過敏原檢驗1目錄超敏反應簡介1過敏原檢測的意義2體內(nèi)檢測方法3體外檢測方法4201Part超敏反應簡介3超敏反應定義●超敏反應是機體對某種抗原初次應答后，再次接受相同的刺激，發(fā)生的一種以機體生理功能紊亂

或組織細胞損傷為主的特異性免疫應答。●

導致超敏反應的物質(zhì)叫做過敏原或變應原?！?/p>

天然過敏原很多，但大多是蛋白成分。4超敏反應發(fā)展史發(fā)展史vonPiguet提出了Allergy一詞發(fā)現(xiàn)“血清病”Johansson分離純化得到IgE抗體，研究其分子結構Coombs將變態(tài)反應分為四型石板夫婦發(fā)現(xiàn)速發(fā)變態(tài)反應IgE抗體196720世紀19061963196654種超敏反應類型

TypeITypeII TypeIII TypeIV細胞毒反應IgG/IgM介導血細胞的破壞數(shù)小時到一天輸血反應免疫復合物形成持續(xù)產(chǎn)生IgG/IgM免疫復合物數(shù)小時到一天farmerslungs細胞免疫反應T-細胞介導反應24小時到數(shù)周接觸過敏反應(Ni)早期反應IgE-介導肥大細胞脫顆粒數(shù)分鐘內(nèi)花粉熱64種超敏反應類型

702Part過敏原檢測的意義8常見的過敏原9（1）過敏性疾病的診斷必需明確過敏原ARIA2008標準：I型變態(tài)反應性疾病的診斷根據(jù)典型的過敏癥狀病史和與其相一致的試驗診斷結果共同作出的●試驗診斷：體內(nèi)試驗體外試驗臨床意義（1）10

13個省/自治區(qū)+4個直轄市，214家醫(yī)院，508名醫(yī)師變態(tài)反應鼻炎診療現(xiàn)狀調(diào)查11變態(tài)反應鼻炎診療現(xiàn)狀調(diào)查結果●癥狀+體征，不進行過敏原檢測：61%±29%●綜合病史+過敏原檢測：35%±28%（正確診斷）●進行皮膚點刺試驗和血清sIgE檢查的醫(yī)師分別為74%和20%12（2）過敏性疾病的治療必須明確過敏原過敏性疾病的治療是一項系統(tǒng)工程，WHO推薦“四位一體”的最佳治療方案。避免過敏原對癥藥物治療：抗炎、緩解癥狀特異性免疫治療：SLIT、SCIT患者教育臨床意義（2）13（3）動態(tài)觀察病情變化及轉歸趨勢，指導用藥：減量或停藥臨床意義（3）14（4）給指導病人提供依據(jù)針對性地對患者進行教育早期確定出有可能發(fā)展成變態(tài)反應疾病的高危幼兒，提供機會來防止疾病的加重臨床意義（4）15（5）區(qū)分感染或是過敏性皮疹●總IgE：反應機體過敏狀態(tài)●特異性IgE陽性：過敏引起的皮疹

臨床意義（5）16皮內(nèi)試驗0102皮膚點刺試驗03斑貼試驗04結膜激發(fā)試驗05支氣管激發(fā)試驗等BA體外試驗體內(nèi)試驗過敏原檢測主要方法特異性IgE抗體檢測1703Part體內(nèi)檢測18雙盲安慰劑對照食物激發(fā)試驗(DBPCFC)??????

