高通量測序技術(shù)(jìshù)平臺流程及應(yīng)用第一頁，共10頁?；蚪MDNA的隨機打斷(dǎduàn)↓DNA片段的末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上特定接頭↓PCR擴增連上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation的成簇擴增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的測序↓生物信息組裝/分析IlluminaDNAFragment文庫(wénkù)測序流程第二頁，共10頁。IlluminaMate-pair文庫(wénkù)測序流程基因組DNA隨機打斷特定大小片段（2-10kb范圍可選）↓末端修復(fù)↓生物素標記↓環(huán)化↓獲得來自大片段兩端共計400-600bp的DNA片段↓修飾、加接頭↓PCR擴增連上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation上的成簇擴增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息(xìnxī)組裝/分析第三頁，共10頁。IlluminaSmallRNA測序流程(liúchéng)從總RNA中分離smallRNA↓5′接頭(jiētóu)連接和純化↓3′接頭(jiētóu)連接純化↓RT-PCR擴增↓SmallRNA文庫的純化↓文庫的檢測↓DNA在ClusterStation成簇擴增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析第四頁，共10頁。在DNA片段的末端加上特定接頭獲得來自大片段兩端共計400-600bp的DNA片段PCR擴增連上接頭的DNA片段文庫的檢測(jiǎncè)IlluminaGenomeAnalyzer上的測序Illumina數(shù)字化表達(biǎodá)譜測序流程3′接頭(jiētóu)連接純化DNA片段末端加上特別處理的甲基化接頭將‘A’堿基加入到DNA片段的3‘末端TotalRNA的DNaseI酶消化mRNA分離和隨機打斷PCR擴增連上接頭的DNA片段連接GEXNlaIIIAdapter13′接頭(jiētóu)連接純化IlluminaGenomeAnalyzer上的測序Illumina數(shù)字化表達(biǎodá)譜測序流程mRNA的分離和cDNA第一鏈的合成↓cDNA第二鏈的合成↓限制性內(nèi)切酶NlaIII的酶切↓連接GEXNlaIIIAdapter1↓限制性內(nèi)切酶MmeI的酶切↓連接GEXAdapter2↓Adapter連接cDNA產(chǎn)物和PCR富集↓文庫的檢測(jiǎncè)↓DNA在ClusterStation上的成簇擴增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析第五頁，共10頁。TotalRNA的DNaseI酶消化↓mRNA分離和隨機打斷↓cDNA第一鏈和第二鏈的合成↓DNA片段的末端修復(fù)↓將“A”堿基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上特定接頭↓PCR擴增連上接頭的DNA片段↓文庫的檢測(jiǎncè)↓DNA在ClusterStation上的成簇擴增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析Illumina轉(zhuǎn)錄(zhuǎnlù)組測序流程第六頁，共10頁。基因組DNA隨機打斷(dǎduàn)↓DNA片段的末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3’末端↓DNA片段末端加上特別處理的甲基化接頭↓重亞硫酸鹽處理↓去鹽處理↓PCR擴增連上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation上的成簇擴增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析IlluminaDNA甲基化測序流程(liúchéng)第七頁，共10頁。染色質(zhì)免疫共沉淀↓目的DNA片段↓DNA片段的末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3‘末端↓DNA片段末端加上接頭↓PCR擴增加上接頭的DNA片段↓文庫(wénkù)檢測↓DNA在ClusterStation成簇擴增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析IlluminaChIP-seq測序流程(liúchéng)第八頁，共10頁。Meta基因組的提取↓DNA隨機打斷↓DNA片段末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上接頭↓純化連接產(chǎn)物↓PCR擴增連上接頭的DNA片段↓文庫的檢測(jiǎncè)↓DNA在ClusterStation的成簇擴增↓Illumina