病毒感染的檢查方法

與防治原則

第1頁(yè)，共23頁(yè)。

第一節(jié)病毒感染的檢查一、標(biāo)本的采集與送檢

用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：a、采集急性期標(biāo)本b、采集感染部位標(biāo)本c、冷藏

血清學(xué)診斷的標(biāo)本：急性期和恢復(fù)期雙份血清，-20℃保存第2頁(yè)，共23頁(yè)。二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定

（一）病毒的分離培養(yǎng)1.最常用細(xì)胞培養(yǎng)2.雞胚接種：主要用于流感病毒的分離3.動(dòng)物接種少用：主要用于狂犬病病毒、乙型腦炎病毒的分離第3頁(yè)，共23頁(yè)。第4頁(yè)，共23頁(yè)。常用的細(xì)胞培養(yǎng)第5頁(yè)，共23頁(yè)。（二）病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)1.細(xì)胞變化CPE、多核巨細(xì)胞、包涵體2.紅細(xì)胞吸附3.干擾現(xiàn)象4.細(xì)胞代謝改變第6頁(yè)，共23頁(yè)。第7頁(yè)，共23頁(yè)。病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)正常細(xì)胞病變細(xì)胞①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落1細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)第8頁(yè)，共23頁(yè)。麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞第9頁(yè)，共23頁(yè)。③形成包涵體(inclusionbody)第10頁(yè)，共23頁(yè)。（三）病毒數(shù)量和感染性測(cè)定1、蝕斑試驗(yàn)2、ID50或TCID50病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱(chēng)蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱(chēng)蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來(lái)表示。第11頁(yè)，共23頁(yè)。三、病毒感染的血清學(xué)診斷四、病毒的快速診斷（一）形態(tài)學(xué)檢查（二）檢測(cè)病毒抗原抗體測(cè)病毒感染脫落細(xì)胞或分泌物細(xì)胞中的抗原（三）檢測(cè)病毒抗體已知抗原測(cè)血清中抗體測(cè)IgM，或動(dòng)態(tài)測(cè)IgG（雙份血清）（四）檢測(cè)病毒核酸PCR試驗(yàn)引物核酸雜交試驗(yàn)探針

基因芯片技術(shù)第12頁(yè)，共23頁(yè)。病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體

病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶

電鏡直接觀(guān)察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)第13頁(yè)，共23頁(yè)。.第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防第14頁(yè)，共23頁(yè)。滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品第15頁(yè)，共23頁(yè)。二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品

免疫球蛋白

血清丙種球蛋白

細(xì)胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞——LAK細(xì)胞

第16頁(yè)，共23頁(yè)。人工被動(dòng)免疫（artificialpassiveimmunization）如：1.血清免疫球蛋白用于甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎預(yù)防2.高效價(jià)含乙肝病毒表面抗體的免疫球蛋白用于預(yù)防母嬰乙肝傳播第17頁(yè)，共23頁(yè)。策略：阻斷病毒復(fù)制周期中吸附穿入、

脫殼、核酸復(fù)制、或裝配釋放任一環(huán)節(jié)，從而抑制病毒復(fù)制要求：抗病毒藥物能穿入細(xì)胞選擇性地抑制病毒復(fù)制又不損傷宿主細(xì)胞第三節(jié)病毒感染的治療第18頁(yè)，共23頁(yè)。

核苷類(lèi)藥物非核苷類(lèi)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病毒化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

第19頁(yè)，共23頁(yè)。一、藥物治療1.核苷類(lèi)藥物

2.病毒蛋白酶抑制劑3.天然藥物如中藥二、基因治療1.反義寡核苷酸2.核酶3.干擾RNA三、免疫治療

1.中和抗體（單抗）2.治療性疫苗3.干擾素第20頁(yè)，共23頁(yè)。一、藥物治療

（一）核苷類(lèi)藥物1.抑制病毒基因復(fù)制碘尿苷(皰疹凈)用異常嘧啶取代胸腺嘧啶,眼皰疹病毒感染。也可滲入細(xì)胞DNA,故有毒性。

無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(啊昔洛韋)，競(jìng)爭(zhēng)病毒復(fù)制酶。2.抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄：病毒唑

（二）蛋白酶抑制劑“雞尾酒”治療HIV，3TC加蛋白酶抑制物

（三）天然藥物：黃芪、板藍(lán)根、大青葉第21頁(yè)，共23頁(yè)。

二、基因治療

1.反義寡核苷酸、反義寡核脫氧核酸(反義RNA、反義DNA)與病毒DNARNA關(guān)鍵基因互補(bǔ)

2.核酶：病毒RNA結(jié)合,切割降解靶RNA

3.感染RNA

三、免疫治療1.中和抗體（單抗）2.治療性疫苗3.干擾素第22頁(yè)，共23頁(yè)。內(nèi)容梗概病毒感染的檢查方法

與防治原則。3.動(dòng)物接種少用：主要用于狂犬病病毒、乙型腦炎病毒的分離。CPE、多核巨細(xì)胞、包涵體。①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落。1細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)。2、ID50或TCID50。病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱(chēng)蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱(chēng)蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來(lái)表示?？贵w測(cè)病毒感染脫落細(xì)胞或分泌物細(xì)胞中的抗原。（三）檢測(cè)病毒抗體已知抗原測(cè)血清中抗體測(cè)IgM，或動(dòng)態(tài)測(cè)IgG（雙份血清）。PCR試驗(yàn)引物。核酸雜交試驗(yàn)探針。重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）。核酸疫苗（nucleicac