?點刺法(SPT)皮試法斑貼法體內(nèi)檢測支氣管激發(fā)試驗鼻粘膜激發(fā)試驗19皮膚點刺試驗

●EAACI（歐洲變態(tài)反應及免疫學學會）推薦為最佳體內(nèi)診斷方法，現(xiàn)為歐美公認的最方便、最有效的過敏原診斷方法20點刺試驗原理

●皮膚點刺試驗是一種體內(nèi)特異性免疫學檢測方法●當有少量變應原進入皮膚時，如果肥大細胞上有相應的IgE抗體，該變應原與之結合，經(jīng)過一系列的變化，肥大細胞脫顆粒釋放組胺等炎癥介質(zhì)，這些炎癥介質(zhì)使局部毛細血管擴張（紅斑），通透性增強，滲出增加，最后出現(xiàn)風團和紅暈反應，臨床根據(jù)風團和紅暈反應確定患者的致敏原。21點刺試驗操作步驟1常規(guī)消毒2滴點刺液：依次將變應原點刺液、陰性對照、陽性對照滴在消毒后的皮膚上，距離為3-5厘米3.點刺操作：緊繃皮膚，避開血管，點刺針透過液滴垂直刺入皮膚，不同的液滴更換新的點刺針4拭去殘夜5.觀察結果：點刺10-15分鐘后觀察點刺結果，測量陰性對照、粉塵螨點刺液、陽性對照的點刺部位產(chǎn)生風團的面積，并記錄22過敏原食入組吸入組23注意事項一

---試驗前進行點刺試驗前患者的情況如果以下準則未得到遵循，點刺試驗必須延遲試驗前3天必須停服所有抗組胺藥。息斯敏需停藥7天以上試驗前1天,必須停用10mg的全身性強的松龍。試驗前1天,不能在將行點刺試驗的臂部使用可的松油膏。其他藥物可如常使用。請注意，每次都要詢問患者是否遵循了上述的準則點刺液應儲存在2－8C的冷藏柜中。24■詢問患者是否有過敏性休克或嚴重的過敏不良反應有過敏休克史的患者，建議用血清sIgE檢測有嚴重食物過敏史，出現(xiàn)嚴重不良反應的患者，如食物引起的全身蕁麻疹建議使用血清sIgE檢測?！?/p>

詢問患者是否有暈針注意事項一

---試驗前25■詢問患者是否有劃痕癥

皮膚劃痕癥患者建議使用血清IgE檢測如果點刺試驗發(fā)現(xiàn)是皮膚劃痕癥患者，建議半個小時后觀察結果（點刺風團可以維持45分鐘以上，劃痕癥風團維持30分鐘）■

詢問患者是否有酒精過敏注意事項一

---試驗前26試驗是在前臂的內(nèi)側進行；液滴間距離3-5cm，最少2cm；點刺時繃緊皮膚；每種點刺液使用一根新的點刺針。注意事項二

---試驗中27注意事項三

---試驗中

常見錯誤點刺點距離太近(<2cm)；出血；針刺深度太淺；點刺液濺出或混合。28注意事項四

---試驗后讀取10－20分鐘后；測量的是風團或腫塊，描記后用透明膠帶記錄下來，將反應大小轉移到適當?shù)谋砀裰?，用mm紙測量直徑；如果陰性對照有反應，常常是壓力性蕁麻疹/皮膚劃痕/皮膚非常敏感的標志，因而經(jīng)常對所有的點刺都有反應。29結果解讀0-25%（-）：陰性對照反應26%-99%（++或+）：變應原試液的皮膚反應強度較組胺反應弱100%（+++）：變應原試液的皮膚反應強度與組胺反應相似100%以上（++++）：變應原試液的皮膚反應強度大于組胺反應注：1點刺陽性反應的強弱，反應的是受試者皮膚敏感程度，并不表示疾病的嚴重程度。即并不是點刺反應越強，疾病越嚴重2點刺分級與受試者過敏癥狀的嚴重程度有關系，但不是正相關30體內(nèi)和體外檢測方法比較3104Part體外檢測32體外檢測過敏原技術33體外檢測過敏原技術34一嗜堿性粒細胞活化試驗FlowCAST?BasophilActivationTest(BAT)35也有研究定量測Th2細胞以檢測牛奶中的特異性抗原36ELISA法或捕獲法熒光酶免法（FEIA）免疫印跡法生物芯片化學發(fā)光免疫法膠體金法二基于過敏原蛋白的檢測方法37ImmunoCAPTM檢測項目總IgE特異性IgE●過篩試驗●單價S-IgE檢測●多價S-IgE檢測●組分過敏原檢測嗜酸性粒細胞陽離子蛋白ECP（評價氣道炎癥狀況）。IgG&IgG4（評價特異性免疫治療的反應）。類胰蛋白酶（嚴重過敏反應標志物）。自身免疫性疾病診斷。

熒光酶免法（FEIA）38

過篩試驗吸入性過敏原過篩試驗(Phadiatop)食物過敏原過篩試驗(Fx5)

