的不穩(wěn)定的添加劑應(yīng)即配即用，除非某些標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒灲Y(jié)果表明保質(zhì)期更長；含有活性化學(xué)物質(zhì)或不穩(wěn)定性成分的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化。貯存21二培養(yǎng)基的配置一般要求實驗室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時，應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，并記錄相關(guān)信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。二培養(yǎng)基的配置一般要求22二培養(yǎng)基的配置實驗用水的電導(dǎo)率在25℃時不應(yīng)超過25μS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4ΜΩcm)，除非另有規(guī)定要求。水的微生物污染不應(yīng)超過103CFU/mL。應(yīng)按GB4789.2，采用平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h進行定期檢查微生物污染。小心稱量所需要的脫水合成培養(yǎng)基（必要時佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸收含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入適量的水充分混合（注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊），然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散，必要時應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前浸泡幾分鐘。二培養(yǎng)基的配置實驗用水的電導(dǎo)率在25℃時不應(yīng)超過25μS23二培養(yǎng)基的制備

pH的測定和調(diào)整用pH測pH，必要時在滅菌前進行調(diào)整，除特殊說明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時，pH應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)pH±0.2范圍內(nèi)。一般使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH。如需滅菌后進行調(diào)整，則使用滅菌或除菌的溶液。

分裝將配好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦校萜鞯捏w積應(yīng)比培養(yǎng)基體積最少大20%。二培養(yǎng)基的制備pH的測定和調(diào)整用pH測pH，必要時24

濕熱滅菌濕熱滅菌在高壓鍋中進行，一般采用121℃±3℃滅菌15min，滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題，加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s，以防加熱過度。過濾除菌可在真空或加壓條件下進行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的各個部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。應(yīng)對經(jīng)濕熱滅菌或過濾除菌的培養(yǎng)基進行檢查，尤其要對pH、色澤、滅菌效果或均勻度指標(biāo)進行檢查。有毒成分添加必要時應(yīng)在通風(fēng)柜中進行。

過濾除菌

檢查

三滅菌濕熱滅菌濕熱滅菌在高壓鍋中進行，一般采用121℃±25融化后的培養(yǎng)基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫直至使用，融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。四培養(yǎng)基的使用四培養(yǎng)基的使用26五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長特性選擇下列方法對每批成品培養(yǎng)基或試劑進行評價：——定量方法；——半定量方法；——定性方法。采用定量方法時，應(yīng)使用參考培養(yǎng)基進行對照；采用半定量和定性方法時，使用參考培養(yǎng)基或能得到“陽性”結(jié)果的培養(yǎng)基進行對照有助于結(jié)果的解釋。參考培養(yǎng)基應(yīng)選擇近期批次中質(zhì)量良好的培養(yǎng)基或是來自其他供應(yīng)商的具有長期穩(wěn)定性的批次培養(yǎng)基或即用型培養(yǎng)基。五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長特性27五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長率按規(guī)定用適當(dāng)方法將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和液體培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基上菌株的生長率應(yīng)達(dá)到所規(guī)定的最低限值。選擇性為定量評估培養(yǎng)基的選擇性，應(yīng)按照規(guī)定以適當(dāng)方法將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至選擇性培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性應(yīng)達(dá)到規(guī)定值。例如：XLD生長率：定量測試(TSA為參比培養(yǎng)基)PR≥0.5選擇性：半定量大腸G<5金葡G≤1五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求生長率28五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求性能評價和結(jié)果解釋若按照規(guī)定的所有測試菌株的性能測試達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，則該批培養(yǎng)基或試劑的性能測試結(jié)果符合規(guī)定。若基本要求和微生物學(xué)要求均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基或試劑可被接受。五培養(yǎng)基的質(zhì)量要求29培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求課件30培養(yǎng)基不能凝固制備過程中過度加熱低pH造成培養(yǎng)基酸解稱量不正確瓊脂未完全溶解培養(yǎng)基成分未充分混勻pH不正確制備過程中過度加熱水質(zhì)不佳外部化學(xué)物質(zhì)污染測定pH時溫度不正確pH計未正確校準(zhǔn)脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差顏色異常制備過程中過度加熱水質(zhì)不佳pH不正確外來污染脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差常見問題培養(yǎng)基不能凝固pH不正確顏色異常常見問題31

常見問題產(chǎn)生沉淀制備過程中過度加熱水質(zhì)不佳