酶工程(原理及應用)鄭穗-mail:spzheng@第六章酶的非水相催化1、酶催化反應的介質2、有機介質反應體系

3、酶在有機介質中的催化特性

4、有機介質中酶催化反應的條件及其控制

GoGoGoGo5、酶非水相催化的應用

Go6.1酶催化反應的介質水是酶促反應最常用的反應介質。但對于大多數(shù)有機化合物來說，水并不是一種適宜的溶劑。因為許多有機化合物(底物)在水介質中難溶或不溶。由于水的存在，往往有利于如水解、消旋化、聚合和分解等副反應的發(fā)生。是否存在非水介質能保證酶催化？？1984年，克利巴諾夫（Klibanov）等人在有機介質中進行了酶催化反應的研究，他們成功地在利用酶有機介質中的催化作用，獲得酯類、肽類、手性醇等多種有機化合物，明確指出酶可以在水與有機溶劑的互溶體系中進行催化反應。6.2有機介質反應體系非極性有機溶劑酶懸浮體系(微水介質體系)

用非極性有機溶劑取代所有的大量水，使固體酶懸浮在有機相中。但仍然含有必需的結合水以保持酶的催化活性(含水量一般小于2%)。 酶的狀態(tài)可以是結晶態(tài)、凍干狀態(tài)、沉淀狀態(tài)，或者吸附在固體載體表面上。與水互溶的有機溶劑水單相體系 有機溶劑與水形成均勻的單相溶液體系。酶、底物和產物都能溶解在這種體系中。非極性有機溶劑水兩相/多相體系 由含有溶解酶的水相和一個非極性的有機溶劑(高脂溶性)相所組成的兩相體系。不管采用何種有機介質反應體系，酶催化反應的介質中都含有機溶劑和一定量的水。它們都對催化反應有顯著的影響。反應體系對酶酯化反應的影響反應體系含1-三甲基硅-1-乙醇10mM，戊酸10mM，內標正十五烷，脂肪酶50mg，30℃，120rpm條件下振蕩反應1：水飽和正已烷10ml，2∶pH7.2緩沖液5ml+正已烷10ml反應體系中水對酶催化反應的影響酶都溶于水，只有在一定量的水存在的條件下，酶分子才能進行催化反應。所以酶在有機介質中進行催化反應時，水是不可缺少的成分之一。有機介質中的水含量多少對酶的空間構象、酶的催化活性、酶的穩(wěn)定性、酶的催化反應速度等都有密切關系，水還與酶催化作用的底物和反應產物的溶解度有關。酶分子只有在空間構象完整的狀態(tài)下，才具有催化功能。在無水的條件下，酶的空間構象被破壞，酶將變性失活。故此，酶分子需要一層水化層，以維持其完整的空間構象。維持酶分子完整的空間構象所必需的最低水量稱為必需水（essentialwater）。有機介質中水的含量對酶催化反應速度有顯著影響。存在最適水含量。反應體系中有機溶劑對酶催化反應的影響常用的有機溶劑有辛烷，正己烷，苯，吡啶，季丁醇，丙醇，乙腈，已酯，二氯甲烷等。在水溶液中，酶分子均一地溶解于水溶液中，可以較好地保持其完整的空間結構。在有機溶劑中，酶分子不能直接溶解，而是懸浮在溶劑中進行催化反應。根據(jù)酶分子的特性和有機溶劑的特性的不同，保持其空間結構完整性的情況也有所差別。極性較強的有機溶劑，如甲醇，乙醇等，會奪取酶分子的結合水，影響酶分子微環(huán)境的水化層，從而降低酶的催化活性,甚至引起酶的變性失活。因此應選擇好所使用的溶劑，控制好介質中的含水量，或者經過酶分子修飾提高酶分子的親水性，避免酶在有機介質中因脫水作用而影響其催化活性。有機溶劑與水之間的極性不同，在反應過程中會影響底物和產物的分配，從而影響酶的催化反應。本章目錄酶在有機介質中由于水分子的減少，相對來說酶分子的構象表現(xiàn)出比水溶液中更具有“剛性”特點。因而使通過選擇不同性質的溶劑來調控酶的某些特性成為可能。例如在有機溶劑中，可以利用酶與配體的相互作用性質，誘導改變酶分子的構象，調控酶的底物專一性,、立體選擇性和手性選擇性等。由于引起酶變性的許多因素都與水的存在有關,因此在有機介質中酶的穩(wěn)定性得到顯著提高。由于有機溶劑的存在,水量減少，大大降低了許多需要水參與的副反應，如酸酐的水解、氰醇的消旋化和?；D移等。在有機介質中進行的酶促反應，可以省略產物的萃取分離過程,提高收率。有機介質酶催化反應的優(yōu)點6.4有機介質中酶催化反應的條件及其控制酶在有機介質中可以催化多種反應，主要包括：合成反應、轉移反應、醇解反應、氨解反應、異構反應、氧化還原反應、裂合反應等。主要應控制的條件有酶的種類和濃度底物的種類和濃度有機溶劑的種類水含量溫度pH離子強度本章目錄手性藥物兩種對映體的藥理作用

藥物名稱有效對映體的作用另一種對映體的作用普萘洛爾（Propranolol）萘普生（Neproxen）青霉素胺（Penicillamine）羥基苯哌嗪(Dropropizine)反應停（Thalidomide）酮基布洛芬（Ketoprofen）喘速寧（Trtoquinol）乙胺丁醇（Ethambutol）萘必洛爾（Kebivolol）S構型，治療心臟病,β-受體阻斷劑S構型，消炎、解熱、鎮(zhèn)痛S構型，抗關節(jié)炎S構型，鎮(zhèn)咳S構型，鎮(zhèn)靜劑S構型，消炎S構型，擴張支氣管S,S構型，抗結核病右旋體，治療高血壓,β-受體阻斷劑R構型，鈉通道阻滯劑R構型，療效很弱R構型，突變劑R構型，有神經毒性R構型，致畸胎R構型，防治牙周病R構型，抑制血小板凝集R,R構型，致失明左旋體，舒張血管1992年，美國FDA明確要求對于具有手性特性的化學藥物，都必需說明其兩個對映體在體內的不同生理活性、藥理作用以及藥物代謝動力學情況。許多國家和地區(qū)也都制定了有關手性藥物的政策和法規(guī)。這大大推動了手性藥物拆分的研究和生產應用。目前提出注冊申請和正在開發(fā)的手性藥物中，單一對映體藥物占絕大多數(shù)。脂肪酶-位置選擇性酯化反應葡萄糖苷-6-O-?；苌锸且环N可生物降解的非離子表面活性劑，它可以用脂肪酸和葡萄糖苷在脂肪酶催化下進行選擇性酯化得到：糖酯的合成脂肪酶-消旋化合物選擇性酯化以2-取代-1,3-丙二醇和脂肪酸為原料，在有機溶劑介質中用脂肪酶(CCL)或豬肝酯酶（PLE）催化酯化反應，可得到較高光學純度的R-或S-酯。脂肪酶-消旋化合物的拆分有機介質中用脂肪酶(PSL)催化酯化用于γ-羥基-α,β-不飽和酯的拆分。可以避免副反應的發(fā)生。生物柴油生物柴油是利用生物油脂生產的有機燃料，是由動物、植物或微生物油脂與小分子醇類經過酯交換反應而得到的脂肪酸酯類物質?？梢源娌裼妥鳛椴裼桶l(fā)動機的燃料使用。

生物油脂的來源：