●包括6種最常見的食物變應原

——雞蛋白、牛奶、小麥、花生、大豆、魚●檢測結果直接客觀兒童吸入性過敏原篩選試驗(PhadiatopInfat)

39推薦檢驗組合TPF:T-IgE+Phadiatop+Fx540過敏原檢測流程臨床病史T-IgE+Phadiatop+Fx5Phadiatop陽性：螨、寵物、真菌系列三個花粉系列IgE檢測Fx5陽性：分別測定單價特性性IgE食譜分析

41不同項目組合舉例42項目意義總IgE反應機體過敏狀態(tài)；兒童>50ku/L為異常嗜酸細胞陽離子蛋白ECP反應氣道炎癥情況；兒童>15ug/L為升高吸入物過敏原過篩試驗Phadiatop>0.35ku/L陽性（P）

陰性（N）食入物過敏原過篩試驗fx5>0.35ku/L陽性（P）

陰性（N）特異性IgE目前主要是螨蟲檢查有粉塵螨、戶塵螨、真菌結果解釋43PharmaciaCAP特點檢測結果真實、可靠、重復性好靈敏度高，特異性好全自動化，減少實驗室工作量，提高檢測效率檢測結果全定量，指導臨床脫敏治療和兒童早期診斷完善檢測項目，600多種過敏原和80多種組分過敏原44免疫印跡法檢測項目免疫印跡法45類別濃度[kU/l]結果條帶特性0<0.35kU/l未檢出特異性抗體。未出現(xiàn)條帶（0）10.35kU/l-0.7kU/l弱特異性抗體，通常沒有臨床癥狀，但比較敏感。弱條帶（+）20.7kU/l-3.5kU/l弱特異性抗體，如果濃度在該類別的上限，則通常有臨床癥狀。33.5kU/l-17.5kU/l特異性抗體濃度明顯。通常出現(xiàn)臨床癥狀。清晰的條帶（++）417.5kU/l-50kU/l高濃度的特異性抗體?？偸浅霈F(xiàn)臨床癥狀。550kU/l-100kU/l特異性抗體滴度很高。染色很深的條帶（+++）6>100kU/l特異性抗體滴度很高。結果解釋46

檢測的過敏原臨床癥狀解釋CCD陽性只有1個過敏原陽性有此陽性結果為致敏的過敏原無此陽性結果是CCD引起的，不一定是致敏物1個以上陽性有根據(jù)臨床癥狀，如果有和臨床不符的陽性可能是CCD引起的無這些陽性時又CCD引起的全部陰性有檢測產(chǎn)品中不含致敏的過敏原無無過敏增加CCD指示帶，解釋交叉反應的假陽性結果47免疫印跡法特點快速測試過敏原，整個過程只需2.5-3個小時包被有CCD指示帶，解釋交叉反應的假陽性結果血清用量少0.5-1ml，一管血檢測多種過敏原與PharmaciaCAP具有良好的相關性48化學發(fā)光免疫法49全定量過敏原22種sIgE+總IgE+14中sIgG+....全自動過敏原化學發(fā)光診斷系統(tǒng)50化學發(fā)光免疫法特點原料全部采用我國本土自產(chǎn)過敏原，涵蓋最常見品種特異性IgE、總IgE獨立雙標曲線，穩(wěn)定性，重復性好靈敏度高全自動人機分離，檢測時間短51膠體金法（POCT）●簡單快速，25分鐘出結果●室內(nèi)保存，方便配送52膠體金法特點原料全部采用我國本土自產(chǎn)過敏原，涵蓋最常見品種無需配套設備簡單快速，25分鐘出結果室溫保存，方便運送53其它快速檢測方法54其它ELISA試劑盒美國公司生產(chǎn)的過敏反應體外檢測系統(tǒng)(檢測IVT法），為ELISA試驗，根據(jù)顏色反應判斷陰、陽性，該法特異性比較好，但耗時長。有些自動免疫分析儀都配有相應的過敏原檢測試劑盒，如美國梅里埃Stallertest檢測系統(tǒng)，但此儀器試劑都很昂貴。55ImmunoCAP?ISAC-新型生物芯片用少量的標本即可對多種過敏原進行臨床評估56有研究報道新的生物芯片與ImmunoCAP?ISAC相比，該芯片只需2微